Норма расход: Недопустимое название — Викисловарь

15.06.2021 alexxlab

Содержание

Нормальный расход моторного масла и отклонения от нормы

Содержание

В процессе эксплуатации автомобиля неизбежно происходит уменьшение объема моторного масла в системе смазки двигателя. При этом замечено, что в машинах нового поколения расход выше, чем в старых авто. Это связано с ростом нагрузки на детали, которая не всегда пропорциональна запасу их прочности. Масло вместе с газами попадает в область картера, а затем в камеру сгорания под действием постоянно возрастающего давления в цилиндрах. Если же автомобиль оснащен турбонаддувом, расход смазочного материала возрастает еще больше. Уплотнения турбокомпрессора негерметичны, и определенное количество масла обязательно проникает в компрессорную часть и далее в цилиндры. Помимо обычного угара, причиной перерасхода смазочного материала часто становится износ деталей двигателя, утечки, испарение. Какой расход масла в двигателе считается нормальным и как не допустить отклонений от нормы?

Как рассчитать расход

Потребление масла рассчитывают как величину, равную объему смазочного материала, затраченного на сжигание 100 л топлива.

Т. е. для определения нормы учитывают не пробег автомобиля, а именно количество израсходованного горючего. Такая цифра будет более точной, т. к. горюче-смазочные материалы расходуются не только во время движения, но и при вынужденном простаивании в пробках. Расход смазочного материала определяют разными способами, например по формуле:

Q_р = V/(P × k), где:

Q_р– вместимость системы смазки транспортного средства;
P – количество израсходованного горючего;
k – коэффициент, который учитывает износ поршневой группы. Для дизельных двигателей этот показатель принимают равным 1,25, для бензиновых – 1,15, с турбонаддувом – 1,3.

Норма расхода на угар

Количество масла, убывающего вследствие угара, различается в зависимости от типа авто. Для легкового автомобиля нормальным показателем считают 0,005–0,025 % на 100 л горючего. Т. е. если машина расходует 10 литров топлива на 100 км пути, то после 1000 км пробега будет израсходовано 5–25 г смазочного материала.

Если двигатель неновый или турбированный, эти цифры могут быть значительно больше – до 0,1 % на 100 литров (100 г на 1000 км) и более. Силовой агрегат грузового автомобиля расходует масло в объеме, составляющем 0,3–0,4 % от количества потребляемого топлива. Изношенный дизельный мотор может сжигать до 0,8 % смазочной жидкости на 100 л горючего (200 грамм на 1000 км). Важно помнить, что нормы расхода возрастают для двигателей после капремонта и агрегатов, эксплуатируемых в течение 5 и более лет.

Почему случаются отклонения от нормы

Около 80 % масла, расходуемого в процессе эксплуатации машины, приходится на угар. Даже в новом и исправном двигателе некоторая часть смазочного материала остается на стенках цилиндров после прохождения маслосъемных колец и попадает в камеру сгорания. Самый высокий угар – у авто на обкатке и с чрезмерно изношенным силовым агрегатом. Помимо прочего, моторное масло имеет свойство испаряться. Чем выше температура жидкости, тем интенсивнее происходит этот процесс.

Самая распространенная причина перерасхода автомасел – утечки через сальники коленвала и распредвалов, прокладки головки блока цилиндров, клапанные крышки, уплотнения масляных фильтров и т. д. Пробой прокладки ГБЦ может стать причиной попадания смазочного материала в систему охлаждения. Повышенный расход гарантированно будет у некачественного масла, поэтому важно пользоваться продукцией проверенных брендов, например Sintec от АО «Обнинскоргсинтез».

Расход топлива Renault Duster 2017-2018

Расход топлива на Рено Дастер 2017-2018 зависит от модели автомобиля, его технических характеристик, типа КПП, мощности двигателя, времени года, стиля вождения, а также условий эксплуатации.

Для того, чтобы горючее на Renault Duster расходовалось в пределах заводских норм, необходимо следить за:

Технической исправностью двигателя, подвески и трансмиссии;
Давлением в шинах;
Качеством горючего.

Заводские нормы расхода топлива Renault Duster на 100 км

Нормы рассчитаны с учетом качественного горючего, нормального давления в колесах и комплектации машины:

	Городской режим, л	Трасса, л	Смешанный режим, л
Дизельный автомобиль	5,9	5	5,3
Внедорожник с двигателем 2 л и МКП	10,1	6,5	7,8
Внедорожник с двигателем 2 л и АКП	11,3	7,2	8,7
Кроссовер с двигателем 1,6 л и 5 МКП	9,3	6,3	7,4
Внедорожник с двигателем 1,6 л и МКП	9,1	6,8	7,6

Зимой потребление горючего возрастает в среднем на 1,5 л.

Предложения о продаже Рено Дастер от компании АВАНТАЙМ

^®

Компания АВАНТАЙМ^®, официальный дилер Renault , предлагает следующие модели внедорожников и кроссоверов с распределенной электронной системой впрыска:

Внедорожники:
- Дизельные, с полным приводом (1,5 л) и 6 МКПП;
- Бензиновые, с полным приводом (2,0 л) с 6-ти ступенчатой механикой и АКПП;
- Бензиновые, с полным приводом (1,6 л) с 6-ти ступенчатой механикой.
Компактные бензиновые кроссоверы с передним приводом (1,6 л) с 5-ти ступенчатой механикой.

С более подробной информацией о Renault Duster Вы можете ознакомиться на нашем сайте. Высококвалифицированные специалисты компании АВАНТАЙМ^® всегда готовы ответить на Ваши вопросы. Для наших клиентов доступны:

Выгодные кредитные программы;
Трейд-ин;
Автострахование;
Кузовные работы;
Профессиональное сервисное обслуживание.

Мы подробно расскажем Вам о достоинствах каждой модели и подберем комплектацию и тип двигателя под Ваши требования.

Тест-драйв поможет оценить автомобиль в движении, а специальные предложения сделают цены еще привлекательнее. Наш технический центр всегда готов принять Ваш автомобиль для проведения как гарантийного, так и текущего ремонта.

Транспортный консалтинг

Что говорят те, кто внедрил в свою организацию решения ООО «Транспортный консалтинг»

… c ООО «Транспортный консалтинг» сотрудничаем с 2014 года, благодаря этому транспортная инспекция, при проверке, была очень удивлена — сказали, что первый раз пишут акт с выводом “недостатков нет”. Сотрудничество с Вашим коллективом во главе с Константином Зворыгиным доставляет огромное удовлетворение. Это улучшение качества работы по БДД, экономия времени на изучение и воплощение в жизнь руководящих документов и многое другое. Огромное Вам спасибо! Надеюсь на дальнейшее сотрудничество!

— Александр Вознюк ООО «Фундамент», г. Симферополь, Республика Крым

“ …Константин! Здравствуйте! Вы занимаетесь очень полезным делом! При непрозрачности нашего законодетельства в общем и в БДД в частности, Вы по-сути нарабатываете правоприменительную практику. Имел удовольствие воспользоваться плодами Вашего труда (покупал через Интернет Ваш шаблон документов на Москву). В принципе больше вопросов не возникало, разжевано досканально (кроме Положения о стажировке, но мы это с Вами обсуждали). Поэтому далее с удовольствием буду принимать участие в обсуждении вопросов, связанных с БДД. А так спасибо еще раз. Всем рекомендую, полезный пакет документов.”

— Лукашевич Андрей Оттович, Клинический центр восстановительной медицины и реабилитации

…Спасибо Вам огромное за сайт с полезными статьями, особенно по теме БДД. Они оказались весьма кстати, как и Ваши уроки, направленные по электронной почте. С Вашей помощью удалось грамотно обосновать свои возражения на предписание ГИБДД и самим разобраться в требованиях действующего законодательства, при этом получить уверенность, что все делаешь правильно.

Аттестация ответственных за БДД. Такое требование ГИБДД предъявляет к нам регулярно — каждую проверку, которую осуществляет каждые два года, в связи с чем начали возникать сомнения в собственной правоте… Как правильно Вы заметили — пройти обучение и аттестацию никто не запрещает.

СПАСИБО.

— председатель правового комитета Управления финансов Администрации Томского района

ОАО «НИИАТ» — Расчет норм расхода топлива

Норма расхода топлив и смазочных материалов применительно к автомобильному транспорту подразумевает установленное значение меры его потребления (нормативного расхода топлива) при работе автомобиля конкретной модели, марки или модификации.

Нормы расхода топлив и смазочных материалов на автомобильном транспорте предназначены для расчетов нормативного значения расхода топлив по месту потребления, для ведения статистической и оперативной отчетности, определения себестоимости перевозок и других видов транспортных работ, планирования потребности предприятий в обеспечении нефтепродуктами, для расчетов по налогообложению предприятий, осуществления режима экономии и энергосбережения потребляемых нефтепродуктов, проведения расчетов с пользователями транспортными средствами, водителями и т.

д.

При нормировании расхода топлив различают базовое значение расхода топлив, которое определяется для каждой модели, марки или модификации автомобиля в качестве общепринятой нормы, и расчетное нормативное значение расхода топлив, учитывающее выполняемую транспортную работу и условия эксплуатации автомобиля.

В соответствии с нормативным документом «НОРМЫ РАСХОДА ТОПЛИВ И СМАЗОЧНЫХ МАТЕРИАЛОВ НА АВТОМОБИЛЬНОМ ТРАНСПОРТЕ», утвержденным распоряжением Минтранса России № АМ-23-р от 14 марта 2008 г. (в ред. распоряжений Минтранса России от 14.05.2014 № НА-50-р, от 14.07.2015 № НА-80-р, от 6.04.2018 №НА-51-р, от 20.09.2018 № ИА-159-р), для моделей, марок и модификаций автомобильной техники, поступающей в автопарк страны, на которую Минтрансом России не утверждены нормы расхода топлив (отсутствующие в данном документе), руководители местных администраций регионов и предприятий могут вводить в действие своим приказом нормы, разработанные по индивидуальным заявкам в установленном порядке научными организациями, осуществляющими разработку таких норм по специальной программе-методике.

Специалисты ОАО НИИАТ рассчитывают нормы расходы топлива для моделей, марок и модификаций автомобильной техники по специальной программе-методике Р 031112134-0367-97, утвержденной Минтрансом России. Для выполнения расчета необходимо заполнить заявку по установленной форме и отправить в научно-исследовательский отдел «Применение топливно-смазочных и эксплуатационных материалов (ТСЭМ) в транспортном комплексе».

Норма расхода тракторов opex.ru

Array ( [DATE_ACTIVE_FROM] => 15.07.2020 13:59:00 [~DATE_ACTIVE_FROM] => 15.07.2020 13:59:00 [ID] => 509191133 [~ID] => 509191133 [NAME] => Норма расхода тракторов [~NAME] => Норма расхода тракторов [IBLOCK_ID] => 33 [~IBLOCK_ID] => 33 [IBLOCK_SECTION_ID] => [~IBLOCK_SECTION_ID] => [DETAIL_TEXT] =>

Одной из базовых составляющих любого трактора в конструктивном плане является двигатель, который должен соответствовать определенному уровню мощности. Связано это с функционалом машины, которая предназначена для выполнения ряда тяжелых земляных работ. Последние предполагают значительный расход топлива, поэтому возникает необходимость расчета этого показателя с целью дальнейшего планирования на весь сезон.

Норма расхода ГСМ дает возможность рассчитать все затраты, включая бюджет на топливо. Но важно при этом учитывать все факторы, влияющие на этот показатель. Здесь идет речь о неравномерности грунта, регулярной смены нагрузки вследствие изменения плотности, биения в прицепных агрегатах и т. д. Все это в сумме позволяет определить максимальные и минимальные величины расхода ГСМ для тракторов. Например, минимальные объемы подойдут для ситуации с перемещением по ровным дорожным поверхностям.

Нормированные расходы топлива

Каждый производитель под каждую из модификаций техники указывает нормированные величины расхода ГСМ. Они определяются на основании характеристик ДВС и всех агрегатов, которые будут подключаться к нему. Для различных операций норма будет различаться:

Для движения по дорожному покрытию без прицепа или иных устройств. Например, трактор типа Т-30-69 в режиме транспортного следования к месту работы потребляет не более 7,2 л дизельного топлива на 1 машино-час.
При выполнении расчистки дорожного полотна от снега этот же трактор потребляет до 19,7 л на 1 машино-час.
Если трактор универсальный, то и норма расхода горюче-смазочной смеси будет изменяться по-разному. Например, транспортировка прицепа требует меньше топлива, чем подметание или подрезка травы на обочине навесной косой.

Таблица нормы расхода топлива разных моделей тракторов на колесном ходу

Модель техники	Тип и модель ДВС	Расход в л на 1 машино-час работы
Трактор Беларус-622	LDW-2204/T	В режиме следования к месту или стоянки – до 4,5 л. Транспортировка прицепа – до 5,5 л.
МТЗ-82	Д-240	Работа со щеткой – до 4,3 л. Процедуры с отвалом – до 4,4 л. Покос травы – 5,6 л.
МТЗ-82.1	Д-243	Движение со щеткой – до 5 л. Буксировка прицепа – 7 л. Выполнение погрузки и манипуляций с грузами – 3,5 л. Буксировка платформы – до 9,4 л.
МТЗ-80	Д-240	Работа с колуном типа Japa 60ja110 – до 4 л. Транспортировка прицепа – до 6,4 л.
МТЗ-50	Д-240Л	Буксировка прицепа типа 2ПТС-4 – до 5,3 л. Буксирование прицепа ИАПЗ-754В – до 5,3 л.
К-701	ЯМЗ-240БМ2-1	Движение без нагрузки – до 28,1 л. Выполнение уборки снега отвалом – до 20 л.
Беларус-892	Д-245.5	Транспортировка прицепа 2ПТС-4,5 – до 7 л. Транспортировка двух прицепов – до 8,6 л.

Расход топлива тракторов на разных режимах будет разным вследствие особенностей каждой из операций. Допустим, есть необходимость уборки снега. В таком случае показатель будет равномерно увеличиваться из-за сильного противодействия материала, с которым приходится работать.

Помимо видов конкретных работ и эксплуатационных режимов на расход топлива оказывает влияние вид шасси у трактора. Наличие гусеничной системы добавляет технике массы, что приводит к более высокому потреблению.

Что влияет на расход топлива тракторов?

Этот вопрос обычно рассматривают на основании перерасхода, который может появиться вследствие разных причин. Основной из них становится техническое состояние конкретного трактора, поэтому до начала работ следует производить проверку ДВС на наличие неисправностей. Но следует также учесть и другие причины:

Вторым фактором, который напрямую влияет на показатель расхода топлива, является стиль вождения оператора.
Погодные условия и сезонность.
Ландшафтные особенности, включая тип дорожного покрытия и его текущее состояние.
Грузоподъемность прицепа.

Базовые нормы расхода

Инструкции по эксплуатации к каждой из моделей тракторов являются основными документами, в которых указан расход топлива. Следует учитывать, что все использованные для расчета там формулы подходят под идеализированные стабильные условия. Здесь имеется в виду полная загрузка агрегата, сухая и ровная поверхность дороги, отсутствие осадков и т. п. В этой связи расчет расхода топлива должен производиться для каждого автомобиля отдельно и учитывать условия работы, в которых оказывается спецтехника.

