Разное

Дт 76 кт 91 означает: Дебет 76 Кредит 91 — что означает

29.11.1974

Содержание

Как закрыть счет 76: проводки, примеры, особенности

Сч. 76 применяют для распределения финансов между кредиторами и дебиторами. Для него предусмотрено более 7 хозяйственных операций. Сч. закрывают «в реальном времени», а не в завершение расчетного периода. Остаток на регистре бывает кредитовым и дебетовым.

Для отражения в бухгалтерском учете взаиморасчетов с должниками и кредиторами применяется одноименный регистр. Он предполагает открытие различных субсчетов в зависимости от совершаемой операции. Рассмотрим процедуру и периодичность закрытия счета 76.

Назначение

Ведение расчетов с прочими дебиторами и кредиторами так или иначе осуществляется практически в каждой организации. К регистру можно открывать любые субсчета на усмотрение компании, помимо закрепленных в Плане.

Основные хозяйственные операции, требующие использования сч. 76, таковы:

  • Дополнительное страхование сотрудников. Обязательное медицинское отражается на сч. 69.
  • Претензии контрагентов.
  • Не полученная своевременно (депонированная) заработная плата.
  • Исполнительные документы сотрудников.
  • Прочие операции. К ним, например, можно отнести расчеты по займам, выданным организацией своему учредителю, по процентам на остаток по счету, начисленным банком.
  • Полученные и выданные авансы. В этом случае на сч. 76 АВ и 76 ВА будет аккумулироваться налог на добавленную стоимость от полученной или перечисленной предоплаты
  • Лизинговые платежи и т. д.

Сч. 76 является активно-пассивным, поэтому остаток может быть как дебетовым, так и кредитовым.

Закрытие

В отличие от других счетов, при осуществлении расчетов с дебиторами и кредиторами не всегда представляется возможным обобщить все итоги в конце расчетного периода и свести его сальдо к нулю.

Поэтому по своей структуре сч. 76 можно сравнить со сч. 62 «Расчеты с покупателями и заказчиками». Закрытие осуществляется по мере ведения деятельности, а именно получения оплат, начисления лизинговых платежей, компенсации предоплаты выставленной реализацией и т. д.

Рассмотрим на нескольких примерах, как будет осуществляться закрытие в зависимости от отраженной хозяйственной операции.

76 АВ

Если покупатель перечислил деньги на расчетный счет или передал их в кассу организации в качестве предоплаты, в соответствии с требованиями НК компания-плательщик НДС должна начислить налог с этого аванса и выставить счет-фактуру на величину полученной предоплаты. На основании операции размер аванса будет отражен в Кт 62.02, а сумма НДС с предоплаты появится в Дт 76АВ. При этом будут сделаны следующие проводки:

  1. Дт 51 Кт 62.02 – на сумму предоплаты.
  2. Дт 76АВ Кт 68.02 – начислен НДС с предоплаты.

    До тех пор, пока компания не выставит реализацию в отношении контрагента, перечислившего аванс, полученная предоплата и НДС от ее величины будут «висеть» на указанных выше счетах.

  3. Дт 62.01 Кт 90.01 – выставлена реализация (отражена полученная выручка).
  4. Дт 90.03 Кт 68.02 – начислен НДС с реализации.
  5. Дт 62.02 Кт 62.01 – зачтен аванс.
  6. Дт 68.02 Кт 76АВ – принят к вычету НДС, начисленный с аванса.

Таким образом, при поступлении аванса на расчетный счет или в кассу организации величина начисленного НДС первоначально отражается в Книге продаж. Однако после выставления реализации и принятия к вычету налога, начисленного на аванс, сумма НДС будет отражена в Книге покупок.

Посмотрим, как это будет выглядеть в оборотно-сальдовой ведомости.

Проверить корректность формирования дебетового сальдо на сч. 76 АВ можно следующим образом:

Дт 76 АВ = Кт 62.02 / 120 × 20 = 3 300,00 / 120 × 20 = 550,00

Увидеть сумму НДС с аванса можно и при составлении регламентной операции по НДС.

При депонировании зарплаты

Расчеты с сотрудниками по заработной плате отражаются на пассивном счете 70. Однако может возникнуть ситуация, когда работником деньги своевременно не были получены. Как в этом случае следует поступить организации? Начисленная на 70 сч., но не полученная сотрудником зарплата будет отражена на сч. 76.04 «Расчеты по депонированной заработной плате». До тех пор, пока работник не получит зарплату или по ней не истечет срок исковой давности, ее величина будет зафиксирована на 76 сч.

Депонирование заработной платы отражается проводкой:

Дт 70 Кт 76.04

После этого невыданная зарплата будет возвращена на расчетный счет до момента получения.

Закрытие сч. 76.04 может быть отражено следующими записями:

  1. Дт 76.04 Кт 50 – выдача ранее депонированной зарплаты.
  2. Дт 76.04 Кт 91.01 – невостребованная величина зарплаты включена в состав прочих доходов.

Для отражения суммы в 1С 8.3 необходимо выбрать вкладку «Операции» – «Операции, введенные вручную».

Для компаний на ОСНО, использующих метод начисления, величина депонированной зарплаты, отнесенная к прочим доходам, при расчете налога на прибыль будет учтена в составе внереализационных доходов.

По претензии контрагентам

Для отражения расчетов по неустойкам, пеням и штрафам в отношении контрагентов применяется сч. 76.02. По дебету будут отражаться предъявленные требования, тогда как по кредиту будут учтены внесенные платежи по выставленным претензиям.

Важно! На сч. 76.02 подлежит отражению претензия только при наличии ее признания контрагентом или полученного решения суда.

Проводки при этом будут следующими:

  1. Дт 76.02 Кт 10, 60, 91.01 – начислена сумма.

    После получения оплаты от контрагента на сумму требования нужно сделать

    следующую запись:

  2. Дт 50, 51, 52 Кт 76.02

    В этом случае сч. 76.02 будет закрыт.

Еще одним вариантом закрытия счета по претензиям является невозможность получения средств от контрагента. На практике данная ситуация наблюдается, если начисление претензии осуществляется на основании решения суда. В этом случае по истечении срока исковой давности потребуется списать величину неполученной претензии в прочие расходы следующей записью:

Дт 91.02 Кт 76.02

Детальный учет на данном счете ведется по каждому отдельному контрагенту.

Начисление суммы претензии вне зависимости от основания в 1С 8.3 будет осуществляться проводкой путем создания «Операции» – «Операции, введенные вручную».

В случае списания невозможной к взысканию претензии к контрагенту потребуется оформить акт списания. Это позволит обосновать включение в состав внереализационных расходов и, как следствие, отражение в декларации по налогу на прибыль данной суммы.

Если начислены проценты на остаток

Каждая компания старается выбрать максимально выгодные условия открытия расчетного счета. Одним из преимуществ является начисление банком с определенной периодичностью, установленной договором (зачастую один раз в месяц), процентов на остаток.

В этом случае по факту поступления денег от банка на расчетный счет потребуется зафиксировать в учете сумму перечисленных процентов. Для этой цели можно использовать сч. 76.09 «Прочие расчеты с разными дебиторами и кредиторами».

Отнесение процентов на остаток будет отражено следующей записью и включено в состав внереализационных доходов:

Дт 76.09 Кт 91.01

Использование 76 сч. в рабочем плане счетов имеет смысл, когда речь идет о нерегулярных операциях, напрямую не связанных с основной деятельностью. Законом не установлено требование обязательного закрытия этого счета по итогам расчетного периода. Применительно к сч. 76 фиксация итогов и сведение остатка к нулю производятся по мере выполнения деятельности.

Дт 76 Кт 86 Означает

Доходы будущих периодов ДБП — немаловажный критерий, учитываемый при анализе хозяйственно-финансового функционирования организации. В независимости от сферы , любая фирма может получить доход, который необходимо согласно утвержденных нормативно-правовых актов отнести к грядущим периодам. Корректность и своевременность учета этого вида дохода очень важны, так как от величины ДБП напрямую зависят исчисляемые налоги. К тому же, при проверке конечных данных бухгалтерской отчетности и финансовых итогов по основной деятельности, нередко выясняется, что показатели платежеспособности организации ухудшились по сравнению с предыдущими месяцами и годами. Если в процессе анализа коэффициенты автономии и обеспечения оборотными фондами не удовлетворяют привычным нормативным значениям , то необходимо определить, насколько корректно в бухгалтерском учете были разнесены суммы ДБП. ДБП — средства, которые фактически были получены предприятием в нынешнем отчетном периоде, но должны учитываться впоследствии в других, еще не наступивших отрезках времени.

Типовые проводки

Login or register free and only takes a few minutes to participate in this question. You will also have access to many other tools and opportunities designed for those who have language-related jobs or are passionate about them. Participation is free and the site has a strict confidentiality policy. The KudoZ network provides a framework for translators and others to assist each other with translations or explanations of terms and short phrases. You can request verification for native languages by completing a simple application that takes only a couple of minutes.
ПОСМОТРИТЕ ВИДЕО ПО ТЕМЕ: Проводки в бухучете в виде самолетиков - Бухучет для начинающих - Решение задач по бухучету #3

В 48. УЧЕТ ЦЕЛЕВОГО ФИНАНСИРОВАНИЯ

Система учета и контроля в некоммерческих кредитных обществах финансовой взаимопомощи. Инструкция по охране труда. Инструкция по пожарной безопасности. Руководство автомобиля. Техническое руководство. Руководство разное.

Проводку делают на момент принятия выделенных средств в производство списание на затраты товарно—материальных ценностей, начисления заработной платы и т.

На отдельных аналит. Целевые расходы как правило должны полностью возмещатся целевыми сборами. Разница между фактич. Доходы ЖКХ учитывают отдельно по их видам, без целевых сборов, а так же арендную плату, за сдачу не жил.

Бухгалтерский учет ТСЖ

К средствам целевого финансирования относятся средства, получаемые организациями на строго определенные цели и проведение мероприятий целевого назначения. Финансирование целевых мероприятий может осуществляться за счет поступлений от других организаций и лиц, ассигнований из бюджета и других источников. Средства целевого финансирования расходуются в строгом соответствии с утвержденными сметами и назначением. Особенности учета целевого финансирования зависят от того, является организация коммерческой или некоммерческой, а также от источников поступления целевого финансирования: государственная помощь; целевое финансирование, получаемое от юридических и физических лиц на безвозвратной основе; и др. Она предоставляется коммерческим организациям в виде: субвенций, субсидий; бюджетных кредитов и т. Принятие бюджетных средств к учету отражается как возникновение целевого финансирования на основе документов, подтверждающих право организации на получение бюджетных средств утвержденная проектно-сметная документация и т. В момент возникновения права на получение составляется проводка Дт 76 Кт 86 , а по мере получения средств составляются записи Дт 51, 08, 10, 41,

ДТ-91 «Прочие доходы и расходы», КТ-68 «Расчеты по налоам и сборам»

Сила воли ведет к действию, а позитивные действия формируют позитивное отношение. Как цель узнает о ваших желаниях прежде, чем вы начнете действовать. Как компании прогнозируют привычки и манипулируют ими. Применение, как принимать мумие? Мумие для волос, лица, при переломах, при кровотечении и т. Как победить свой возраст? Восемь уникальных способов, которые помогут достичь долголетия. Оси и плоскости тела человека - Тело человека состоит из определенных топографических частей и участков, в которых расположены органы, мышцы, сосуды, нервы и т. Отёска стен и прирубка косяков - Когда на доме не достаёт окон и дверей, красивое высокое крыльцо ещё только в воображении, приходится подниматься с улицы в дом по трапу.