Большинство моделей тракторов предполагают универсальный формат использования, поэтому при абстрактном рассмотрении произвести расчет расхода топлива для каждого из видов работ по отдельности не просто. Для этого используют данные с базовыми нормами расхода ГСМ по прилагаемой к технике документации. Они представляют собой усредненные значения по расходу, который был выявлен как среднее значение потребления во всех режимах.

Ниже перечислены некоторые из распространенных видов тракторов с разными показателями по расходу ГСМ:

Для выполнения процесса транспортировки тягач АТС-59 с двигательным агрегатом мощностью 370 кВт потребует в среднем до 54,1 л в час. Это тяжелая техника, которая способна передвигаться по пересеченной местности и одновременно транспортировать за собой прицеп или буксировать другую технику.
Колесный трактор К-700 с силовым агрегатом ЯМЗ-8424 потребляет в среднем до 22,7 л в час.
Тракторы модели Т-25 с дизельными моторами Д-120 мощностью до 23,5 кВт потребляют во время основной деятельности и транспортировки до 2,5 л.

Как видно из описания, норма расхода ГСМ от одной модели трактора к другой сильно меняется и зависит от массы факторов. В любом случае точно рассчитать не получится, потому что не только меняются режимы работы, но в дополнение присутствуют риски с возникновением неисправностей. Последние сильно влияют на расход топлива трактора, что уже не соответствует норме. Допустим, возник отказ одного из цилиндров. В данном случае расход резко увеличится, а мощность упадет. Это будет связано с тем, что оператор на первых минутах попытается газом поднять обороты.

Расчет показателя потребления ГСМ

Чтобы рассчитать показатель потребления ГСМ, необходимо взять произведение из константы, равной величине 0.7, удельного расхода и мощности ДВС. При мощности мотора в 230 кВт и расходу топлива на 32 л необходимо все перемножить и получить искомое значение.

Откуда берутся нормы расхода?

Все существующие нормы базируются на данных, предоставленных разработчиками тракторов. Для их получения ведутся неоднократные тестировочные процессы, которые выявляют средние цифры при использовании разных видов топлива для различных режимов работ. Все это в итоге прилагается к агрегатам в виде подробной документации с цифрами, графиками и таблицами.

[~DETAIL_TEXT] =>

Нормированные расходы топлива

Для движения по дорожному покрытию без прицепа или иных устройств. Например, трактор типа Т-30-69 в режиме транспортного следования к месту работы потребляет не более 7,2 л дизельного топлива на 1 машино-час.
При выполнении расчистки дорожного полотна от снега этот же трактор потребляет до 19,7 л на 1 машино-час.
Если трактор универсальный, то и норма расхода горюче-смазочной смеси будет изменяться по-разному. Например, транспортировка прицепа требует меньше топлива, чем подметание или подрезка травы на обочине навесной косой.

Таблица нормы расхода топлива разных моделей тракторов на колесном ходу

Модель техники	Тип и модель ДВС	Расход в л на 1 машино-час работы
Трактор Беларус-622	LDW-2204/T	В режиме следования к месту или стоянки – до 4,5 л. Транспортировка прицепа – до 5,5 л.
МТЗ-82	Д-240	Работа со щеткой – до 4,3 л. Процедуры с отвалом – до 4,4 л. Покос травы – 5,6 л.
МТЗ-82.1	Д-243	Движение со щеткой – до 5 л. Буксировка прицепа – 7 л. Выполнение погрузки и манипуляций с грузами – 3,5 л. Буксировка платформы – до 9,4 л.
МТЗ-80	Д-240	Работа с колуном типа Japa 60ja110 – до 4 л. Транспортировка прицепа – до 6,4 л.
МТЗ-50	Д-240Л	Буксировка прицепа типа 2ПТС-4 – до 5,3 л. Буксирование прицепа ИАПЗ-754В – до 5,3 л.
К-701	ЯМЗ-240БМ2-1	Движение без нагрузки – до 28,1 л. Выполнение уборки снега отвалом – до 20 л.
Беларус-892	Д-245.5	Транспортировка прицепа 2ПТС-4,5 – до 7 л. Транспортировка двух прицепов – до 8,6 л.

Что влияет на расход топлива тракторов?

Вторым фактором, который напрямую влияет на показатель расхода топлива, является стиль вождения оператора.
Погодные условия и сезонность.
Ландшафтные особенности, включая тип дорожного покрытия и его текущее состояние.
Грузоподъемность прицепа.

Базовые нормы расхода

Ниже перечислены некоторые из распространенных видов тракторов с разными показателями по расходу ГСМ:

Для выполнения процесса транспортировки тягач АТС-59 с двигательным агрегатом мощностью 370 кВт потребует в среднем до 54,1 л в час. Это тяжелая техника, которая способна передвигаться по пересеченной местности и одновременно транспортировать за собой прицеп или буксировать другую технику.
Колесный трактор К-700 с силовым агрегатом ЯМЗ-8424 потребляет в среднем до 22,7 л в час.
Тракторы модели Т-25 с дизельными моторами Д-120 мощностью до 23,5 кВт потребляют во время основной деятельности и транспортировки до 2,5 л.

Расчет показателя потребления ГСМ

Откуда берутся нормы расхода?

[DETAIL_TEXT_TYPE] => html [~DETAIL_TEXT_TYPE] => html [PREVIEW_TEXT] =>

[~PREVIEW_TEXT] =>

Таблица нормы расхода топлива разных моделей тракторов на колесном ходу

Ниже перечислены некоторые из распространенных видов тракторов с разными показателями по расходу ГСМ:

Расход топлива грузовых автомобилей на 100 км. Летняя и зимняя норма.

МАЗ 64221-20 (дв. ЯМЗ-8424.10)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-504 (дв. ЯМЗ-238)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-504В (дв. ЯМЗ-236)	22	Литров на 100 км.
МАЗ-504В1 (дв. ЯМЗ-236)	22	Литров на 100 км.
МАЗ-509, -509А (дв. ЯМЗ-236)	35	Литров на 100 км.
МАЗ-5334 (дв. ЯМЗ-236)	22	Литров на 100 км.
МАЗ-5334 (дв. ЯМЗ-238)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-53352 (дв. ЯМЗ-236)	22	Литров на 100 км.
МАЗ-5337 (дв. ЯМЗ-236)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-537 (дв. Д-12А-525)	119	Литров на 100 км.
МАЗ-5428 (дв. ЯМЗ-238ДЕ)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-5430 (дв. ЯМЗ-238М2)	28	Литров на 100 км.
МАЗ-5432 (дв. ЯМЗ-236)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-5432 (дв. ЯМЗ-238М2)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-543208-020 (дв. ЯМЗ-7511.10)	25	Литров на 100 км.
МАЗ-543203-020 (дв. ЯМЗ-236БЕ-12)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-543203-2120 (дв. ЯМЗ-236БЕ)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-543203-2122 (дв. ЯМЗ-236БЕ-12)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-543203-220 (дв. ЯМЗ-236БЕ)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-543203-220 (дв. ЯМЗ-236БЕ2-2)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-543205-020 (дв. ЯМЗ-238ДЕ2)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-543205-220 (дв. ЯМЗ-238ДЕ2)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-543205-226 (дв. ЯМЗ-238ДЕ2)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-543208-20 (дв. ЯМЗ-7511.10)	25	Литров на 100 км.
МАЗ-54321 (дв. ТМЗ-8421-01)	28	Литров на 100 км.
МАЗ-54321, -54326 (дв. ЯМЗ-236)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-54321-033 (дв. ТМЗ-8421.10)	28	Литров на 100 км.
МАЗ-54322 (дв. ЯМЗ-236)	25	Литров на 100 км.
МАЗ-54322 (дв. ЯМЗ-238М)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-543221 (дв. ЯМЗ-238М)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-54323 (дв. ЯМЗ-238М)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-543230-32 (дв. ЯМЗ-238Д)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-543240-2120 (дв. ЯМЗ-238ДЕ)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-543242-020Р (дв. Д-262)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-54326 (дв. MAN D2866LXF)	21	Литров на 100 км.
МАЗ-54327 (дв. ЯМЗ-238Д)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-54328 (дв. ЯМЗ-238Д)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-54328 (дв. ЯМЗ-238М) с бортовым полуприцепом МАЗ-9397	31	Литров на 100 км.
МАЗ-54328 (дв. ЯМЗ-238М2)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-54329-020 (дв. ЯМЗ-238ДЕ2)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-54329-020 (дв. ЯМЗ-238М2) с полуприцепом ЧМЗАП-99858 и контейнером	34	Литров на 100 км.
МАЗ-5432А3, -5432А3-320, -5432А3-322 (дв. ЯМЗ-6562.10)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-5432А5, -5432А5-323 (дв. ЯМЗ-6582.10)	25	Литров на 100 км.
МАЗ-5433 02-2120 (дв. ЯМЗ-236НЕ)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-5433, -54331 (дв. ЯМЗ-236М2)	22	Литров на 100 км.
МАЗ-543302 (дв. ЯМЗ-236НЕ2-14)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-543302-220 (дв. ЯМЗ-236НЕ2-5)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-54331 (дв. ЯМЗ-238Д)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-54331 (дв. ЯМЗ-236М2) с полуприцепом ЧМЗАП-99858 и контейнером	32	Литров на 100 км.
МАЗ-5433А2-320 (дв. ЯМЗ-6563.10)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-544008, -030-020, -030-021, -060-021, -060-031 (дв. ЯМЗ-7511.10, -7511.10-06)	25	Литров на 100 км.
МАЗ-544018, -320-031 (дв. ОМ-501ЬЛ.Ш/7, 320 kW)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-544019, -421-031 (дв. ОМ-501 LA.IV/4, 320 kW)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-544020 (дв. MAN D28661LF20)	21	Литров на 100 км.
МАЗ-544069-320-021, -320-030, -320-031 (дв. MAN D2866LF25)	21	Литров на 100 км.
МАЗ-544069-320-021 (дв. MAN D2866LF31)	21	Литров на 100 км.
МАЗ-5440А5, -330, -370-030 (дв. ЯМЗ-6582.10)	25	Литров на 100 км.
МАЗ-5440А8, -5440А8-360-031 (дв. ЯМЗ-6581.10)	25	Литров на 100 км.
МАЗ-5440А9, -320-030, -320-031 (дв. ЯМЗ-650.10)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-54421 TD (272 kW)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-54421 (274 kW) с полуприцепом МАЗ-97585	33	Литров на 100 км.
МАЗ-5549 (дв. ЯМЗ-238)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-5551 (дв. ЯМЗ-236М2)	22	Литров на 100 км.
МАЗ-5551 (дв. ЯМЗ-238)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-642205, -020, -022, -220, -222 (дв. ЯМЗ-238Д-2-3, -238ДЕ2, -238ДЕ-2-3)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-642208, -020Р8, -021Р2, -022, -026, -20, -232 (дв. ЯМЗ-7511, -7511.10, -7511.10.02)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-64221 (дв. ТМЗ-8421)	29	Литров на 100 км.
МАЗ-64221 (дв. ЯМЗ-238Д)	32	Литров на 100 км.
МАЗ-64221 (дв. ЯМЗ-8421.10) с полуприцепом МАЗ-9506010	50	Литров на 100 км.
МАЗ-64221-20 (дв. ЯМЗ-7511.10)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-642224 (дв. Scoda M.1.2.AML637)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-64226 (дв. MAN D2866LF15, 272 kW)	25	Литров на 100 км.
МАЗ-64227 (дв. ЯМЗ-238Д)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-64229, -64229-032, -642290-20, -642290-2120 (дв. ЯМЗ-238Д, -238ДЕ, -238ДЕ-10)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-6422А5, -6422А5-320, -6422А5-322 (дв. ЯМЗ-6582.10)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-6422А8, -6422А8-330, -6422А5-332 (дв. ЯМЗ-6581.10, 12МКПП)	28	Литров на 100 км.
МАЗ-642505-028 (дв. ЯМЗ-238Д) 6х6	41	Литров на 100 км.
МАЗ-642505-230 (дв. ЯМЗ-238ДЕ2) 6х6	35	Литров на 100 км.
МАЗ-642508-230, -642508-231 (дв. ЯМЗ-7511.10) 6х6	41	Литров на 100 км.
МАЗ-643008-030-010, -643008-060-010, -643008-060-020 (дв. ЯМЗ-7511.10)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-643069 (дв. MAN D2866LF25)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-6430А5, -370, -370-10 (дв. ЯМЗ-6582.10)	27	Литров на 100 км.
МАЗ-6430А8, -360-010, -360-020 (дв. ЯМЗ-6581.10)	28	Литров на 100 км.
МАЗ-6430А9 (дв. ЯМЗ-650.10)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-MAN-543265 (272 kW)	24	Литров на 100 км.
МАЗ-MAN-543268 (дв. D2866LF31)	21	Литров на 100 км.
МАЗ-MAN-640168 (дв. D2866LF25)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-MAN-640268 (дв. D2866LF25, 301 kW)	23	Литров на 100 км.
МАЗ-MAN-642268 (301 kW)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-MAN-642368 (дв. D2866LF25)	26	Литров на 100 км.
МАЗ-MЛN-642369 (дв. D2876LF03, 343 kW)	26	Литров на 100 км.