Учет целевого финансирования

Для входа можно использовать учётную запись, созданную на любом из сайтов Нормативка. Вы можете добавить тему в список избранных и подписаться на уведомления по почте. Для того чтобы ответить в этой теме, Вам необходимо войти в систему или зарегистрироваться. Сегодня свой день рождения празднуют пользователя. В вашем браузере отключен JavaScript, поэтому некоторое содержимое портала может отображаться некорректно.

При регистрации предприятия в его уставе указывают размер складочного УК. Учет УК ведется на одноименном инвентарном счете

Как закрыть 86 счет

Счет 86 в бухгалтерском учете используется коммерческими и некоммерческими организациями для получения сведений о поступающем финансировании от сторонних организаций и государства и направлениях расходования данных средств. Целевое финансирование — имущество денежные средства, земельные участки , поступающие в компанию для использования только в заранее определенных и прописанных целях в некоторых случаях может быть оговорен срок, в течение которого финансирование должно быть израсходовано. Счет 86 является пассивным. По кредиту отображаются денежные средства, которые компания должна получать, в корреспонденции со сч. Дебет счета — расходование на определенные, заранее оговоренные мероприятия в корреспонденции со счетами учета этих направлений 20,26,83,98 и т. Примечание от автора! Для учета источников финансирования обособленно к сч.

Вычисляется сальдо по каждому субсчету. Затем рассчитывается суммарный оборот по всем субсчетам и из дебетового оборота вычитается кредитовый. Положительный остаток означает убыток, в отрицательном — прибыль. Прибыль отражается проводкой: Дт В конце отчетного периода происходит закрытие каждого субсчета на

Учет операций по расчетному счету в 2021 году

Все организации обязаны хранить свободную наличку в банке и осуществлять расчеты в безналичной форме. Расчет наличными между юрлицами и ИП имеет строгие ограничения (Указание от 07.10.2013 № 3073-У). В банке могут быть открыты: расчетные, валютные и специальные счета. В статье рассмотрим отражение основных операций по расчетному счету.

Р\С открывается в банке для хранения денег и осуществления безналичных расчетов с юридическими и физическими лицами на основании договора банковского счета в порядке, установленном гл. 45 ГК РФ. Об открытии р\с кредитной организацией обязательно уведомляется налоговый орган.

В общем порядке учет операций по расчетному счету осуществляется способом двойной записи с использованием счета 51 (приказ от 31.10.2000 № 94н), который относится к активным: по дебету которого отражается поступление денежных средств, а по кредиту — их списание.

Поступление на расчетный счет, проводки

т 51 Кт 62 зачисление оплаты, аванса от покупателя
Дт 51 Кт 60 возвращен аванс поставщиком
Дт 51 Кт 76 поступили деньги от прочих контрагентов (претензии, дивиденды)
Дт 51 Кт 68, 69 возврат переплаты по налогам, страховым взносам
Дт 51 Кт 75 поступили деньги в качестве взноса в УК
Дт 51 Кт 50 отражена сдача наличных в банк
Дт 51 Кт 57 приход денежных средств через переводы в пути
Дт 51 Кт 51 деньги переведены с другого р/с
Дт 51 Кт 91 начислены проценты на остаток денег на р/с
Дт 51 Кт 66, 67 поступление займа
Дт 51 Кт 86 зачислены средства из бюджета в качестве финансирования

Списание денежных средств

т 60 Кт 51 оплата поставщику, в т. ч. аванс
Дт 62 Кт 51 возврат аванса покупателю
Дт 76 Кт 51 оплата прочим контрагентам (претензии, таможня, др.)
Дт 50 Кт 51 получены деньги в кассу
Дт 57 Кт 51 сняты деньги через переводы в пути
Дт 51 Кт 51 перевод денег на другой р/с
Дт 68, 69 Кт 51 уплата налогов, страховых взносов
Дт 91 Кт 51 списание за услуги банку
Дт 70 Кт 51 перечисление зарплаты
Дт 71 Кт 51 перечисление денег в подотчет
Дт 73 Кт 51 выдача займа сотруднику
Дт 75 Кт 51 выплата дивидендов
Дт 66, 67 Кт 51 погашение займа, процентов по займу

Бухгалтерский учет денежных средств на расчетном счете осуществляется на основании выписок банка об осуществлении соответствующих операций и денежно-расчетных документов к таким выпискам: платежные поручения и требования. Аналитика сч. 51 организуется в разрезе каждого расчетного счета.

Операции по р/с являются наиболее распространенными, так как хранение и движение денег осуществляется без участия наличных денег, что значительно облегчает и ускоряет процессы оплаты между предприятием, его контрагентами, персоналом, акционерами и др.

Правовые документы

Как отражать госпошлину


В бухгалтерском учете начисление и уплата государственной пошлины учитываются на счете 68 «Расчеты по налогам и сборам».


Любому предпринимателю или коммерческой организации приходится уплачивать государственную пошлину за совершение тех или иных юридически значимых действий или за получение государственных услуг.

Кстати, государственных услуг становится больше и не все они, к сожалению, оказываются бесплатно.

В бухгалтерском учете неизменно находят свое отражение все факты хозяйственной жизни любой организации. Но иногда отражение самых простых операций вызывают порой определенные затруднения и сложности.

Исходя из норм ПБУ 10/99 «Расходы организации», утвержденных Приказом Минфина РФ от 06.05.1999 N 33н, для списания сумм в расходы организации, необходимы реально осуществленные затраты. Таким образом, расходы по оплате госпошлины, принимаются в периоде ее фактического использования.

Другими словами, отражение факта уплаты государственной пошлины на основании платежного документа является одновременно основанием для начисления суммы уплаченной государственной пошлины.

Уплата и начисление государственной пошлины отражается на счете 68 "Расчеты по налогам и сборам".

Для отражения уплаты государственной пошлины формируется стандартная бухгалтерская проводка:

Дт 68 Кт 51
Уплата государственной пошлины с расчетного счета

Начисление государственной пошлины на счетах бухгалтерского учета зависит от назначения пошлины.

Уплаченная государственная пошлина должна быть начислена и, как следствие, отражена в затраты организации. Но вот какие именно это затраты - здесь нужно определиться.

    Государственные пошлины как расходы организации можно отнести:
  1. к основной деятельности организации,
  2. к не связанной с основной деятельностью,
  3. в состав расходов, связанных с приобретением активов

Исходя из этого понимания, мы можем сформировать следующие проводки.

Если уплаченная госпошлина относится к основной деятельности организации:

Дт 20 Кт 68
или
Дт 99 Кт 68
(для микропредприятий)

Если уплаченная госпошлина относится к не основной деятельности организации:

Дт 91 Кт 68
или
Дт 99 Кт 68
(для микропредприятий)

Если уплаченная госпошлина относится к расходам, связанным с приобретением активов:

Дт 08 Кт 68
или
Дт 10 Кт 68
или
Дт 41 Кт 68


Данные проводки относятся к общим и распространенным случаям, связанным с уплатой госпошлины.

При осуществлении предварительной уплаты госпошлины, в случае ее неиспользования, она должна быть возвращена на расчетный счет. Данная ситуация может возникнуть с оплатой госпошлины в суд.

Сумму, перечисленную как госпошлина за судебное рассмотрение дела, необходимо включить в 91 счет «Прочие доходы и расходы» (в соответствии с п.11 ПБУ 10/99). Проводки по госпошлине в бухучете выглядят следующим образом:

Дт 91 Кт 68
или
Дт 99 Кт 68
(для микропредприятий)
начислена госпошлина за судебное рассмотрение дела

Теперь о возможном возврате предварительно уплаченной госпошлины. Исходя из норм арбитражного и гражданского процессуальных кодексов, если решение суда было принято в вашу пользу, то все ваши судебные издержки будут взысканы с проигравшей стороны. Государственная пошлина так же входит в состав судебных издержек. Датой ее списания, является день, в который было принято судебное решение по поданному иску.

В бухгалтерии эти операции отражаются следующим образом:

Дт 76 Кт 91
или
Дт 76 Кт 99
(для микропредприятий)
возмещение судебных издержек по решению суда, учитывая госпошлину, включено в состав прочих доходов

Дт 51 Кт 76
на расчетный счет поступило возмещение судебных издержек по решению суда, учитывая госпошлину.

Если организация из бюджета возвращает государственную пошлину, которая ранее была учтена на расходах (в принципе, по другому и быть не могло, если это возврат - значит она была ранее уплачена и сделаны соответствующие проводки), то в таком случае нужно эту сумму отнести к прочим доходам. Это необходимо выполнить на дату принятия решения о возврате сбора.

Чтобы отразить такое возмещение в бухгалтерском учете необходимо сделать проводки:

Дт 68 Кт 91
или
Дт 68 КТ 99
(для микропердприятий)
отражена задолженность бюджета по возврату государственной пошлины

Дт 51 Кт 68
возвращена из бюджета сумма ранее оплаченной госпошлины.


На какой счет отнести госпошлину?

Государственная пошлина — это федеральный сбор в виде платы за совершение уполномоченными должностными лицами органов государственной власти определенных юридически значимых действий. Совершенно естественно, что для предприятия оплата пошлины является расходами. Но не все знают на какой счет отнести госпошлину, чтобы проводка была корректной. Далее мы более подробно расскажем о том, как отражать операции в бухгалтерском учете по отображению начислений и оплате государственных пошлин.

Когда необходимо относить оплату сборов на расходы


Расходы, которые компания понесла на оплату государственной пошлины, признаются в том отчетном периоде, в котором эти действия были непосредственно совершены. То сколько организация будет пользоваться результатом, значения не имеет. К примеру, когда компания оплачивает госпошлину за выдачу лицензии (разрешение на какой-то определенный вид деятельности), то не зависимо от того, какой будет срок ее действия — расходы в бухгалтерском учете необходимо признавать в том периоде, когда лицензия была получена.

По какому счету отражаются проводки в бухгалтерском учете


В бухгалтерском учете и начисление, и оплата государственной пошлины учитываются на счете 68 «Расчеты по налогам и сборам». Чтобы сделать проводку - необходимо открыть согласно Плану счетов субсчет «Государственная пошлина», и тогда оплата отразится следующим образом:

Дт 68 субсчет «Государственная пошлина» Кт 51 — уплачена госпошлина.

Если говорить о том, какой именно должен быть порядок отражения государственной пошлины на счетах, то это зависит от причин, по которым она была уплачена. Это могут быть:

 

  • приобретение отдельных видов прав или имущества;
  • операции, которые проводятся в рамках основной деятельности компании;
  • операции, которые не связаны с основным видом деятельности организации;
  • рассмотрение дел в судах.

 

Примеры проводок в бухгалтерском учете


Мы рассмотрим наиболее частые варианты, которые встречаются в организациях при начислении государственной пошлины в бухгалтерском учете.

1. Если компания оплатила госпошлину при покупке или создании имущества, то ее необходимо включить в фактическую стоимость этого имущества. К примеру, она была начислена за сертификацию товаров, за регистрацию прав на объект недвижимости (до того как они были введены в эксплуатацию), тогда такую операцию нужно отразить следующей проводкой:

Дт 09 (10, 41...) Кт 68 субсчет «Государственная пошлина» - начислена госпошлина по операциям, которые связаны приобретением (созданием) имущества.

2. Если организация оплачивает сбор в результате текущей деятельности (например, за заверение документы, регистрацию договоров и т.д.), то проводка будет выглядеть следующим образом:

Дт 20 (26, 25, 44...) Кт 68 субсчет «Государственная пошлина» - начислена госпошлина по операциям, которые связаны с основным видом деятельности компании.