Базовая норма расхода топлива | logist-ics.ru

McQ Alexander McQueenRiot Grrrls, teddy boys, London goths, and Masai teenagers all got shout-outs at the McQ Pre-Fall presentation. The references were less Michael Kors Flagship Store literal than they might’ve been, but the overall spirit was as streetwise and rebellious as you’d expect from this contemporary-priced entry point to the world of Alexander McQueen. If anything, the collection was slightly more refined than those of previous seasons, an Michael Kors Bracelet expanded denim offering and emphases on black leather and black lace notwithstanding. Credit for that new sense of elevation goes to michael kors purses a soigné set of black-and-white-striped pajamas worn alternately with a cropped and fitted V-neck sweater or a sleek, narrowly cut trench. michael kors The tailoring here was sharp and well executed. That trench looks pricier than what it will ring up for in stores, michael kors outlet online sale and the same goes for a wool blazer with velvet lapels.The contemporary market of which McQ is a part is novelty michael kors handbags obsessed; labels in this category tend to chase trends. That is what it is, but that jacket with its McQueen-look-for-McQ-price seems Cheap Michael Kors Bags like a growth opportunity. Sarah Burton, more of this kind of thing, please.Baby, It’s Warm Outside: 12 Resort Dresses to Wear Michael Kors Crossbody NowResort dressing traditionally requires just that—an actual resort in a far-off, tropical locale—but this December the weather has been unseasonably (even Michael Kors Jewelry worryingly) sunny and dare we say . . . hot? “I was running errands on a particularly warm day recently and michael kors uk saw a man in shorts walking hand in hand with his girlfriend, who was bundled up in winter outerwear—and she actually Michael Kors Wallet looked like the more uncomfortable of the two,” says Vogue.com Executive Fashion Editor Jorden Bickham. “For the first time it’s possible Michael Kors Luggage to wear actual resort clothing in New York City during December.”To be fair, winter doesn’t officially arrive until next week, so Cheap Michael Kors Purses for the moment, why not seize the day? The travel-minded aspect of resort lends itself to a transitional approach to dressing: Michael kors Jet Set Styles with sleeves, such as those from J.W.Anderson, Trademark, and Isa Arfen, won’t leave you looking out of place if a sudden temperature drop occurs. They can be paired just as easily with strappy sandals as with boots and a shaggy coat Michael Kors Handbags On Sale should the weather turn toward the polar vortex end of the spectrum. In the meantime, simply enjoy the chance to test Michael Kors shoulder-bags out a new look. Shop our picks for the best of resort to wear now and save for more sunny days Michael Kors Handbags,Michael Kors Handbags Outlet,Michael Kors Handbags On Sale ahead.London’s Modern Musical Take on Alice in Wonderland Is a Major Fashion MomentWalking into wonder.land—the recently opened musical at London’s National michael kors outlet online Theatre from Damon Albarn, Moira Buffini, and Rufus Norris—you expect spectacle. The Alice in Wonderland–esque tale for the Internet generation is Michael Kors Shop promoted with cherry pink and pixelated Cheshire Cat faces across town; the stage is framed by neon strips that glow blue, Michael Kors Drawstring Bags white, acid green, and more. But what you might not anticipate is a hefty dose of smart (albeit exaggerated) fashion, which michael kors factory nods, wonderfully, to many British collections of yester-season. And that’s very much thanks to the play’s costume designer, the Central Saint Michael Kors Clutches Martins–educated Katrina Lindsay.Fashion addicts may uncover more references here as well—PVC raincoats like Burberry Prorsum’s men’s Fall 2011 finale; the piping Michael kors Hamilton on anoraks, similar to the way Christopher Raeburn builds out his jackets. None of the costumes, though, feel appropriated—rather, they seem fun, and, in fact, strongly rooted to the English fashion system, which is how it should be. And there are also michael kors outlet online store 49.00 outlet some really wonderful, more outré personalities in the mix—a muscled bright pink dodo bird, for example, and an oxymoronically huge mouse. 2015 Michael Kors Likewise, there’s a loner who has a detached balloon as her head.All in all, this musical is worth seeing if only Michael Kors Handbags for the fashion alone. It doesn’t take itself too seriously, yet in turn, it feels real despite its electric fantasy. Lindsay michael kors outlets and her team made sure of that. To quote the play’s final line: “Fabulous!”“The whole piece is about identity,” says Lindsay, Michael Kors Online Sale speaking in an anteroom at the theater, two days after I’ve seen, and loved, the show. “The language of the costumes Michael Kors Jewelry Sale is to be very much about shells.” She references Ms. Manxome, Aly’s (Aly is the real-life, modern version of Alice, essentially) michael kors xenophobic and self-obsessed school principal, who swaddles herself in big, sloped houndstooth suits—quite in line with Alexander McQueen’s camp and loud Cheap Michael Kors Fall 2009 collection. She points out Aly’s avatar, named Alice, the character who plummets down the bitmapped rabbit hole, with her michael kors tote “geometric clothes and zingy fabrics and walking-on-air shoes,” another glance to McQueen, this time to his otherworldly footwear (Alice’s baby blue shoes were made by Noritaka Tatehana—you may know the Michael Kors Bags On Sale name via Lady Gaga, who’s a fan). And she highlights the elusive hare himself, whose puffed-up ears stand as an innocent and naive foil to Gareth Pugh’s sinister lapins noir of 2006.

Норма потребления

Норма потребления ($ / кВтч) может использоваться для расчета счета по-разному, в зависимости от того, есть ли избыточное производство солнечной энергии и разрешена ли продажа в сеть. Многие коммунальные предприятия разработали сложные конструкции счетчиков, чтобы отслеживать покупки из сети и продажи в сеть. Льготные тарифы, Чистый учет, Покупка всего и продажи — все это разные типы норм потребления и имеют разные определения во всем мире.Чтобы не усложнять задачу, мы используем следующие пять типов транзакций по ставке, чтобы определить, как норма потребления используется для расчета счета. Тариф может иметь несколько уровней потребления, и каждый уровень потребления может иметь только один тип транзакции. Вот список возможных типов транзакций по ставкам:

Тип транзакции	Как рассчитывается счет
Измеритель нетто	стоимость = кВтч нетто * $ / кВтч
Избыток нетто	ЕСЛИ нетто кВтч <0, применяется стоимость = кВтч нетто * $ / кВтч
Чистая покупка	ЕСЛИ кВтч нетто> 0, применяется стоимость = кВтч нетто * $ / кВтч
Импорт	На сумму мгновенной энергии (кВтч), поступающей из сети, применить стоимость = Покупка кВтч * $ кВтч
Экспорт	Для суммы мгновенной энергии (кВтч), отправленной в сеть, применить стоимость = (-) Продажи кВтч * $ / кВтч

Эти типы транзакций более подробно описаны ниже:

Общие сведения о чистом счетчике, чистом избытке и чистой покупке:

На схеме ниже показана транзакция между солнечной панелью, домом (клиентом) и коммунальным предприятием с использованием одного счетчика.

В доме есть только один метр, который может «двигаться вперед» при покупке электроэнергии из сети и «двигаться назад» при продаже излишка электроэнергии в сеть.

За первый час в январе нагрузка составила 10 кВт, а солнечная панель произвела 20 кВт. В этот час нагрузка после собственного потребления составляет -10 кВт. Поскольку это отрицательная нагрузка, мы могли бы экспортировать энергию в сеть. Таким образом, в первый час января система продала в Сеть 10 кВт. После первого часа января счетчик А «сдвинулся назад» и составил -10.

В следующий час нагрузка после собственного потребления составляет 10 кВт, что означает, что системе необходимо приобрести 10 кВт из сети. Теперь счетчик переместится на десять вперед и покажет ноль (-10 + 10 = 0). Это продолжается до конца месяца, когда коммунальное предприятие снимает показания счетчика.

В счетчиках этого типа на счет за коммунальные услуги влияет только ежемесячное «чистое» показание, а не мгновенные показания счетчика. Если общее количество покупок в конце месяца было больше, чем общее количество продаж, то счетчик будет иметь положительное значение.Если общий объем продаж на конец месяца больше, чем общий объем покупок, то счетчик будет иметь отрицательное значение.

Для представления счетчиков, которые регистрируют «чистое» потребление за период времени, мы используем следующие три типа транзакций по ставке:

(1) Net Meter

Норма потребления с «NetMeter» будет рассчитана как = кВтч нетто * $ / кВтч.

В приведенном выше примере количество нетто-кВтч было рассчитано за месяц. У некоторых коммунальных услуг будут разные периоды оплаты.Варианты периода начисления для тарифов NetMeter: Почасовая, Ежедневная, Ежемесячная и Ежегодная.

(2) Чистая покупка

Норма потребления с «NetPurchase» будет рассчитана ТОЛЬКО, ЕСЛИ нетто кВтч> 0. Стоимость = кВтч нетто * $ / кВтч.

В приведенном выше примере количество нетто-кВтч было рассчитано за месяц. У некоторых коммунальных услуг будут разные периоды оплаты. Варианты периода начисления для ставок «NetPurchase»: Почасовая и Ежемесячная.

(3) Net Excess

Норма потребления с «NetExcess» будет рассчитана ТОЛЬКО ЕСЛИ нетто кВтч <0.Стоимость = кВтч нетто * $ / кВтч

В приведенном выше примере количество нетто-кВтч было рассчитано за месяц. У некоторых коммунальных услуг будут разные периоды оплаты. Варианты оплаты ставок «NetExcess»: Почасовая и Ежемесячная.

Общие сведения об импорте и экспорте

На приведенной ниже диаграмме показаны потоки энергии между солнечной батареей, домом (клиентом) и коммунальным предприятием.

В системе два счетчика, каждый из которых может только «двигаться вперед».Счетчик A регистрирует всю электроэнергию, проданную в сеть. Счетчик B будет регистрировать любую электроэнергию, купленную из сети. Другой способ взглянуть на это состоит в том, что счетчики A и B будут регистрировать мгновенный экспорт и импорт соответственно. В конце месяца или периода начисления неттинга.

Чтобы представить счетчик A, мы имеем:

(4) Экспорт

Скорость потребления с «Экспорт» будет рассчитана как = (-) Сумма мгновенных продаж кВтч * $ / кВтч

Чтобы представить счетчик B, мы имеем:

(5) Импорт

Уровень потребления с «Импортом» будет рассчитан как = Сумма мгновенных покупок кВтч * $ / кВтч

Ориентировочная стоимость для этих двух типов транзакций рассчитывается ежемесячно.Сравнение типов транзакций:

Ниже приведен пример различных расчетов по типу тарифа с ежемесячной оплатой:

			$ / кВтч	0,5	0,2	0,5	0,5	0,2
Месяц	Приобретенная энергия	Продано энергии	Чистая энергия	Чистая покупка	Избыток нетто	Измеритель нетто	Импорт	Экспорт
	кВтч	кВтч	кВтч	$	$	$	$	$
янв	72 071	61 007	11 064	5 532	0	5 532	36 036	-12 201
фев	59 490	57 856	1,634	817	0	817	29 745	-11 571
мар	60 907	67 186	-6 278	0	-1 256	-3 139	30 454	-13 437
апр	52 656	61 070	-8 414	0	-1 683	-4 207	26 328	-12 214
мая	56 282	60,666	-4 384	0	-877	-2,192	28 141	-12 133
июн	60 384	51 916	8,468	4 234	0	4 234	30,192	-10 383
июл	62 993	52 762	10 231	5,116	0	5,116	31 497	-10,552
августа	68 213	56 097	12,116	6 058	0	6 058	34,107	-11 219
сен	62 066	63 651	-1 584	0	-317	-792	31 033	-12 730
окт	61 313	64 410	-3 097	0	-619	-1,549	30 657	-12 882
ноя	71 771	52 437	19,334	9,667	0	9,667	35 886	-10 487
дек	72 843	55 752	17091	8 546	0	8 546	36 422	-11 150

Из таблицы видно, что расчетный счет за коммунальные услуги существенно зависит от того, какой тип операции определен.

Вы можете добавить к своему тарифу несколько сборов за потребление или электроэнергию. Нажмите кнопку «Добавить норму» в правом углу под вкладкой потребления.

Откроется всплывающее окно, как показано ниже.

Чтобы добавить норму потребления, выполните следующие действия.

Шаг 1: Введите название нормы расхода.

Шаг 2: Выберите тип ставки и соответствующий период начисления.

Как обсуждалось в начале этой статьи, для каждого типа тарифа доступны следующие периоды начисления.

Тип тарифа	Периоды начисления
NetMeter	Почасовая, ежедневная, ежемесячная и ежегодная
NetPurchase	Почасовая и ежемесячная
NetExcess	Почасовая и ежемесячная
Импорт	Ежемесячно
Экспорт	Ежемесячно

Шаг 3: Укажите стоимость

а.Фиксированный тариф на электроэнергию — если это постоянный тариф на электроэнергию ($ / кВтч), введите стоимость в поле «Стоимость ($ / кВтч)

г. Многоуровневая ставка энергии — если это многоуровневая ставка энергии, установите флажок «Имеет уровни». Откроется таблица, в которой вы сможете ввести уровни и их стоимость. Введите лимиты для каждого уровня и стоимость в долларах / кВтч. Таблица на рисунке ниже имеет следующие уровни — от 0 до 50 кВтч, тариф составляет 0,5 доллара США за кВтч. Между 50-100 кВтч ставка составляет 1 доллар за кВтч. Любое потребление выше 100 кВтч будет стоить 2 доллара США за кВтч.

Итак, если клиент потребил 300 кВтч в расчетном периоде, то стоимость = (50 кВтч * 0,5 $ / кВтч) + (100 кВтч * 1 доллар / кВтч) + (150 кВтч * 2 доллара / кВтч) = 425 долларов США

Совет: обязательно добавьте последний уровень с действительно высоким верхним пределом, чтобы все потребление, превышающее предыдущий предел, попадало в этот уровень.

Шаг 4: Укажите период

a: Если эта ставка применяется к определенному времени года, измените даты начала и окончания соответственно.Дата окончания входит в указанный период.

b: Если у этого тарифа есть время использования, установите флажок «Имеет время использования?».

Укажите временной диапазон и диапазон дней недели. Вы можете указать несколько диапазонов, нажав кнопку «Добавить время использования» при необходимости.

Шаг 5. Укажите, применяется ли эта ставка в праздничные дни

Если отмечено, эта ставка будет применяться в течение всего дня для каждого праздника, игнорируя Период и Время использования.Этот флажок следует установить только для одной нормы потребления. Если существует несколько норм потребления, включающих праздничные дни, к праздникам будет применяться только последняя.

Чтобы добавить все государственные праздники в вашем регионе, перейдите в раздел «Добавить праздники».

Вы можете импортировать цены в реальном времени, щелкнув Импорт временных рядов во всплывающем окне «Создать норму потребления».

При нажатии кнопки «Импорт таймсерий» открывается всплывающее окно с просьбой выбрать файл csv с ценами в реальном времени.После того, как вы выбрали файл, вы увидите, что всплывающее окно изменилось. Вы можете редактировать только Имя и категорию оценки.

Мнение | Каков ваш коэффициент потребления?

Уровень потребления на душу населения в Китае по-прежнему примерно в 11 раз ниже нашего, но предположим, что он поднимется до нашего уровня. Давайте также упростим задачу, представив, что ничто иное не способствует увеличению мирового потребления, то есть ни одна другая страна не увеличивает свое потребление, все национальное население (включая Китай) остается неизменным, а иммиграция прекращается.Одно лишь наверстывание отставания Китая могло бы примерно удвоить мировой уровень потребления. Например, потребление нефти увеличится на 106 процентов, а мировое потребление металлов — на 94 процента.

Если бы Индия и Китай наверстали упущенное, темпы мирового потребления утроились бы. Если весь развивающийся мир внезапно догонит, мировые ставки вырастут в одиннадцать раз. Это выглядело бы так, как если бы мировое население увеличилось до 72 миллиардов человек (при сохранении нынешнего уровня потребления).

Некоторые оптимисты утверждают, что мы могли бы поддержать мир с девятью миллиардами человек.Но я не встречал никого достаточно сумасшедшего, чтобы утверждать, что мы можем поддержать 72 миллиарда. Тем не менее мы часто обещаем развивающимся странам, что если они будут проводить только правильную политику — например, установят честное правительство и рыночную экономику, — они тоже смогут вести образ жизни первого мира. Это невыполнимое обещание, жестокий обман: нам трудно поддерживать образ жизни первого мира даже сейчас для всего лишь одного миллиарда человек.

Мы, американцы, можем думать о росте потребления в Китае как о проблеме.Но китайцы достигают только того уровня потребления, который у нас уже есть. Было бы бесполезно говорить им, чтобы они не пытались.