3. Когда компании необходимо оплатить госпошлину по операциям, которые не относятся к основному виду деятельности, то сумма сборов в этом случае должна быть включена в другие расходы. Например, такое может быть при отчуждении имущества по договорам мены. Тогда нужно сделать проводку:

Дт 91-2 Кт 68 субсчет «Государственная пошлина» - начислена госпошлина по операциям, которые не связаны с основным видом деятельности предприятия.

4. Когда компания перечисляет сбор за рассмотрение дела в суде, тогда уплаченная сумма так же должна входить в другие расходы и проводка будет выглядеть так:

Дт 91-2  Кт 68 субсчет «Государственная пошлина» - начислена госпошлина за рассмотрение дела в суде.

Поскольку эти расходы должны быть признаны в момент возникновения, то проводка выполняется в день подачи заявления в суд.

5. Если организация выступает ответчиком в суде и проигрывает дело, то она должна заплатить судебные издержки, в т.ч. госпошлину. Следовательно, нужно будет выполнить проводки:

Дт 91-2 Кт 76 — отражены судебные издержки (в т.ч. госпошлина), которые подлежат возмещению истцу согласно решения суда.
Дт 76 Кт 51 — перечислена истцу сумма возмещения судебных издержек (в т.ч. госпошлина) согласно с решением суда.

Данные проводки выполняются в день, когда решение суда вступило в силу. Не стоит путать с датой принятия решения, они могут отличаться. А истец в этом случае будет отображать операцию следующими проводками:

Дт 76 Кт 91-1 — включено в состав прочих доходов возмещение судебных издержек (в т.ч. госпошлины) согласно с решением суда.
Дт 51 Кт 76 — поступило на расчетный счет возмещение судебных издержек (в т.ч. госпошлины) по решению суда.

6. Если компания с бюджета возвращает государственную пошлину, которая ранее была учтена на расходах (в принципе, по другому и быть не могло, если это возврат - значит она была ранее уплачена и сделаны соответствующие проводки), то в таком случае нужно эту сумму отнести к прочим доходам. Это необходимо выполнить на дату принятия решения о возврате сбора. Чтобы отразить такое возмещение в бухгалтерском учете необходимо сделать проводки:

Дт 68 субсчет «Государственная пошлина» Кт 91-1 — отражена задолженность бюджета по возврату государственной пошлины;
Дт 51 Кт 68 субсчет «Государственная пошлина» - возвращена из бюджета сумма ранее оплаченной госпошлины.

Как видите, в целом нет ничего сложно. Если вы столкнулись с такими операциями впервые, то первым делом откройте субсчет. А далее уже смотрите на суть операции, за что конкретно госпошлина была уплачена. Помните, что расходы на ее оплату необходимо отражать сразу не зависимо от того сколько времени будет действовать лицензия, сертификат и т.д., которые вы приобрели и заплатили соответствующий сбор.

 

Внутрихозяйственные расходы. Учет, проводки

Внутрихозяйственные расходы предполагают расчеты между объектами в рамках одного юридического образования. К примеру, это могут быть расчеты между филиалами или подразделениями. Регулируются они Приказом Минфина №94н «Об утверждении плана счетов бухучета» от 31 октября 2000 года в редакции от 8 ноября 2010 года.

Нужно ли учитывать суммы, учтенные на счете 79 «Внутрихозяйственные расчеты», при формировании показателей баланса?

Основные особенности

Внутрихозяйственные расходы обобщаются на счете 79. К нему могут открываться следующие субсчета:

  • 1 – выделенное имущество. Этот субсчет позволяет учесть состояние расчетов с филиалами/подразделениями, для которых создан отдельный баланс. На нем отражаются переданные обособленному субъекту внеоборотные и оборотные активы. Имущество будет списываться со счета 01 в ДТ79.
  • 2 – текущие операции. Здесь прописывается состояние всех расчетов с обособленными субъектами, которые выделены на отдельных балансах.
  • Для чего предназначен счет 79 «Внутрихозяйственные расчеты»?

  • 3 – расчеты по соглашению о доверительном управлении объектами. Здесь фиксируется состояние расчетов, возникших по соглашениям о доверительном управлении. Нужен субсчет для фиксации операций учредителя, доверительного управляющего. Актив, который находится в доверительном управлении, списывается со счетов 01, 04, 58 в ДТ79.

ВНИМАНИЕ! Аналитический учет по счету 79 выполняется по каждому обособленному субъекту. Если выполняются операции по соглашениям о доверительном управлении, учет производится по каждому договору.

Используемые проводки

ВАЖНО! Журнал-ордер № 9 по Кт 79 от КонсультантПлюс по ссылке

Использование проводок зависит от того, какая именно операция выполняется.

Расчеты с обособленными филиалами/подразделениями

При расчетах с подразделениями фигурируют эти проводки:

  • ДТ79/1 КТ01. Подразделению были переданы основные средства по начальной стоимости. Первичные документы: карточка учета ОС-6.
  • ДТ02 КТ79/1. Амортизация по ОС. Первичка: карта учета ОС-6.
  • ДТ79/1 КТ10, 41, 43. Переданы товарно-материальные ценности. Первичка: накладная.
  • ДТ79/1 КТ50, 51. Переданы деньги. Первичка: РКО и выписка из банковского учреждения.
  • ДТ01 КТ79/1. Приняты на учет ОС по своей начальной стоимости. Документы: акт и карточка учета ОС-6.
  • ДТ79/1 КТ02. Принята на учет амортизация ОС. Первичка: карточка учета ОС-6.
  • ДТ10, 41, 43 КТ79/1. Приняты товарно-материальные ценности. Первичка: накладная и учетные карточки.
  • ДТ50, 51 КТ79/1. Приняты к учету деньги. Первичка: ПКО и выписка из банковского учреждения.
  • ДТ79/2 КТ60, 62, 76. Отражение долга за филиалом.
  • ДТ60, 62, 76 КТ79/2. Долг перед главным офисом.

Две последние проводки выполняются на основании актов по задолженностям.