Единственный подход, который примут Китай и другие развивающиеся страны, — это стремление сделать уровни потребления и уровень жизни более равными во всем мире. Но у мира недостаточно ресурсов, чтобы позволить поднять уровень потребления в Китае, не говоря уже о потреблении в остальном мире, до нашего уровня. Значит ли это, что мы идем к катастрофе?

Нет, у нас может быть стабильный результат, при котором все страны сходятся по уровням потребления, значительно ниже текущих наивысших уровней.Американцы могут возразить: мы ни за что не пожертвуем своим уровнем жизни ради блага людей в остальном мире. Тем не менее, доберемся мы до этого или нет, скоро у нас будет более низкий уровень потребления, потому что наши нынешние темпы неприемлемы.

Однако реальных жертв не потребуется, потому что уровень жизни не сильно зависит от уровня потребления. Потребление в Америке в значительной степени является расточительным и практически не влияет на качество жизни. Например, потребление нефти на душу населения в Западной Европе составляет примерно половину нашего, однако уровень жизни в Западной Европе выше по любому разумному критерию, включая ожидаемую продолжительность жизни, состояние здоровья, младенческую смертность, доступ к медицинскому обслуживанию, финансовую безопасность после выхода на пенсию, время отпуска. качество государственных школ и поддержка искусств.Спросите себя, способствует ли расточительное использование бензина американцами какой-либо из этих мер.

Скорость потребления кислорода сфероидами опухоли при формировании некротического ядра

Гипоксия является одним из основных признаков солидных опухолей и связана с плохим прогнозом различных видов рака. Многоклеточный агрегат, называемый сфероидом, использовался в качестве модели опухоли с некротическим ядром более 45 лет. Кислородный метаболизм в сфероидах изучался с помощью тушащих фосфоресценцию и чувствительных к кислороду электродов.Однако эти традиционные методы требуют химической маркировки и физической вставки электрода в каждый сфероид, что может быть функционально и структурно разрушительным. Сканирующая электрохимическая микроскопия (SECM) может неинвазивно анализировать метаболизм кислорода. Здесь мы использовали SECM, чтобы исследовать, влияют ли изменения внутренней структуры сфероидов на метаболизм кислорода. Мы исследовали скорость потребления кислорода (OCR) сфероидов опухоли молочной железы MCF-7 с некротическим ядром и без него.Численное моделирование использовалось для описания метода оценки OCR сфероидов, осевших на дне обычных планшетов для культивирования. OCR на объем сфероида уменьшался с увеличением радиуса сфероида, что указывает на ограничение подачи кислорода к сердцевине сфероида MCF-7. Формирование некротически-подобного ядра не оказывало значительного влияния на метаболизм кислорода, подразумевая, что ядро имело минимальный вклад в OCR даже до возникновения некроза. Анализ OCR с использованием SECM неинвазивно отслеживает изменение метаболизма кислорода в сфероидах опухоли.Подход многообещающе для оценки различных трехмерных моделей культуры.

У вас есть доступ к этой статье

Подождите, пока мы загрузим ваш контент… Что-то пошло не так. Попробуй еще раз?

Нормы потребления рыбы — техническая поддержка

Вашингтон сталкивается с новыми и сохраняющимися угрозами отравления загрязненными поверхностными водами и отложениями.Поскольку мы стремимся уменьшить эти угрозы, как мы должны защитить жителей, которые едят рыбу и моллюсков, из вод Вашингтона? Как мы должны защищать сообщества, которые полагаются на рыбу и моллюсков как на большую часть своего рациона?

В 2013 году мы подготовили документ технической поддержки, чтобы помочь ответить на эти вопросы. В отчете оцениваются имеющиеся данные о потреблении рыбы жителями Вашингтона. Он определяет, сколько рыбы на самом деле едят люди. Эта информация имеет решающее значение для установления стандартов, которые защищают качество поверхностных вод — и для очистки загрязненных отложений под ними.

Прочтите технический документ и приложения. Для получения дополнительной информации о стандартах качества воды для защиты здоровья человека (включая нормы потребления рыбы) посетите страницу нормотворчества по качеству воды для главы 173-201A WAC.

Пресноводные и соленые ресурсы Вашингтона приносят огромную пользу людям. Ежегодно жители и посетители вылавливают большое количество рыбы и моллюсков в развлекательных и коммерческих целях. Многие жители едят морепродукты, собранные в водах Вашингтона.Племенные народы имеют договорные права на лов рыбы. Сбор и употребление в пищу морепродуктов играет важную роль в их культурах. Рыба и моллюски важны в культурном отношении и являются частью здорового питания.

Почему нам нужно знать о потреблении рыбы?

Стойкие химические вещества, такие как полихлорированные бифенилы (ПХБ), диоксины и ртуть, могут накапливаться в тканях рыб и наносить вред здоровью людей, потребляющих рыбу. Дети и другие уязвимые группы населения могут быть особенно уязвимыми, а также взрослые, которые едят большое количество рыбы или моллюсков.Чтобы установить стандарты качества воды и очистки отложений, которые защищают здоровье человека, нам необходимо знать, сколько рыбы едят жители Вашингтона.

Как мы узнали больше о потреблении рыбы в Вашингтоне?

В 2009 году Экология начала пересмотр норм потребления рыбы для обновления правил очистки окружающей среды.

В октябре 2011 года мы подготовили проект документа технической поддержки по потреблению рыбы. Мы получили несколько сотен комментариев и отредактировали проект на основе этих отзывов.Мы провели дополнительный анализ и собрали дополнительную информацию для поддержки второго пересмотренного документа технической поддержки.

15 января 2013 г. мы опубликовали Нормы потребления рыбы: документ технической поддержки (финальная версия 2.0) с шестью вспомогательными приложениями. Прочтите письмо от 15 января 2013 г., которое сопровождало его выпуск.

Просмотрите комментарии и ответы общественности, которые помогли сформировать этот отчет

Отчет — результат многолетней работы. Экологический персонал и технические эксперты сотрудничали с федеральными, государственными и местными агентствами; племенные правительства; гражданские и коммерческие организации; и отдельные граждане и предприятия.Все они своими комментариями и ответами помогли сформировать окончательный отчет.

Проект документа технической поддержки (черновик версии 1.0) выпущен для общественного обсуждения Октябрь 2011 г .:

Проект документа технической поддержки (черновик версии 2.0) выпущен для общественного обсуждения 30 августа 2012 г .:

Окончательный документ технической поддержки (окончательная версия 2.0), выпущенный 15 января 2013 г .:

Где можно узнать больше о потреблении рыбы?

Двойные эмиссионные, чувствительные к кислороду наночастицы бора определяют уровень потребления кислорода клетками рака груди

1. Введение

Скорость потребления кислорода (OCR) предоставляет количественную информацию о клеточном метаболизме и использовании кислорода. Кислород необходим для нормального функционирования тканей и непосредственно участвует в производстве аденозинтрифосфата (АТФ) благодаря своей роли в цепи переноса электронов. ¹ При раке опухоль, насыщенная кислородом, лучше поддается терапевтическому ответу, в то время как гипоксические опухоли (pO2 опухолевой ткани <10 торр) связаны с плохими терапевтическими результатами.Гипоксия развивается в результате дисбаланса поступления и потребления кислорода, и в современной клинической практике не существует стандартного метода уменьшения гипоксии при раке, хотя существует множество методов лечения (например, антиангиогенетических средств) для уменьшения гипоксии опухоли. Однако одна из возможностей облегчить проблему гипоксии - уменьшить OCR опухолевых клеток; ² ^— ⁵ Secomb et al, ⁶, используя математическую модель кровеносных сосудов опухоли, предсказали, что снижение OCR опухолевых клеток на 30% устранит гипоксию; по сравнению с увеличением доставки кислорода уменьшение OCR могло быть в 30 раз более эффективным.Чтобы использовать эту терапию, необходим надежный и точный метод измерения OCR как in vitro, , так и in vivo . Измерение OCR сложно; in vivo характеристика OCR всей опухоли включает множество факторов, которые искажают данные: существует сильная зависимость от количества клеток, потребляющих кислород, типа клеток, ⁷ наличия каких-либо митохондриальных мутаций, ⁸ ^— ¹⁰ относительная васкуляризация опухоли, ¹⁰ ^— ¹² и дифференцированное состояние клеток (недифференцированные клетки более гликолитичны).¹³ Измерения OCR опухолей in vivo полезны для характеристики всего микросреды опухоли, но практически невозможно устранить эффекты перфузии и потребления кислорода стромальными и иммунными клетками, чтобы изолировать и измерить только OCR опухолевых клеток. ¹⁴ ^— ¹⁶

Измерения потребления кислорода in vitro обычно выполняются с использованием анализа морского конька, который удаляет эти переменных in vivo .Анализ морского конька используется для измерения скорости дыхания митохондрий путем измерения OCR до и после добавления различных ингибиторов. ¹⁷ Основным недостатком этого анализа является отсутствие точности. ¹⁸ — система не герметична, поскольку в ней используются кислородопроницаемые материалы, а диффузия внешнего кислорода в камеру ячейки может повлиять на измерения. ¹⁹ ^, ²⁰ Компартментные модели в некоторой степени уменьшили влияние диффузии кислорода.²¹ Более того, из-за изначально большого количества переменных, которые влияют на OCR [условия посева, дни роста, состав среды (как для роста, так и для анализа) и концентрации митохондриальных эффекторов], сообщалось о межлабораторных различиях и уходе должны приниматься в способе представления данных. ²² Кроме того, в данных Seahorse нет пространственной информации, тогда как измерения OCR с помощью флуоресцентной микроскопии могут включать эту информацию.

В онкологии хорошо известно, что опухолевые клетки демонстрируют повышенный гликолиз и пониженную митохондриальную активность — оба фактора, влияющие на изменение потребления кислорода. ¹⁰ Важно отметить, что несколько исследований расширили эти концепции, обнаружив, что рост опухоли можно регулировать посредством модуляции OCR. ¹⁰ ^, ¹⁶ ^, ²³ Эта модуляция может вызвать различные уровни ответа на стандартные методы лечения; однако облучение представляет особый интерес из-за чрезвычайной устойчивости гипоксических опухолей к лучевой терапии.Несколько исследований успешно модулировали митохондриальную активность, чтобы действовать как радиосенсибилизатор. ²⁴ ^— ²⁶ Использование этих знаний в терапевтических целях требует последовательных, повторяемых и точных измерений OCR и понимания того, как его модуляция влияет на результаты лучевой терапии.

Ратиометрические методы измерения OCR in vitro становятся все более популярными благодаря повышенному разрешению и анализу в реальном времени. ¹⁸ Это осуществляется с помощью различных механизмов, обычно с помощью косвенных измерений кислорода, проводимых с помощью датчиков, чувствительных к окислительно-восстановительному потенциалу, или путем определения количества активных форм кислорода.²⁷ ^— ³⁰ Здесь мы представляем новый логометрический метод для количественной оценки in vitro OCR с использованием двойных эмиссионных кислородно-чувствительных наночастиц бора (BNP), которые напрямую сообщают о концентрации кислорода. BNP изготавливают из конъюгатов краситель-полимер на основе дифторборона-β-дикетоната (BF2bdk). Благодаря высоким квантовым выходам, большим коэффициентам экстинкции и настраиваемым цветам излучения красители BF2bdk служат универсальными инструментами для создания изображений и оптических реагентов.³¹ ^— ³⁵ Когда красители заключены в жесткую полимерную матрицу, такую как поли (молочная кислота) (PLA), присутствуют как флуоресценция, так и фосфоресценция при комнатной температуре: на флуоресценцию не влияют изменения концентрации кислорода , но фосфоресценция чувствительна к изменениям в кислороде окружающей среды из-за столкновительного тушения. ³⁶ ^, ³⁷ Флуоресцентное и фосфоресцентное излучение независимы, время жизни при 462 и 569 нм при N2 (g) равно 0.47 нс и 1,9 мс соответственно. Это убедительное свидетельство того, что короткоживущее синее излучение представляет собой флуоресценцию из синглетно возбужденного состояния, а долгоживущее желтое излучение — это фосфоресценция, происходящая из триплетно возбужденного состояния. Кроме того, желтое излучение гасится в присутствии кислорода, тогда как синее излучение не изменяется согласно полной эмиссионной спектроскопии. Хотя между двумя функциями есть некоторое спектральное перекрытие, оно минимально. ³⁸ Эта уникальная особенность делает материалы BF2bdk полезными датчиками для логометрической визуализации.Взяв отношение флуоресценции к фосфоресценции, можно определить концентрацию кислорода в образце, контролируя эффекты неоднородности частиц, интенсивности освещения и эффективности сбора. В конъюгатах краситель-полимер химические структуры BF2bdk связаны со свойствами красителя (например, цветом излучения и диапазоном обнаружения кислорода). Например, иодидзамещенный дифторбордибензойметанполи-L-лактид или PLLA (PLA) материал [BF2dbm (I) PLA] ³² может определять уровень кислорода от 0% до 21%, в то время как динафтоилметановый краситель-полимер [BF2dnm (I) PLA] ³⁹ подходит для гипоксии (от 0% до 5%).Большинство физиологических применений будет происходить в диапазоне от 1% до 11% O2. ⁴⁰ Мы ранее продемонстрировали использование этих двух типов BNP в in vivo мышиных камерах с задним окном для измерения внутриклеточного pO2 и гипоксии опухоли в микроокружении. ³² ^, ³⁹ Недавно краситель на основе йодзамещенного нафтилфенильного производного [BF2nbm (I) PLA] показал отличное обнаружение кислорода во всем диапазоне (от 0% до 100%) и был применен для мониторинга заживления ран.³⁸ Помимо использования гидрофобного PLA в качестве жесткой матрицы, гидрофильные полимеры, такие как поли (этиленгликоль) (PEG), также используются для создания наночастиц с улучшенной водной стабильностью. ПЭГилированные наночастицы также имеют преимущество в пассивном нацеливании на опухоль, при котором они захватываются клетками посредством эффекта ЭПР. Мы сообщили о стратегии сборки стереокомплексных ПЭГилированных наночастиц из борного красителя-PLLA-PEG и PDLA-PEG с накоплением опухоли на мышиной модели. ³⁷ В этом исследовании мы ковалентно связали полноразмерный борный краситель с PLLA-PEG и применили установленный метод ПЭГилирования для создания чувствительных к кислороду BNP для измерения OCR.³⁷

Наш метод заполняет важный пробел в метаболических измерениях, потому что, хотя стандартные методы морского конька могут быть расширены с 2D монослоев клеток до ex vivo 3D тканей, они полагаются на изменение потребления кислорода ингибиторами митохондриальной функции. Предлагаемый нами метод позволяет преобразовать стандартные 2D-культуры в 3D-органы. Ранее мы использовали BNP для прямой визуализации% O2 в in vivo моделях камер с задним окном мышей , которые учитывают ограничения глубины оптических длин волн.³³ ^, ³⁸ Наша цель здесь — измерить и сравнить in vitro OCR, измеренное в двух клеточных линиях рака молочной железы, E0771 и 4T07, с золотым стандартом анализа морского конька. Это первый шаг к нашей конечной цели по расширению этих измерений OCR in vivo . Для измерения OCR BNP добавляют в клеточную среду (или любой другой экспериментальный раствор), и их фосфоресценцию и интенсивность флуоресценции измеряют с помощью спектроскопического ридера для планшетов.В нашем исследовании мы также облучали каждую клеточную линию, чтобы достичь 50% выживаемости, чтобы определить, изменился ли базальный OCR. Мы предполагаем, что (1) OCR E0771 и 4T07 могут быть количественно определены с помощью ратиометрического измерения с помощью BNP, (2) OCR, измеренные с помощью планшет-ридера, сопоставимы с золотым стандартом анализа морского конька, и (3) OCR уменьшается после введения дозы радиации, которая снижает выживаемость на 50%.