Расчеты по соглашению доверительного управления

Учредитель управления выполняет эти записи:

  • ДТ79/3 КТ01, 04, 58. Отражение стоимости активов при их передаче в доверительное управление. Документы: акт и карта учета ОС-6.
  • ДТ02, 05 КТ79/3. Амортизация при передаче имущества.
  • ДТ79/3 КТ50, 51. Перечисление денег доверительному управляющему. Последний на полученные средства совершает долгосрочные вклады. Первичка: РКО и выписка из банка.
  • ДТ50-51 КТ79/3. Получение денег в счет прибыли. Документы: ПКО и выписка.
  • ДТ76 КТ91/1. Отражение суммы возмещения убытка. Первичка: акт и расчет.
  • ДТ50-51 КТ76. Получение денег по упущенной выгоде.
  • ДТ01, 04, 58 КТ79/3. Отражение стоимости активов при их возврате.
  • ДТ79/3 КТ02, 05. Амортизация при возврате активов.

В качестве первички также будет использоваться карта учета ОС-6.

Учет у доверительного управляющего

Записи у лица, осуществляющего доверительное управление, будут следующими:

  • ДТ20, 26 КТ10, 60, 76. Траты, сопутствующие управлению активами. Первичка: акт, счет и накладные.
  • ДТ76 КТ90/1. Начисление сумм по вознаграждению и возмещению трат.
  • ДТ50, 51 КТ76. Получение вознаграждения или возмещения.
  • ДТ90/2 КТ76. Начисление компенсации по убыткам и упущенной выгоде. Основание: соглашение и баланс.
  • ДТ76 КТ50, 51. Перечисление компенсации. Основание: РКО и выписка из банковского учреждения.

По каждой записи отражается сумма операции.

Учет у доверительного управленца на обособленном балансе

Записи на отдельном балансе будут следующими:

  • ДТ01, 04, 58 КТ79/3. Отражение стоимости активов при их получении. Основание: соглашение и акт.
  • ДТ79/3 КТ02, 05. Амортизация при получении имущества.
  • ДТ50, 51 КТ79/3. Получение средств для долгосрочных вкладов.
  • ДТ26 КТ76. Отражение сумм возмещения трат управляющего и фиксация его вознаграждения.
  • ДТ76 КТ60, 51. Перечисление сумм возмещения.
  • ДТ79/3 КТ50, 51. Перечисление средств в счет положенной прибыли.
  • ДТ79/3 КТ01, 04, 58. Стоимость активов, возвращенных учредителю.
  • ДТ02, 05 КТ79/3. Амортизация активов, которые были возвращены.
  • ДТ79/3 КТ50, 51. Возврат остатков из касс и счетов в банке.

Среди первичных документов фигурируют акты, карты учета, выписки из банка, РКО.

Налогообложение внутрихозяйственных расходов

Рассматриваемые расчеты предполагают налоговый учет.

НДС

НДС при ВР определяется на основании статей 166 и 174 НК РФ. Журналы учета счет-фактур, книг приобретений и продаж должны вестись структурными филиалами. Они представляют собой единые журналы.

Рекомендуется этот порядок отношений между обособленным и центральным субъектом:

  • На протяжении периода каждый филиал производит начисление НДС. Субъекты могут использовать вычеты на основании расчетов, зафиксированных на автономном балансе.
  • По завершении периода совокупные обороты по НДС и вычетам направляются на баланс центрального офиса. Туда же передаются актуальные разделы книг покупок и продаж. Альтернативный вариант – формирование совокупного сальдо по уплате налогов.
  • Центральный офис занимается формированием совокупности сведений, а также создает и направляет в налоговую декларацию по НДС.
  • Центральный офис также перечисляет налог в бюджет.
  • Главный офис может выполнять расчеты с обособленными субъектами по части сумм налогов по операциям, фигурирующим в учете.

Реализация последнего варианта возможна только в том случае, если соответствующий порядок закреплен в локальных актах.

Налог на прибыль

Налог на прибыль определяется и выплачивается по адресу фирмы на основании пункта 1 статьи 288 НК РФ. Если подразделение фирмы находится в другом регионе, ему нужно самостоятельно уплачивать налог в бюджет субъекта страны. В рамках этой операции сумма налога определяется в особом порядке. В частности, размер налога не будет устанавливаться путем подсчета сумм всех операций, проведенных подразделением. При расчетах нужно руководствоваться долей ОС и количеством сотрудников, поделенных на траты на оплату труда.

Если фирма отражает стабильные/отложенные активы и обязательства на балансах обособленных субъектов, рекомендуется направлять в центральный офис совокупные суммы оборотов по счету 68.

Определение текущего налога выполняется центральным офисом при любой форме взаимодействий. Если чистая прибыль формируется обособленными субъектами, находящимися на отдельном балансе, выполняется корректировка налога. Исполняется она на основании показателей, полученных центральным офисом.

ВНИМАНИЕ! Стабильные/временные разницы и сопутствующие обязательства устанавливаются каждым обособленным субъектом.

ВАЖНО! Центральный офис занимается разделением налоговых сумм между обособленными филиалами.

Дт 76 Кт 68 — Студопедия

Если арендатор авансом перечислил всю сумму арендной платы, то начисление арендной платы отражается с использованием счета 98 «Доходы будущих периодов» следующими проводками:

Дт 51 Кт 98 - на всю сумму арендного платежа
Дт 98 Кт 76 - на сумму НДС

В дальнейшем полученная вперед сумма арендного платежа включается во внереализационные доходы отчетного месяца равными долями в течение всего срока аренды

Дт 98 Кт 91 - на ежемесячную сумму арендного платежа (без НДС)
Дт 76 Кт 68 - на сумму НДС.

Отражение на счетах текущей аренды у арендатора.

При текущей аренде переход основных средств в собственность арендатора не предусмотрен. Поэтому арендованные основные средства принимаются по первоначальной стоимости на забалансовый счет 001 «Арендованные основные средства», при этом делается запись:

Дт 001

По окончании срока аренды возврат основных средств отражается записью:

Кт 001.