2. Экспериментальные методы и материалы

2.1.

Материалы и методы для синтеза BNP

Лактидный мономер (D-лактид) был щедрым подарком от Corbion Purac ©.L-лактид был приобретен в TCI America. Лактид дважды перекристаллизовывали из EtOAc и сушили в вакууме в течение ночи перед использованием. ПЭГ был приобретен у Sigma Aldrich (2000 Да, = ~ 1,05) и высушен азеотропной перегонкой в толуоле в соответствии с ранее описанным протоколом. ⁴¹ ПЭГ хранили в атмосфере азота в перчаточном боксе перед использованием в качестве макроинициатора. Полимеры PEG-PLLA-OH (GPC: Mn = 6900 = 1,04 и h2 ЯМР = 7000) и PEG-PDLA-OH (Mn = 12500, Đ = 1,08 и h2 ЯМР = 13 800) ³⁶ и сложный эфир 6-йод, 2-метилнафтоат ⁴² получали, как описано ранее.Спектры ЯМР h2 соответствуют литературным значениям. Растворители Ch3Cl2 и THF сушили над молекулярными ситами 3 Å, активированными при 300 ° C, переносили через канюлю и сушили второй раз над молекулярными ситами 3 Å, активированными при 300 ° C. ⁴³ Растворители хранили в сухой емкости. Все остальные химические вещества были чистыми от Sigma-Aldrich и использовались без дополнительной очистки.

Синтетические методы Спектры ЯМР h2 (600 МГц) записывали на приборе Varian VMRS 600/51 в CDCl3 или D6-DMSO.Спектры ЯМР h2 относились к остаточным сигналам для протиохлороформа (7,26 м.д.), протиоДМСО (2,50 м.д.) и протиоацетона (2,09 м.д.). В назначении ЯМР h2 ароматические положения определены для положений фенила (Ph) и нафтила (Np). Константы взаимодействия даны в герцах. Среднечисловой молекулярный вес (Mn), средневесовой молекулярный вес (Mw) и индекс полидисперсности () определяли гельпроникающей хроматографией (GPC) (THF, 25 ° C, 1 мл / мин) с использованием многоуглового лазерного светорассеяния (λ = 658 нм, 25 ° C) и определения показателя преломления (λ = 658 нм, 25 ° C).Использовали защитную колонку Polymer Laboratories 5 мкм со смешанным C-фильтром и две колонки GPC вместе с Wyatt Technology Corp. (интерферометрический рефрактометр Optilab REX, лазерный фотометр miniDawn TREOS) и приборы Agilent Technologies (серия 1260 HPLC) и программное обеспечение Wyatt Technology (ASTRA 6.0) для анализа. Инкрементный показатель преломления (dn / dc) определяли методом однократного впрыска, предполагая 100% извлечение массы из колонок. УФ-видимые спектры регистрировали на диодно-матричном спектрофотометре Hewlett-Packard 8452A.

На рис. 1 показаны конструкция и состав стереокомплекса наночастиц.

Рис. 1

Дизайн наночастиц и состав стереокомплексных наночастиц: (а) химическая структура полимеров BF2nbm (I) PLLA-PEG и PDLA-PEG. (б) Схематическое изображение стереокомплексных ПЭГилированных наночастиц.

2.2.

Полимерный синтез

nbm (I) OH : иодзамещенный нафтилфенильный лиганд получали, как ранее описано Jin et al., ⁴⁴ для 3-гидрокси-1- (4-гидроксифенил) -3. -фенилпроп-2-ен-1-он, за исключением того, что ароматический эфир 6-йодо, 2-метилнафтоат использовали вместо метилбензоата с получением темно-коричневого порошка; 178 мг (13%).h2 ЯМР: (600 МГц, D6-ДМСО) δ17,38 (с, 1H, енол-O H ), 10,47 (с, широкий, 1H, фенол-OH), 8,75 (с, 1H, 1-NpH) , 8,48 (с, 1H, 5-NpH) 8,18 (д, J = 12, 3-NpH), 8,08 (д, J = 12, 2H, 2, 6-PhH), 7,98 (д, J = 12, 1H , 4-NpH) 7,85 (с, широкий, 2H, 7, 8-NpH), 7,34 (с, 1H, COCHCO), 6,90 (д, J = 12, 2H, 3, 5-PhH) (рис. S2) . HRMS [ионизация электрораспылением (ESI), время пролета (TOF)] m / z вычислено для C19h22O3I: 414,9831 [M-H] +; найдено 414,9825.

BF ₂ nbm (I) OH : связующий элемент борного красителя получали, как описано ранее ³⁷, но с nbm (I) OH, чтобы получить желтый порошок после перекристаллизации из ацетона / гексана; 45 мг (35%).1H ЯМР: (600 МГц, D6-DMSO) δ11,22 (с, широкий, 1H, фенол-OH), 8,99 (с, 1H, 1-NpH), 8,55 (с, 1H, 5-NpH), 8,33 ( м, 3H, 2, 6-Ph H , 3-NpH), 8,07 (д, J = 6, 1H, 4-NpH), 7,95 (м, 2H, 7, 8-NpH), 7,87 (с, 1H, COCHCO), 7,00 (д, J = 6, 2H, 3, 5-PhH) (рис. S3). HRMS (ESI, TOF) m / z вычислено для C19h21BO3F2I: 462,9814 [M-H] +; найдено 462,9814.

BF ₂ nbm (I) PLLA-PEG : полимер, связанный с красителем, был получен, как ранее описано Kerr et al, ³⁷, за исключением того, что краситель, BF2nbm (I) OH, был использован вместо BF2dbmOH. .В этой реакции также использовали блок-сополимер mPEG-PLLA-OH с более низкой молекулярной массой (PEG = 2000 Да и PLLA = 5000 Да), полученный, как описано ранее. ² Продукт получали в виде желтого порошка; 513 мг (76%). Mn (GPC / MALS) = 7600 (dn / dc = 0,056), = 1,05 (h2 ЯМР) = 7300; h2 ЯМР: (600 МГц, CDCl3) δ8,69 (с, 1H, 1-NpH), 8,32 (с, 1H, 5-NpH), 8,17 (д, J = 6, 2H, 2, 6-PhH), 8,09 (д, J = 12, 1H, 3-NpH), 7,85 (м, 2H, 7, 8-NpH), 7,72 (д, J = 12, 1H, 4-NpH), 7,21 (с, 1H, COCHCO ), 7,06 (д, J = 6, 2H, 3, 5-PhH), 5.17 (q, J = 6, 66H, PLLA-H), 3,62 (с, ушир., 179H, PEG-OCh3Ch3-), 3,36 (с, 3H, PEG-OCh4), 1,55 (м, ушир., 217H, PLLA- Ch4) (рис. S4).

2.3.

Изготовление наночастиц

Стереокомплексные наночастицы, как показано на рис. 1, были изготовлены, как описано ранее. ³⁷ Вкратце, чувствительный к кислороду полимер (BF2nbm (I) PLLA-PEG) (45 мг) и mPEG-PDLA (45 мг) растворяли в DMF (9 мл). Раствор кратковременно нагревали для облегчения растворения полимеров. С помощью шприцевого насоса раствор ДМФ добавляли к деионизированной (ДИ) воде (81 мл) с постоянной скоростью 1 мл / мин.Раствор фильтровали через фильтровальную бумагу Whatman, и ДМФ удаляли диализом (Select / Por; отсечка молекулярной массы от 12 до 14 кДа; химический стакан объемом 2 л заполняли деионизированной водой; воду меняли каждые 2 часа в течение 6 часов, затем давали отстояться. с ночевкой). Затем раствор наночастиц пропускали через 200-нм фильтр Whatman Anotop. Размеры и полидисперсность наночастиц анализировали с помощью динамического светорассеяния (DLS, Wyatt, DynaPro Plate Reader II), и результаты соответствовали предыдущим отчетам (рис. S5).²⁵

2.4.

Культура клеток

Клеточную линию рака молочной железы мыши E0771 (Ch4 Biosystems, Амхерст, Нью-Йорк) культивировали в RPMI 1 × 1640 с 300 мг / л L-глутамина (Гибко Гейтерсбург, Мэриленд). Клетки 4T07 получали из Американской коллекции типовых культур и культивировали в DMEM с 4,5 г / л D-глюкозы, 584 мг / л L-глутамина и 110 мг / л пирувата натрия (Gibco Gaithersburg, Мэриленд). К обеим клеточным средам добавляли 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (HI-FBS) (Gibco Gaithersburg, Мэриленд) и 1% v / v антимикотика / антибиотика (A / A) (Gibco, Gaithersburg, Maryland). ).Клетки поддерживали в увлажненном инкубаторе при 37 ° C с 5% CO2. Перед экспериментом два черных 96-луночных планшета с прозрачным дном (Greiner, Bio-One, Кремсмюнстер, Австрия) на каждую клеточную линию высевали с 4 × 104 клеток / лунку и инкубировали в течение 24 часов. Это привело к почти 100% слиянию для каждой клеточной линии во время исследования.

2,5.

Калибровка наночастиц бора

Для количественной оценки концентраций кислорода в экспериментальных условиях BNP калибровали с помощью спектрометра (SpectraMax M5, Molecular Devices, Сан-Хосе, Калифорния).Раствор 1: 5 об. / Об. BNP: деионизированная вода помещали в прозрачную кювету, и спектры измеряли для 0% O2, 5% O2, 10% O2, 15% O2, 20% O2, 50% O2 и 100% O2. Газообразный кислород смешивали с газообразным азотом для достижения этих определенных концентраций кислорода. Эти газы барботировали в тестовые растворы в течение 5 минут до сбора данных. Верх кюветы был покрыт двумя слоями Parafilm (American National Can, Menasha, Wisconsin), чтобы минимизировать диффузию кислорода в кювету с открытого конца. Контроллер массового расхода GFC (Ольборг, Оранжбург, Нью-Йорк) с датчиком кислорода (MaxO2, Ceramatec Inc., Солт-Лейк-Сити, Юта) последовательно с газовой линией использовались для изменения смеси молекулярного кислорода и азота и для обеспечения точности, соответственно. Раствор калибровали при 37 ° C. Температуру раствора измеряли с помощью термопары (модель Hh33, OMEGA Engineering, Inc., Norwalk, CT). Длина волны возбуждения 405 нм. Спектр излучения (от 450 до 600 нм) измеряли с шагом 10 нм [Рис. 2 (В)]. Эта система спектрометра также использовалась для сбора данных во время экспериментов.

Рис. 2

Процедура калибровки BNP. (a) BNP в присутствии 100% O2 (синий), комнатного воздуха (коричневый) и 100% N2 (желтый) показывают разницу в цвете при изменении эмиссии в различных средах. (b) Спектры сырых BNP в присутствии 0%, 5%, 10%, 15%, 20%, 50% и 100% O2. Флуоресценция и фосфоресценция независимы; флуоресценция остается устойчивой при 450 нм, а фосфоресценция уменьшается с увеличением процентного содержания кислорода около 560 нм. (c) Разложив полные спектры BNP (при 5% O2) на отдельные флуоресцентные и фосфоресцентные компоненты, составляющие весь сигнал, можно учесть загрязнение независимых спектров.(d) Калибровочная кривая показывает, что отношение F / P (флуоресценция к фосфоресценции) в зависимости от процентного содержания кислорода квадратично по всей кривой (от 0% до 100% O2). Поскольку наша выборка будет находиться в диапазоне процентного содержания кислорода от 0% до 21%, а BNP наиболее чувствительны при низкой оксигенации, наша аппроксимация показана от 0% до ∼20% кислорода со стандартными полосами ошибок, представляющими ожидаемую ошибку, основанную на оценках прогнозов, представляющий диапазон возможных значений O2 вокруг соответствия. (e) Показаны полностью разложенные флуоресцентные и фосфоресцентные спектры.Сплошные линии представляют флуоресценцию (F), а пунктирные линии — фосфоресценцию (P).

В MATLAB (v R2018b, Mathworks, Natick, Massachusetts) данные спектрометра использовались для параллельного факторного анализа (функция parafac.m в N-Way Toolbox ⁴⁵), который вычисляет два неотрицательных компонента интенсивности, которые вносят вклад в каждый измерение длины волны. Эти два компонента — флуоресценция и фосфоресценция — наиболее четко видны на рис. 2 (C) при 0% O2. Компонентные спектры для всех процентных содержаний кислорода показаны на рис.2 (E). Разбив спектральные компоненты каждой длины волны и каждого процента O2, соотношение флуоресценции к фосфоресценции (F / P) было вычислено более точно, определив точный процент, который каждый компонент вносит в общий сигнал. Повторяя это спектральное разложение для каждой известной концентрации кислорода, можно получить калибровочную кривую и полученную квадратичную аппроксимацию [Ур. (1), рис. 2 (г)]. Эта калибровочная кривая использовалась в оставшихся экспериментах для расчета процента O2 из измеренного отношения F / P [Рис.2 (с)]. Было обнаружено, что квадратичное соответствие данных хорошо (R2 = 0,9985) и ожидаемая стандартная ошибка прогнозов была <0,6; таким образом, мы можем использовать прямое соотношение, показанное ниже:

Ур. (1)

% кислорода = 1,12 (FP) 2 + 10,23 (FP) -8,25.

2,6.

Анализ морского конька

Мы использовали ранее опубликованную работу по изучению потребления кислорода клетками 4T07 по сравнению с клетками E0771 с помощью метаболического анализа морского конька, как показано в ссылке. 17. В этом исследовании анализатор XF24 от Seahorse Biosciences использовался для измерения биоэнергетического профиля линий клеток карциномы молочной железы 4T07 и E0771, которые были помещены в культуру до слияния.Были получены измерения в реальном времени OCR, скорости внеклеточного закисления и скорости продукции протонов. Эти параметры митохондриальной функции определяли в присутствии разобщающих агентов митохондрий: олигомицина, FCCP (трифторметоксикарбонилцианидфенилгидразон, разобщитель, который разрушает АТФ, перемещая протоны через клеточные мембраны) и антимицин. Следует отметить, что эти агенты вводили последовательно через порты картриджей для анализа XF до конечных концентраций 1 мкг / мл, 1 мкМ и 10 мкМ соответственно.Добавление олигомицина, ингибитора АТФазы, показывает, что OCR связано с производством АТФ. Максимальная частота дыхания, отражаемая потреблением кислорода, определяется инъекцией FCCP, которая переносит H + через клеточную мембрану перед использованием для окислительного фосфорилирования. Наконец, добавление ротенона, который ингибирует комплекс I, останавливает митохондриальное дыхание. Исследование позволило определить исходную митохондриальную активность, OCR от продукции АТФ и максимальное дыхание.

2.7.

Экспериментальная установка для оценки BNP OCR

96-луночные черные планшеты были оснащены двенадцатью лунками для каждого экспериментального условия, шестью лунками с клетками и шестью лунками без клеток, как показано в таблице S1 (дополнительные материалы). Объем растворов МНП, покрывающих лунки, составлял 50 мкл. Объем барьера из минерального масла, который замедлял внешнюю диффузию кислорода в систему во время визуализации, составлял 100 мкл (рис. 3). Каждый раствор состоял из 20% об. / Об. BNP. Контролем для эксперимента служили четыре скважины БНП, БНП с минеральным маслом и только минеральное масло.Условия эксперимента включают следующие растворы: BNP и клеточные среды с клетками; BNP и клеточные среды без клеток; и BNP, клеточная среда и 20 мМ дитионита натрия без клеток. Последний, поглотитель кислорода, выступал в качестве положительного контроля. Все экспериментальные клеточные среды были дополнены 10% об. / Об. HI-FBS, 1% об. / Об. A / A и представляли собой среду, не содержащую фенолового красного (RPMI или DMEM) (Gibco Gaithersburg, MD).

Рис. 3

Данные диффузии и скорректированного кислорода для E0771 и 4T07: (a) Несмотря на масляный барьер, который был помещен поверх экспериментального раствора (как с ячейками, так и без них), в скважины диффундирует значительный внешний кислород. .Для двух линий клеток E0771 и 4T07 мы скорректировали диффузию путем измерения% O2 с клетками и без них. (b) Разница между этими измерениями приводит к фактическому проценту O2 в растворе с ячейками. Это первый шаг в вычислении OCR.

2,8.

Облучение клеток

Рентгеновский облучатель (X-RAD 320, Precision X-Ray, North Branford, CT) использовался для части облучения каждого исследования. Во время транспортировки клетки были закрыты и оставались при температуре примерно 37 ° C через парафиновый воск.Каждую клеточную линию облучали в дозе 50% выживаемости: 1,85 Гр для E0771 и 2,49 Гр для 4T07, в соответствии с анализами клоногенной выживаемости. Клетки облучали с мощностью дозы 1,96 ± 0,54 Гр / мин стандартным фильтром F1, что соответствует закалке алюминиевым пучком толщиной 2 мм. Напряжение было 320 кВп, а ток — 10 мА. Эти значения также приблизительно соответствуют фракционированным дозам облучения, используемым в клинической практике.

2.9.

Экспериментальная регистрация спектра

Спектры планшета измеряли, как описано выше для калибровки.Сразу после облучения лунки отсасывали и добавляли экспериментальные растворы. Во время этих экспериментов клетки постоянно поддерживали при 37 ° C. Спектры измеряли через 0, 1, 2, 4, 6 и 24 часа после облучения. Точки времени измерения округляли до ближайшего часа, и клетки инкубировали и хранили в защищенной от света среде между каждым сбором.

2.10.

Microscope Imaging

BNPs можно визуализировать в стандартном конфокальном микроскопе (Zeiss Axio Observer.Z1, Carl Zeiss Microscopy, Кембридж, Массачусетс) с добавлением системы Quad-View (QV2, Photometrics, Tucson, Arizona), которая использует серию светоделителей и полосовых фильтров для разделения света от образца на четыре квадранта обнаружения. камера (Orca Flash, Hamamatsu, 2048 × 2048 пикселей, Бриджуотер, Нью-Джерси). В измерениях BNP использовался набор фильтров, предназначенный для обнаружения света при 470, 500, 535 и 560 нм с полосой пропускания ∼30 нм (флуоресцентные фильтры Brightline, 560/25 и 500/24 нм, Semrock) и ртутная лампа ( Лампа X-CITE 120, Lumen Dynamics, Миссиссога, Онтарио).Длиннопроходный флуоресцентный фильтр использовали для освещения образца возбуждающим светом с длиной волны 430 нм, в то время как флуоресценция и фосфоресценция на более высоких длинах волн пропускались через детекторную оптику. Фоновое изображение, полученное из лунки планшета с клетками, которое содержало только раствор среды, было отображено и вычтено из полученного изображения BNP в MATLAB. Изображение QV2 было выровнено, как и раньше, путем обрезки каждого изображения с индивидуальной длиной волны и последующей регистрации каждого изображения с помощью аффинного преобразования к изображению с длиной волны 500 нм.Отношение интенсивности, обнаруженной из излучения на 565 и 500 нм (F / P) BNP, вычислялось для каждого пикселя изображения. Поскольку оптика этой системы не похожа на устройство для чтения планшетов, калибровочная кривая для конкретного микроскопа была получена таким же образом, как описано в разд. 2.4. Для каждой временной точки (за исключением 24 часов после облучения) отношение F / P отображалось под микроскопом после считывания планшета. После получения среднего отношения F / P для каждого изображения данные были проанализированы таким же образом, как и спектры.

Сразу после получения спектров планшет-ридером было сделано микроскопическое изображение того же планшета перед тем, как его поместили обратно в инкубатор.

2.11.

Спектральный анализ и расчет скорости потребления кислорода

Как ранее описано в калибровке BNP, спектральное разложение в MATLAB было выполнено для всего планшета. Исходя из этого, были получены полные спектры флуоресценции и фосфоресценции и было рассчитано соотношение F / P.Затем, используя калибровочную кривую, количественно определяли процентное содержание кислорода для каждой лунки. Контрольные группы (BNP, BNP с минеральным маслом, только минеральное масло) были измерены: BNP показали ожидаемые спектры при 21% O2, а минеральное масло не внесло какой-либо значительной флуоресценции. Было подтверждено, что BNP сообщают ожидаемые спектры в среде с низким содержанием кислорода через группу BNP + дитионит натрия, где дитионит натрия поглощает O2 внутри скважины. Остальная часть анализа относится к экспериментальной группе: BNP + клеточная среда.Нашей первой задачей было внести поправку на внешнюю диффузию [рис. 3 (а)]. Скорость диффузии воздуха в планшет определяли количественно с использованием лунок без ячеек, вычисляя скорость изменения кислорода. Мы построили график зависимости этой скорости диффузии от значений кислорода (все еще используя лунки без ячеек), чтобы получить кривую и аппроксимацию, которая учитывает количество кислорода в лунке через внешнюю диффузию. Аналогичным образом, изменение содержания кислорода во времени было количественно определено в группе, содержащей клетки; диффузия была скорректирована с использованием уравнения подгонки, описанного выше [Рис.3 (б)]. Наконец, OCR был рассчитан с использованием изменения процентного содержания кислорода во времени с поправкой на эффекты диффузии [Ур. (2)]:

Ур. (2)

OCR (% O2, t) = Δ% O2Δt − D (% O2), где D — диффузия, а t — время.

2.12.

Статистический анализ

Анализ Бланда – Альтмана был проведен для сравнения анализов Seahorse и BNP. Применяли двухфакторный дисперсионный анализ (ANOVA), чтобы определить, изменило ли облучение значительно базальный OCR (по сравнению с необлученным контролем), с последующим апостериорным тестом Тьюки.Достоверным считали р <0,05.

4. Обсуждение

4.1.

OCR, количественно оцененные с помощью BNP. Выбросы являются жизнеспособной альтернативой анализу морского конька.

BNP демонстрируют последовательность в их реакции на различную кислородную среду с течением времени. Хотя общая интенсивность может снизиться (хотя, по нашему опыту, незначительно после отслеживания BNP в течение шести месяцев), ратиометрические интенсивности остаются стабильными; однако, по нашему опыту, интенсивность BNP слабо зависит от температуры эксперимента.По этой причине в этом эксперименте мы поддерживали 37 ° C (с помощью планшет-ридера). Эквивалентность золотого стандарта анализа морского конька (через анализ Бланда – Альтмана) и нашего метода наночастиц подчеркивает успех этого нового ратиометрического метода измерения OCR. Основным ограничением анализа морского конька, которое мы стремились преодолеть, является его неспособность транслировать в более сложные системы — либо трехмерные культуры, либо in vivo . Наша успешная количественная оценка OCR двух клеточных линий открывает много возможностей для будущих исследований, которые требуют динамического мониторинга OCR клеток.Кроме того, с модификациями установки оптического изображения в микроскопе станет возможным получение изображений во время измерений OCR. Оснастив мышь камерой спинного окна, введя опухолевые клетки и применив BNP, мы можем измерить pO2 через окно с помощью микроскопа, как описано в предыдущих исследованиях. ³³ ^, ³⁸ Измеряя локальные градиенты pO2 возле сосудов и комбинируя эти результаты с теоретическим моделированием с использованием известных параметров переноса кислорода и диффузии кислорода, мы можем экстраполировать локальный OCR на опухоль.Этот метод аналогичен эксперименту Dewhirst et al, ⁴⁶, в котором они использовали кислородные электроды и вывели локальный OCR в моделях камер с задним окном крыс.

Как и другие методы измерения OCR, диффузия кислорода через проницаемые материалы была значительной, несмотря на добавление масляного барьера; однако существенные эффекты диффузии контролировались с помощью контрольных лунок (лунок без клеток). Как только мы приняли во внимание это распространение, наш метод с помощью планшет-ридера позволил получить повторяемые и надежные OCR.

Хотя BNP при использовании со считывателем планшетов являются чувствительным и объективным методом количественной оценки OCR, основным преимуществом является возможность распространить этот метод на оптическую визуализацию. С добавлением системы фильтров Quad-View и анализа MATLAB мы можем отображать и количественно определять флуоресценцию и фосфоресценцию (рис. 6). Это не только позволяет проводить in vitro анализов клеточной гетерогенности и морфологии, но и является единственным методом количественной оценки OCR в сфероидах опухоли, опухолевых эмболах и ex vivo , срезах живых тканей.Это заметно отличается от анализа с морским коньком, в котором для измерения OCR используются специальные микропланшеты и картриджи. Для гетерогенных образцов (на предметных стеклах или в планшетах) или сложных трехмерных моделей культур (которые требуют специальных условий выращивания и планшетов) измерения OCR с помощью микроскопа неоценимы. Для нашей системы микропланшет необходим для определения базового содержания кислорода из-за его простой калибровки BNP; оптическое изображение будет вторичным показателем для определения относительных изменений в OCR.Последнее особенно полезно, потому что OCR могут модулироваться внешними факторами, такими как гипоксические условия окружающей среды, вместо химически индуцированных митохондриальных изменений в клетках. Наконец, в этом двойном методе используется стандартная технология (считыватель планшетов и конфокальный микроскоп), применяемая в большинстве лабораторий и; за исключением BNP, нет дорогих картриджей или добавок, необходимых для базовых измерений OCR.

4.2.

Зашумленные данные микроскопа снижают чувствительность оптического распознавания символов, измеренную с помощью BNP

Наши данные особенно подвержены шуму в микроскопе с большими стандартными отклонениями; однако очевидны те же тенденции, что и в данных планшет-ридера (т.е. облученные клетки 4T07 показывают более высокий OCR, чем необлученные клетки). Одним из источников шума, который можно более строго контролировать, является глубина резкости; Хорошо известно, что количество кислорода в системе in vitro сильно зависит от глубины измерения. В неопубликованном исследовании нашей группы разница между pO2 на поверхностном уровне среды сравнивалась с pO2 на клеточном уровне с использованием микроэлектрода O2. Для всех четырех клеточных линий (Hct116, 4T1, 786-0 и R3230 Ac) pO2 на клеточном уровне было значительно ниже (p <10-6, T-тест), чем на поверхности среды.⁴⁷ В микроскопе глубина визуализации варьируется в зависимости от того, где клетки находятся в фокусе, и в том числе от значительного фонового сигнала среды (от интенсивности на разной глубине). Согласно нашему неопубликованному исследованию, pO2 также будет неточным, если мы не будем снимать изображения на определенной глубине. Более того, анализ усредняет сигнал по всему полю зрения, а не только по ячейкам. Протокол маскирования для областей интереса (то есть ячеек), вероятно, значительно снизит неопределенность измерений.В планшет-ридере используется метод считывания снизу, который снижает этот шумовой эффект, обеспечивая более надежные измерения OCR. Используя технику освещения структуры, сигнал, записанный в точке фокуса (в ячейках), дает измерение, которое обеспечивает точную точку данных на уровне ячейки.

4.3.

OCR облученных клеточных линий показывают противоположные тенденции

Измерения OCR экспериментальных (облученных) и исходных (необлученных) клеток были согласованными.E0771 демонстрирует очень значительное снижение OCR между облученными и необлученными клетками. Интересно, что хотя обе клеточные линии были облучены с долей выживания 50%, они демонстрируют противоположные тенденции: облученные клетки E0771 демонстрируют более низкий OCR, чем необлученные клетки, тогда как облученные клетки 4T07 показывают более высокий OCR, чем необлученные клетки. Процессы, участвующие в производстве энергии, составляют большую часть потребления кислорода базовой скоростью дыхания необлученных клеток, и после облучения наблюдаемые изменения в OCR клеток E0771 могут указывать на снижение мембранного потенциала, необходимого для производства АТФ.²² ^, ⁴⁸ Наблюдаемое увеличение OCR в клетках 4T07 может быть связано с увеличением репарации ядерной ДНК; Есть несколько исследований, которые демонстрируют эти механистические корреляции в облученных раковых клетках. ⁴⁸ ^— ⁵⁰ В частности, для 4T07, вероятно, существует корреляция между репарацией ядерной ДНК и усилением циклин-зависимой киназы 1, киназы пируватдегидрогеназы 1 и метаболизмом глюкозы в ответ на облучение.⁴⁸ ^— ⁵¹ В исследовании Qin et al, ⁴⁸ три клеточные линии (MCF10A, HK18 и P + JB6) показали трехкратное увеличение OCR (измерено с помощью кислорода типа Кларка). электрод) в течение 40 ч после однократного воздействия ионизирующего излучения. Это увеличение может быть результатом репарации ДНК, процесса, потребляющего АТФ. ⁴⁸ В то время как это исследование, среди прочего, ⁵⁰ показывает, что большинство линий раковых клеток демонстрируют повышенный OCR после радиационного воздействия, E0771 демонстрирует иную тенденцию.Для клеток E0771 мы не наблюдаем повышенного пострадиационного воздействия на OCR. Клетки E0771 имеют более низкую базальную OCR и более высокую чувствительность к излучению, чем 4T07, оба заметных эффекта сниженного энергетического метаболизма. ⁴⁹ В этих результатах может быть ряд конкурирующих эффектов: в зависимости от доли клеток, погибших в результате апоптоза и двухцепочечных разрывов ДНК, необходимость увеличения потребления АТФ для смягчения повреждений будет меньше. Переход от анаэробного метаболизма к аэробному метаболизму также будет модулировать кислородный метаболизм в зависимости от таких факторов, как индуцируемый гипоксией фактор 1альфа и другие модуляторы метаболизма глюкозы.Это лишь некоторые из возможностей, которые объясняют данные, но ясно, что потребуется специальный эксперимент, направленный на определение основных механизмов дифференциального воздействия излучения на OCR этих двух клеточных линий.