Арендная плата включается арендатором в состав издержек производства и обращения, поэтому ежемесячное начисление арендной платы в пользу арендодателя отражается проводками:


Дт 20,26,44 Кт 76 - на сумму арендного платежа (без НДС)
Дт 19 Кт 76 - на сумму НДС

Перечисление арендной платы арендодателю отражается проводкой:

Дт 76 Кт 51

Списание НДС на уменьшение задолженности в бюджет:

Дт 68 Кт 19

Если по условиям договора арендная плата перечисляется авансом за весь срок аренды, то начисление отражается проводкой:

Дт 97 Кт 76 - На сумму арендного платежа (без НДС)
Дт 19 Кт 76 - На сумму НДС

Перечисление арендной платы арендодателю отражается проводкой:

Дт 76 Кт 51

Затем ежемесячно, равными долями в течение всего срока аренды сумма арендной платы включается в издержки производства и обращения:

Списание НДС на уменьшение задолженности в бюджет:

Дт 68 Кт 19

Тема 7. Учет нематериальных активов.

I. Характеристика и оценка нематериальных активов.

II. Учет поступления нематериальных активов

III. Учет износа нематериальных активов

IV. Учет выбытия нематериальных активов

I. Характеристика и оценка нематериальных активов

Европа PMC

Neurooncol Adv. 2021 январь-декабрь; 3 (1): vdab044.

, 1, 2 , 1 , 1 , 1, 3, 4 , 1, 5 , 1 0005, 1, 6 1, , 1 , 4, 6, 7, 8 , 1, 8 , 1, 9, 10 и 1, 4 6

Франческо Д'Аморе

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

2 Отделение нейрорадиологии, Больница Чирколо и Фонд Макки, Варезе, Италия

Фарида Гринберг

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Германия

Йорг Маулер

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

Норберт Галлдикс

9 0002 1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

3 Отделение неврологии, Медицинский факультет и университетская клиника Кельна, Кельнский университет, Кельн, Германия

4 Центр интегрированной онкологии (ИТ-директор), Университеты Аахена, Бонна, Кельна и Дюссельдорфа, Германия

Ганна Блаженец

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

5 Отделение ядерной медицины, Медицинский центр— Фрайбургский университет, медицинский факультет Фрайбургского университета, Фрайбург, Германия

Ezequiel Farrher

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Германия

Christian Filss

1 Институт неврологии и неврологии Медицина, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

6 Отделение ядерной медицины, RWTH Aachen University, Ахен, Германия

Gabriele Stoffels

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

Felix M Mottaghy

4 Центр интегрированной онкологии (CIO ), Университеты Аахена, Бонна, Кельна и Дюссельдорфа, Германия

6 Кафедра ядерной медицины, RWTH Ахенский университет, Ахен, Германия

7 Кафедра радиологии и ядерной медицины, Медицинский центр Маастрихтского университета (MUMC +), Маастрихт, Нидерланды

8 Отделение стереотаксии и функциональной нейрохирургии, Медицинский факультет и университетская клиника Кельна, Кельнский университет, Кельн, Германия

Филипп Ломанн

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

8 Департамент стереотики xy и функциональной нейрохирургии, Медицинский факультет и Университетская клиника Кельна, Кельнский университет, Кельн, Германия

Надим Йон Шах

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

9 Отделение Неврология, RWTH Ахенский университет, Ахен, Германия

10 JARA — BRAIN — Трансляционная медицина, Ахен, Германия

Карл-Йозеф Ланген

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

4 Центр интегрированной онкологии (CIO), университеты Аахена, Бонна, Кельна и Дюссельдорфа, Германия

6 Отделение ядерной медицины, RWTH Ахенский университет, Ахен, Германия

1 Институт неврологии и медицины, Исследовательский центр Юлих, Юлих, Германия

2 Отделение нейрорадиологии, Circolo Ho spital and Macchi Foundation, Варезе, Италия

3 Отделение неврологии, Медицинский факультет и университетская клиника Кельна, Кельнский университет, Кельн, Германия

4 Центр комплексной онкологии (CIO), университеты Аахена, Бонн , Кельн и Дюссельдорф, Германия

5 Кафедра ядерной медицины, Медицинский центр Фрайбургского университета, Медицинский факультет Фрайбургского университета, Фрайбург, Германия

6 Кафедра ядерной медицины, RWTH Ахенского университета, Аахен, Германия

7 Отделение радиологии и ядерной медицины, Медицинский центр Маастрихтского университета (MUMC +), Маастрихт, Нидерланды

8 Отделение стереотаксии и функциональной нейрохирургии, Медицинский факультет и университетская клиника Кельна, Кельнский университет, Кельн , Германия

9 Отделение неврологии, RWTH Ахенский университет, Аахе n, Германия

10 JARA — BRAIN — Трансляционная медицина, Ахен, Германия

Автор для переписки: Карл-Йозеф Ланген, доктор медицины, Институт неврологии и медицины (INM-4), Исследовательский центр Юлих, Forschungszentrum Jülich GmbH Wilhelm -Johnen-Str., D-52425 Юлих, Германия ([email protected]).

Эти авторы внесли равный вклад в работу.

Copyright © Автор (ы) 2021. Опубликовано Oxford University Press, Общества нейроонкологов и Европейской ассоциации нейроонкологов. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http: //creativecommons.org/licenses/by/4.0/), который разрешает неограниченное повторное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Abstract

Предпосылки

Радиологическая дифференциация прогрессирования опухоли (TPR) от изменений, связанных с лечением (TRC) в предварительно обработанной глиобластоме имеет решающее значение. Это исследование было направлено на изучение диагностической ценности МРТ диффузного эксцесса в сочетании с информацией, полученной из O - (2- [ 18 F] -фторэтил) -1-тирозин ( 18 F-FET) ПЭТ для дифференциации TPR от TRC у пациентов с предварительно пролеченной глиобластомой.