Анализ потребления внеклеточного кислорода (ab197243)

Вы можете использовать настройку, аналогичную описанной в протоколе, начиная с рекомендуемого разведения 1:15 для 96-wp. Однако, если исследуемые образцы ткани должны быть большего размера, мы рекомендуем вам скорректировать анализ для использования в 48 или даже 24 wp.В этом случае, однако, вам придется провести некоторую оптимизацию, так как при этом будет потребляться больший объем реагентов и минерального масла.

Например, для 48-луночных планшетов объем анализа увеличится до 300 мкл — 400 мкл, поэтому при использовании 2X или более реагентов объем анализа для измерения должен быть достаточно большим, чтобы обеспечить достаточно большую длину пути для измерения достаточно надежного сигнала от прибора. хорошо.

Образцы тканей следует готовить так же, как описано в протоколе, но измерения следует проводить в культуральных средах, используемых для культивирования тканей, чтобы образцы могли метаболизировать и потреблять O2 в нормальном режиме.

В ночной инкубации нет необходимости или преимуществ. Зонд добавляется непосредственно перед кинетическим измерением (90–120 минут), поскольку он измеряет изменение содержания кислорода в образце с течением времени, которое потребляется клетками / тканями.

Анализ должен быть оптимизирован для количества клеток / размера ткани на объемы анализа в 150 мкл в 96-луночном планшете. Поэтому вам следует подготовить образцы разного размера, поместить образцы тканей в лунки и провести кинетические измерения для оценки различных уровней усиления сигнала, тем самым определяя минимальное количество ткани, необходимое для определения уровней потребления O2.

Другие рекомендации:

Стандартизируйте массу ткани и Prep. Использовать нормализацию (АТФ, общий белок, взвешивание)
Использовать прецизионный нож для срезов
Хранить образцы тканей в карбогене (95% O2), предварительно уравновесить среду
Размер образцов 2-4 мм x 200 мкм можно измерить в 48WP при> 0,2-0,4 мл минерального масла. (или аналогичный в 24-луночных планшетах)
Предварительно нагрейте культуральную среду и инструменты при 37 ° C.
Используйте непрерывное встряхивание на считывающем устройстве флуоресцентных планшетов.
Использовать Верхнее чтение

Ценообразование и психология потребления

Вкратце об идее

Почему вас должно волновать, что ваши клиенты на самом деле используют вашу продукцию? Разве не достаточно того, что они купили их? Нет, если вы хотите повторить бизнес.

Рассмотрим это противоречивое влияние цены на лояльность клиентов: когда ваши клиенты знают о стоимости вашего продукта, они, скорее всего, воспользуются этим продуктом , чтобы почувствовать, что они окупили свои деньги. И чем больше они его используют, тем больше вероятность, что они купят его снова.

Например, предположим, что Мэри и Билл посещают оздоровительный клуб. Билл платит 600 долларов при регистрации; Мэри выбирает план с оплатой за 50 долларов в месяц. Кто с большей вероятностью продлит свое членство? Мэри. Каждый месяц ей напоминают о стоимости, поэтому она работает больше, чтобы окупить свои деньги.А участники, которые часто тренируются, обычно обновляются.

Но чтобы стимулировать начальный спрос , большинство компаний маскируют свои цены за счет предварительных покупок, сезонного членства, годовой подписки и т. Д. Ценообразование, ориентированное на спрос, имеет достоинства, но руководители, которые используют его исключительно , рискуют торговать с долгосрочным клиентом удержание для краткосрочных продаж.

Идея на практике

Вот как работают цены и потребление:

Клиенты, использующие платные продукты , как правило, покупают их снова. Потребление имеет значение для любой бизнес , который полагается на удовлетворенность клиентов для создания положительных отзывов и повторных продаж. Клиенты не могут повторно покупать или хвалить продукты, которые они никогда не потребляли.

Это особенно важно для предприятий, продающих подписки или членство, где долгосрочная прибыльность зависит от удержания клиентов, поскольку привлечение клиентов обходится очень дорого. Но удержать их сложно. Уровень обновления большинства журналов составляет 60% или меньше.

Люди склонны потреблять товары, если знают их цену. Почему? Эффект невозвратных затрат: люди ненавидят растрату безвозвратных инвестиций. Например, через две недели после того, как он заплатил 300 долларов за вступление в теннисный клуб, у мужчины заболел теннисный локоть, но он продолжал играть.

восприятий покупателей цены определяют их вероятность потребления оплаченных товаров. Когда люди расплачиваются кредитной картой, они с меньшей вероятностью запомнят стоимость или потребят товар. В одном кинотеатре показатель неявки для клиентов с кредитными картами был в 10 раз выше , чем для клиентов с наличными.

Объединение цен скрывает стоимость отдельного продукта, снижая вероятность его потребления. Абонементы «скрывают» стоимость каждого билета, непреднамеренно побуждая клиентов рассматривать свои билеты как бесплатные. При небольшом давлении невозвратных расходов люди не используют билеты, что снижает их вероятность покупки в следующем сезоне.

Для увеличения ценообразования, ориентированного на спрос, с помощью тактики, ориентированной на потребление:

Практика управления доходностью. Директор театра может ожидать большего количества неявок, если доля обладателей сезонных абонементов высока. Она могла бы лучше управлять расходами, укомплектовав штат в соответствии с ожидаемым фактическим , а не оплаченным спросом, или увеличить выручку за счет перепродажи мероприятий, на которые она ожидает много неявок.

Пошаговые выплаты для сглаживания потребления. Путем увеличения членских взносов для более широкого использования своих объектов в течение года клубы здоровья могли бы предотвратить переполнение, увеличивая удовлетворенность клиентов.

Психологически увязать выплаты с пособиями. Распределяя стоимость отдельных услуг в рамках совокупной платы, HMO могут побуждать пациентов пользоваться оплаченными льготами. Это способствует профилактике и сокращению расходов ОПЗ.

Спросите любого руководителя, как ценовая политика влияет на спрос на продукт или услугу, и вы получите уверенный и аргументированный ответ. Спросите того же руководителя, как ценовая политика влияет на потребление — в какой степени клиенты используют продукты или услуги, за которые они заплатили, — и вы получите в лучшем случае приглушенный ответ.Мы обнаруживаем, что менеджеры редко, если вообще когда-либо, думают о потреблении, когда устанавливают цены, и это обходится дорого.

Рассмотрим этот пример. Двое друзей, Мэри и Билл, вступают в местный клуб здоровья и соглашаются на годичное членство. Билл принимает решение о годовом плане выплат — 600 долларов при регистрации. Мэри выбирает план ежемесячных выплат — 50 долларов в месяц. Кто с большей вероятностью будет заниматься спортом на регулярной основе? И кто с большей вероятностью продлит членство в следующем году?

Практически любая теория рационального выбора утверждает, что они равновероятны.В конце концов, они платят одинаковую сумму за одни и те же пособия. Но наши исследования показывают, что Мэри гораздо чаще занимается спортом в клубе, чем ее подруга. Билл почувствует необходимость окупить свои деньги в самом начале своего членства, но это стремление уменьшится, поскольку боль от его выплаты в размере 600 долларов уйдет в прошлое. Мэри, с другой стороны, будет постоянно напоминать о стоимости ее членства, потому что она вносит платежи каждый месяц. Она будет чувствовать потребность окупить свои деньги в течение года и будет тренироваться более регулярно.Эти регулярные тренировки приведут к чрезвычайно важному результату с точки зрения клуба здоровья: Мэри с гораздо большей вероятностью продлит свое членство по окончании года.

Для многих руководителей идея о том, что они должны привлекать внимание потребителей к цене, заплаченной за продукт или услугу, противоречит здравому смыслу. Компании давно стремились скрыть стоимость своих товаров и услуг, чтобы увеличить продажи. И это правильно — если компании не удастся осуществить первоначальную продажу, ей не придется беспокоиться о потреблении.Для стимулирования продаж менеджеры клубов здоровья поощряют участников получать оплату раньше; ОПЗ поощряют автоматические вычеты из заработной платы; а круизные компании объединяют небольшие конкретные расходы в единый комплексный сбор.

Однако руководители могут сдерживать потребление, применяя такую практику ценообразования. Люди с большей вероятностью будут потреблять продукт, когда знают о его стоимости — когда чувствуют себя «из своего кармана». Но общие методы ценообразования, такие как предварительные продажи, сезонные билеты и объединение цен, служат для того, чтобы скрыть, сколько покупатель потратил на данный продукт, уменьшая вероятность того, что покупатель действительно воспользуется им.И покупатель, который не использует продукт, вряд ли купит этот продукт снова. Руководители, применяющие такую тактику ценообразования, не учитывая ее влияние на потребление, могут жертвовать долгосрочным удержанием клиентов на краткосрочное увеличение продаж.

Психология потребления

Давайте подробнее рассмотрим, почему потребление важно и как цены влияют на потребление.

Более высокое потребление означает более высокие продажи.

Мы считаем, что одним из первых шагов в построении долгосрочных отношений с клиентами является их желание потреблять уже приобретенные продукты.Исследования неоднократно показывали, что степень, в которой клиенты используют платные продукты, скажем, в течение одного года, определяет, будут ли они повторять покупку в следующем году. Например, одно полевое исследование показало, что члены оздоровительного клуба, которые тренировались четыре раза в неделю, с гораздо большей вероятностью возобновили свое членство, чем те, кто тренировался только один раз в неделю. Согласно другому исследованию, клиенты, которые регулярно пользовались улучшенной услугой кабельного телевидения в течение одного года, с большей вероятностью возобновили свои подписки в следующем году, чем те, кто пользовался услугой лишь изредка.¹

Степень использования покупателями оплаченных продуктов определяет, будут ли они повторять покупку.

Потребление имеет большое значение для чистой прибыли во многих отношениях. В компаниях, которые продают подписки или членство, таких как Time Warner, YMCA или Metropolitan Opera, жизненно важно удержание клиентов. Но удержать клиентов непросто: в большинстве журналов процент обновления составляет 60% или меньше, а клубы здоровья удерживают только 50% своих членов каждый год.По мере усиления конкурентного давления и роста стоимости привлечения клиентов ключом к долгосрочной прибыльности является обеспечение того, чтобы клиенты действительно использовали продукты и услуги, которые они покупают.

Потребление также помогает установить затраты на переключение. Например, в сфере программного обеспечения компании часто зарабатывают больше денег на продаже обновлений, чем на продаже первоначального приложения. Как только клиенты начинают использовать приложение, они должны либо покупать обновления, либо совершать болезненный переход на другую систему.Компании, чье программное обеспечение покупается, но никогда не используется, — как его пренебрежительно называют ПО — упускают возможность удержать клиентов на долгие годы.

Потребление не менее важно для предприятий, которые полагаются на поток доходов, состоящий из двух частей. Для кинотеатров, спортивных арен и концертных залов продажа билетов — лишь один из источников дохода; парковка, еда и напитки, а также продажа сувениров — второй прибыльный источник. Отчет по маркетингу команды подсчитал, что посещение бейсбольной игры высшей лиги в 2000 году для семьи из четырех человек стоило 121 доллар.36. Только половина этой суммы пошла на покупку билетов; другая половина была потрачена на пиво, газированные напитки, хот-доги, программы, бейсболки и тому подобное. Очевидно, что если владельцы билетов не посещают мероприятия, эти высокоприбыльные вторичные продажи теряются.

Третьи организации считают, что их основная миссия состоит в поощрении определенных видов потребления. HMO, например, знают, что общее состояние здоровья их клиентов улучшится — и их собственные расходы будут ограничены — если пациентов можно убедить делать регулярные прививки и периодические осмотры.Но они добились ограниченного успеха в этом. По некоторым оценкам, 15% застрахованных детей не получают всех необходимых им прививок, 30% застрахованных женщин из группы риска не проходят маммографию в течение любого двухлетнего окна, а 50% застрахованных мужчин старше 50 не проходят медосмотр. в течение любого трехлетнего периода.

Наконец, потребление важно для любого бизнеса, который полагается на удовлетворение, чтобы генерировать повторные продажи и положительную молву. Что касается таких разнообразных продуктов, как вино, книги и КПК, клиенты не будут покупать снова и не рассказывать о продуктах, если они вообще не будут их использовать.В самом деле, трудно представить себе бизнес, в котором потребление не имеет значения.

Затраты привода расход.

Люди с большей вероятностью будут потреблять продукт, если они знают о его стоимости. Это известно как эффект безвозвратных затрат: потребители чувствуют себя вынужденными использовать продукты, за которые они заплатили, чтобы не думать, что они зря потратили свои деньги. Хорошо задокументировано, что потребители обычно принимают во внимание невозвратные затраты при принятии решения о дальнейших действиях. В одном примере, который стал известным Ричардом Талером, поведенческим экономистом из Чикагского университета, мужчина вступает в теннисный клуб и платит членский взнос в размере 300 долларов в год.Спустя всего две недели игры у него развивается острый случай теннисного локтя. Несмотря на боль, мужчина продолжает играть, говоря: «Я не хочу тратить 300 долларов».

Аналогичным образом Хэл Аркс, психолог из Университета Огайо, попросил 61 студента колледжа предположить, что они по ошибке купили билеты на лыжную прогулку за 50 и 100 долларов на одни и те же выходные. Студентам сообщили, что поездка за 50 долларов им понравится гораздо больше. Затем им сказали, что они должны выбрать между двумя поездками и позволить другому билету пропасть.Удивительно, но более половины студентов сообщили, что они отправятся в менее приятную поездку за 100 долларов. Для этих студентов более крупные невозвратные расходы имели большее значение, чем большее удовольствие, которое они получали от менее дорогой поездки.

Ценообразование влияет на восприятие стоимости.

Наше исследование также показывает, что потребление определяется не столько фактической стоимостью оплаченного продукта, сколько его предполагаемой стоимостью. На это восприятие сильно влияет способ оценки продукта.Некоторые политики ценообразования подчеркивают предполагаемую стоимость оплаченного продукта, в то время как другие политики ценообразования маскируют стоимость.

Рассмотрим такую простую вещь, как способ оплаты. Денежная транзакция на 10 долларов выглядит иначе, чем на 100 долларов. Отсчет валюты и получение сдачи позволяют покупателю хорошо осознавать масштабы сделки. Но транзакция по кредитной карте на 10 долларов во многих отношениях неотличима от транзакции на 100 долларов — в обоих случаях требуется просто подписать листок бумаги.

Тактика ценообразования, которая маскирует, а не подчеркивает цены, снижает давление на покупателей, заставляющих их использовать продукт, чтобы окупить свои деньги.

Неудивительно, что люди лучше запоминают стоимость продуктов, если платят наличными, чем при оплате кредитной картой. Кроме того, они испытывают большее давление, чтобы потреблять продукты, если они платят наличными, чем если они платят кредитной картой. В одной из исследованных нами театральных компаний уровень неявки для клиентов с кредитными картами был в десять раз выше, чем для клиентов за наличные. Другие тактики ценообразования, которые маскируют, а не подчеркивают цены, такие как абонементы, предварительные покупки и подписки, также снижают давление со стороны потребителей продукта, чтобы получить окупаемость.

Собираем кусочки вместе

Поскольку ценообразование оказывает такое сильное влияние на потребление, менеджеры должны принимать взвешенные решения о том, когда и как взимать плату за товары и услуги.

Сроки.

Компании часто имеют большую свободу действий в отношении выставления счетов за товары и услуги. Некоторые компании требуют оплаты во время или почти в то время, когда продукт будет потреблен — это верно, когда вы покупаете Биг Мак или билет в кино. Другие предприятия требуют оплаты задолго до потребления.По этому принципу издавна действовали организаторы концертов и спортивные команды. Клубы здоровья и загородные клубы также взимают большие первоначальные взносы. Наконец, некоторые предприятия позволяют клиентам платить долгое время после покупки продукта. Все чаще автопроизводители и производители бытовой электроники рекламируют схемы «покупай сейчас, плати потом».

Компании принимают эти решения о сроках, основываясь либо на финансовых соображениях (лучше заплатить раньше, чем позже), либо на соображениях спроса («покупай сейчас, плати потом» увеличивает потребительский спрос).Но это может быть недальновидно. Платежи, которые происходят во время потребления или незадолго до него, привлекают внимание к стоимости продукта, повышая вероятность его потребления. Напротив, платежи, произведенные задолго до или после фактической покупки, уменьшают внимание к стоимости продукта и уменьшают вероятность того, что он будет использован.

Мы провели опрос в Чикагском музее науки в 1997 году, чтобы определить, как время влияет на потребление. Мы представили 80 посетителям следующий гипотетический сценарий: «Шесть месяцев назад вы увидели рекламу театрального мероприятия и позвонили, чтобы забронировать билет на 50 долларов.Вчера вы пошли в кассу и заплатили 50 долларов наличными за билет, который не подлежит возврату. Этим утром вы проснулись с гриппом. Событие сегодня вечером. Ты пойдешь в театр или останешься дома? » Почти 60% людей заявили, что пойдут в театр. Они не хотели, чтобы те 50 долларов, которые они только что заплатили за билет, пропали даром.

Затем мы представили немного другой сценарий другой группе из 80 посетителей. Этой группе сказали, что они оплатили билет за полгода до мероприятия, а не накануне.На этот раз менее 30% опрошенных сказали нам, что пойдут в театр. Единственная разница между двумя сценариями заключалась в сроках выплаты. Тем не менее, этой разницы было достаточно, чтобы снизить прогнозируемое потребление на 50%. Результаты этого, а также нескольких аналогичных опросов показывают, что оперативность платежа может иметь решающее значение для потребления оплаченного продукта.

Фактически, потребление внимательно отслеживает сроки платежей клиентов. Мы проанализировали данные об оплате и посещаемости 200 членов престижного оздоровительного клуба в Колорадо.По контракту все участники были облечены в членство на один год, которое стоило им 600 долларов каждый. Ценовая политика клуба позволяла членам выбирать один из четырех планов оплаты: годовой, полугодовой, квартальный и ежемесячный.

Членов, сделавших разовый годовой платеж, чаще всего использовали клуб в месяцы сразу после платежа, что отражает значительный эффект невозвратных затрат. Но со временем эффект невозвратных затрат рассеялся. К последним месяцам люди, казалось, относились к своему членству так, как будто они были бесплатными, и работали со скоростью, которая составляла лишь четверть от того, что было в первые несколько месяцев.То же самое относится и к членам, которые платили раз в полгода или квартал: посещаемость была самой высокой сразу после выплаты, а затем неуклонно снижалась до следующего платежа. Это привело к пилообразной схеме использования, резкое увеличение в первый и седьмой месяцы для участников с полугодовой оплатой и каждые три месяца для участников с квартальной оплатой. Напротив, схема использования членов, которые платят ежемесячно, была более гладкой. Так как им каждый месяц напоминали о стоимости членства, они пользовались услугами по стабильной ставке (см. Выставку «Потребление следует за сроками платежей»).Сроки платежей важны, потому что они влияют на удержание клиентов клубом. Участники, которые платили ежемесячно, пользовались тренажерным залом наиболее последовательно, что делает эту схему ценообразования наиболее вероятной для продления членства.

Потребление соответствует срокам платежей. Наш анализ записей одного оздоровительного клуба показал, что потребление точно соответствует срокам платежей. Независимо от того, производили ли члены ежегодные, полугодовые или ежеквартальные платежи, использование клуба было самым высоким в месяцы сразу после платежа и неуклонно снижалось до следующего платежа.Участники, которые платили ежемесячно, пользовались тренажерным залом наиболее последовательно, что делает эту схему ценообразования наиболее вероятной для продления членства.

Ценовая комплектация.

Организации часто группируют цены, чтобы увеличить спрос на продукты и услуги. Эта практика действительно увеличивает краткосрочный спрос, но может также снизить потребление.

Несколько исследований демонстрируют эту тенденцию. Мы провели опрос в лыжном городке Колорадо, например, представив два немного разных сценария двум группам из 50 лыжников.Первой группе сказали: «В Колорадо ранняя весна, и вы на четырехдневных лыжных каникулах. В день приезда вы купили четыре однодневных лыжных билета по 40 долларов каждый. Настало утро последнего дня. У вас было три отличных дня катания на лыжах, но прошлой ночью дождь обрушился на местность, испортив склоны. Подруга советует не кататься на лыжах, а расслабиться и уйти пораньше, чтобы дома не было пробок ». Мы представили тот же сценарий другой группе с одним важным отличием. Мы сказали членам второй группы, что вместо того, чтобы покупать четыре однодневных билета по 40 долларов за штуку, каждый из них купил четырехдневный ски-пасс за 160 долларов.

Мы попросили членов обеих групп сообщить о своей вероятности катания на лыжах по шкале от одного до десяти, где один указал «определенно не будет кататься на лыжах», а десять — «определенно будут кататься на лыжах». Средний ответ первой группы составил 7,0, что указывает на высокую вероятность катания на лыжах на четвертый день. Средний ответ второй группы составил 3,3, что указывает на низкую вероятность катания на лыжах.

Эти два сценария были финансово идентичны, так в чем разница? В этом и нескольких других исследованиях мы обнаружили, что ценовое объединение значительно влияет на потребление.Проще говоря, гораздо легче определить и учесть стоимость отдельного продукта в разукрупненной транзакции, чем в групповой транзакции. Однозначное соотношение между ценой и выгодами в разукрупненной транзакции делает стоимость этого предмета очевидной, создавая сильный эффект невозвратных затрат и высокую вероятность потребления.

Нигде влияние объединения цен на потребление не является более очевидным, чем в случае сезонных абонементов. Покупатель платит единую сумму за набор отдельных событий, что затрудняет распределение затрат на какое-либо одно выступление или игру.Это снижает вероятность его использования. Мы проверили это, проанализировав данные о покупках билетов и посещаемости летних шекспировских фестивалей. Фестиваль проходил с июня по август 1997 года и включал постановку четырех пьес. Некоторые держатели билетов купили билеты на один спектакль, некоторые — на два или три спектакля, а третьи — на все четыре спектакля. Мы обнаружили, что процент неявки людей, купивших билеты на одиночный спектакль, составлял 0,6%, что указывает на то, что явились почти все владельцы билетов.Но процент неявки для тех, кто покупал билеты на два спектакля, составлял 3,5%; за три игры — 13,1%; и за четыре игры — 21,5%. По мере того как пакет билетов увеличился с одного до четырех спектаклей, вероятность того, что человек не появится на одном из спектаклей, выросла в 35 раз.

Можно утверждать, что более высокий уровень неявки тех, кто купил билеты на несколько спектаклей, был вызван другими факторами: скукой (владельцы билетов устали от Шекспира) или, возможно, неудовлетворенностью (после первого спектакля владельцы билетов осознали качество выступлений было не очень).Однако когда мы посмотрели только на первый спектакль, на который каждый человек купил билеты, картина осталась прежней. По сравнению с показателем неявки в 0,6% для владельцев билетов на разовую игру, процент неявки на первую игру для тех посетителей, которые приобрели билеты на две, три и четыре игры, составлял 2,8%, 7,8% и 15,8% соответственно. Таким образом, объединение билетов в пакеты имело такой же эффект, как и предварительная продажа билетов в наших предыдущих примерах: оно скрывало стоимость каждого билета. Не имея возможности связать затраты и выгоды от какого-либо конкретного спектакля, посетители, купившие билеты на несколько спектаклей, все чаще относились к своим билетам как к бесплатным.Из-за небольшого давления невозвратных расходов многие из этих клиентов не использовали билеты, за которые они заплатили ранее, что снизило их вероятность повторения покупки билетов в следующем сезоне.

Связь цены и потребления

Мы не предлагаем руководителям отказаться от своей текущей политики ценообразования, ориентированной на спрос, и сосредоточиться исключительно на стимулировании потребления путем принятия решений о ценообразовании. Это было бы нереально и неразумно. Многим компаниям не хватает возможности (или желания) реструктурировать свою практику ценообразования.В некоторых случаях отраслевые нормы или ожидания потребителей диктуют использование предварительных продаж или группировки цен. Однако мы считаем, что руководители должны учитывать потребление при установлении цен. Вот несколько советов, как это сделать.

Практика управления доходностью.

Менеджеры

могут управлять операциями более эффективно, предвидя фактический спрос с учетом естественного сочетания объединенных и разделенных покупок или соотношения авансовых и текущих покупок. Рассмотрим случай директора театра.Она может прогнозировать, что процент неявки составит 20%, если доля владельцев сезонных абонементов высока, и уровень неявки только 5%, если доля владельцев сезонных абонементов мала. Вооружившись этими знаниями, она могла лучше управлять расходами, укомплектовывая персонал в соответствии с фактическим, а не оплачиваемым спросом. В качестве альтернативы, она могла увеличить доходы, перепродавая одни мероприятия, а не другие. Во многом так же, как авиакомпания продает больше билетов на рейс пропорционально ожидаемому количеству неявок, менеджер театра может перепродавать спектакли, где ожидается, что процент неявок будет высоким.

Пошаговые выплаты для плавного потребления.

Второй способ действий, несколько более активный, но все же в рамках существующей практики ценообразования, заключался бы в смещении циклов выставления счетов так, чтобы спрос сглаживался с течением времени. Это еще одна форма управления урожайностью. Например, клубы здоровья знают, что большинство их новых членов регистрируются в определенное время года, чаще всего в январе. Но многие по-прежнему предлагают скидки участникам, которые полностью платят в начале календарного года.В итоге пик использования приходится на январь, февраль и март, что снижает удовлетворенность клиентов из-за нагрузки на помещения. Клубы здоровья могут изменить циклы выставления счетов, чтобы компенсировать эту тенденцию. Например, оздоровительный клуб может предложить 10- или 14-месячные контракты, возможно, со скидкой, чтобы прервать цикл январских продлений. Со временем это изменение поможет сгладить спрос и повысить удовлетворенность клиентов.

Время выплат для максимального потребления.

Некоторые руководители могут делать больше, чем просто реагировать на спрос: они могут использовать свою ценовую политику для активного поощрения потребления. Возможно, наиболее действенный способ добиться этого — более тесно увязать выплаты с пособиями. Рассмотрим владельцев абонементов Boston Red Sox, которых просят заплатить за билеты за пять месяцев до начала сезона. Чтобы повысить посещаемость в течение сезона, руководители Red Sox могли распределить этот один крупный платеж. Они могли, скажем, выставлять счета клиентам в четыре этапа.Клиенты могут даже предпочесть этот подход, потому что небольшие платежи более удобны в финансовом отношении. Точно так же клуб здоровья, который мы изучали, мог бы увеличить посещаемость и, следовательно, удержание клиентов, продвигая годовое членство с ежемесячными, а не ежегодными платежами.

Психологически увязать выплаты с пособиями.

Некоторые компании рассматривают группировку цен как необходимый инструмент для стимулирования начальных продаж: если они устранят группировку цен, они могут отменить продажу. Однако организации могут психологически разделить эти предложения, чтобы стимулировать потребление.Один из способов сделать это — выделить цены на отдельные товары в комплекте после оплаты. Например, туристические компании могут указать примерную стоимость предложений в путевках. Некоторые круизные лайнеры с системой «все включено» уже заставляют гостей платить за напитки, еду и развлечения с помощью бусинок, чтобы подчеркнуть тот факт, что на самом деле нет ничего бесплатного. Рестораны могут предлагать одни и те же блюда как по меню, так и в рамках ужина с фиксированной ценой, так что стоимость каждого блюда в последнем становится ясной.Точно так же ОПЗ могут способствовать профилактическому уходу, включив стоимость отдельных услуг в совокупную плату, сделав стоимость этих услуг более очевидной для клиента. Это повысит вероятность того, что зачисленные участники получат те льготы (прохождение обследований, иммунизации и т. Д.), За которые они уже заплатили.

Уменьшите расход.

Не все организации хотят постоянно поощрять потребление. Представьте себе менеджера действительно дефицитного ресурса, такого как частное поле для гольфа, прекрасным воскресным утром в июне.Главной задачей является управление пиковым спросом. Существующие альтернативы состоят в том, чтобы ограничить количество допущенных клиентов, как когда членство в загородном клубе ограничено, или принять всех клиентов и рискнуть недовольством, когда объект загружен. Первое решение ограничивает доходы; второй увеличивает разочарование клиентов. Управляя тем, когда и как производятся платежи, руководители могут максимально увеличить общее количество клиентов, которые платят за их услуги, и в то же время ограничить пиковый спрос. Если менеджер поля для гольфа взимает ежегодные членские взносы в январе или феврале, задолго до начала сезона игры в гольф, к наступлению пикового летнего сезона у участника исчезнут трудности с оплатой, что снизит потребность в получении прибыли.Это должно позволить клубу максимально увеличить свою членскую базу, не отвлекая участников, желающих играть в пиковый период. Напротив, если клуб выставит счет своим членам незадолго до пикового сезона, скажем, в мае или июне, он будет непреднамеренно стимулировать спрос в самое загруженное время. Точно так же, когда отдыхающие на горнолыжном курорте покупают недельные билеты на подъемник, курорт может предоставить им семь дневных билетов или пакетный проездной. Первый будет стимулировать ежедневное потребление («Я не собираюсь тратить сегодняшние билеты!»), А второй замаскирует стоимость катания на лыжах в любой день и уменьшит скопление людей на склонах.• • •

Менеджеры много времени думают о том, как заставить клиентов покупать их продукты и услуги. Но это только полдела. Если организации хотят построить долгосрочные отношения с клиентами, они должны убедиться, что их клиенты действительно используют их продукты. Первый шаг — это ценообразование.

Версия этой статьи появилась в сентябрьском номере журнала Harvard Business Review за 2002 год.