Методы

Тридцать два пациента с гистомолекулярно определенной и предварительно пролеченной глиобластомой с подозрением на TPR были включены в это ретроспективное исследование.Двадцать один пациент был включен в группу TPR и 11 пациентов в группу TRC, согласно оценке невропатологии или клинико-радиологического наблюдения. Представляющие интерес трехмерные (3D) области были созданы на основе увеличенного поглощения 18 F-FET с использованием отношения опухоли к мозгу 1,6. Кроме того, карты эксцесса диффузии МРТ были получены из тех же областей интереса с использованием совместно зарегистрированных 18 изображений F-FET PET, а расширенный анализ гистограмм параметров карты эксцесса диффузии был применен к сгенерированным трехмерным областям интереса.Диагностическая точность была проанализирована с помощью анализа кривой рабочих характеристик приемника и комбинаций параметров ПЭТ и МРТ с использованием многомерной логистической регрессии.

Результаты

Параметры, полученные из карт эксцесса диффузной МРТ, показывают высокую диагностическую точность, до 88%, для различения TPR и TRC. Логистическая регрессия показала, что наивысшая диагностическая точность 94% (площадь под кривой 0,97; чувствительность 94%; специфичность 91%) была достигнута путем сочетания максимального отношения опухоли к мозгу 18 поглощения F-FET и показатели диффузного МРТ эксцесса.

Выводы

Комбинированное использование карт 18 F-FET ПЭТ и МРТ диффузионного эксцесса кажется многообещающим подходом для улучшения дифференциации TPR от TRC в предварительно обработанной глиобластоме и требует дальнейшего исследования.

Ключевые слова: аминокислоты ПЭТ, опухоль головного мозга, МРТ с диффузным эксцессом, псевдопрогрессия, прогрессирование опухоли

Ключевые моменты

  • МРТ с диффузным эксцессом в FET-ПЭТ-положительных областях обеспечивает диагностическую точность 88% при рецидивирующих глиомах.

  • Комбинация МРТ с диффузным эксцессом и ПЭТ на полевых транзисторах увеличивает точность диагностики до 94%.

Важность исследования

Дифференцировать прогрессирование опухоли от изменений, связанных с лечением, у пациентов с предварительно пролеченной глиобластомой сложно на основании только структурной МРТ. В этом исследовании исследуется комбинация ПЭТ с использованием индикатора аминокислот O - (2- [ 18 F] -фторэтил) -1-тирозин (FET) и микроструктурной информации, полученной с помощью визуализации диффузного эксцесса (DKI).Оба эти метода могут предоставить дополнительную информацию по этому клинически важному вопросу. Комбинация FET PET и DKI привела к высокой диагностической точности, требующей дальнейших исследований. Разработанный индекс FET / DKI предлагает простой способ применения этого подхода в клинической практике.

Из-за агрессивного инфильтративного роста и высокой частоты рецидивов глиобластома является самой смертельной опухолью головного мозга у взрослых, и, несмотря на максимальное лечение, только 5% пациентов с глиобластомой выживают в течение 5 лет или дольше после постановки диагноза. 1 Диагностика прогрессирования опухоли (TPR), основанная только на стандартной МРТ, затруднена необходимостью дифференцировать TPR от неопухолевых, связанных с лечением изменений (TRC), таких как псевдопрогрессия или лучевой некроз. 2 В частности, псевдопрогрессия проявляется в виде прогрессирующих или новых контрастных поражений, обычно в течение 3 месяцев после завершения лучевой терапии у 15–30% пациентов со злокачественной глиомой. 3 TRC часто имитируют TPR и, следовательно, имеют тенденцию мешать повседневному уходу за пациентом, что представляет собой критическую клиническую дилемму. 4 Несмотря на значительные усилия, уже предпринятые для улучшения оценки ответа и поддержки принятия клинических решений, 5 остро необходима дальнейшая разработка надежных визуализирующих биомаркеров для более точной диагностики TRC.

МРТ с контрастным усилением - метод выбора в нейроонкологии, играющий ключевую роль в диагностике и оценке реакции на лечение. 6 Однако обычная МРТ имеет ограниченную специфичность в дифференциации TPR от TRC, 4 , и основным недостатком анатомической МРТ является отсутствие метаболической информации.Напротив, ПЭТ с использованием радиоактивно меченных аминокислот, таких как O - (2- [ 18 F] -фторэтил) -1-тирозин ( 18 F-FET), является чувствительным инструментом для визуализации метаболической активности опухоли и может предоставить дополнительную информацию для улучшенной диагностики. 7 Рабочая группа по оценке ответа в нейроонкологии (RANO) и Европейская ассоциация нейроонкологов выступают за использование аминокислотной ПЭТ в качестве дополнительного инструмента к МРТ при лечении пациентов с опухолями головного мозга. 8 В частности, недавно было показано, что 18 F-FET PET способствует улучшенному дифференцированию TRC от TPR с высокой диагностической точностью в диапазоне 80–90%. 9,10

Создание передовых методов МРТ представляет собой еще одну быстро развивающуюся область, имеющую отношение к нейроонкологии, 7 с диффузионной МРТ, которая чувствительна к микроструктурной архитектуре клеточной ткани и все чаще используется при оценке опухолей головного мозга. 11 Кажущийся коэффициент диффузии, полученный из диффузионно-взвешенной или диффузно-тензорной визуализации (DTI) 12 , имеет тенденцию обратно коррелировать с клеточностью опухоли 13 и был протестирован при оценке ответа на лечение 14 наряду с различением TRC от TPR. 15 Однако надежное использование средних показателей DTI в нейроонкологии часто ограничено из-за неоднородности внутриопухолевой микросреды, 16 признака большинства злокачественных новообразований головного мозга.С другой стороны, гистограммный анализ показателей DTI позволяет рассматривать более подробную информацию и, как было показано, обеспечивает дополнительную ценность при классификации глиом 17 и при мониторинге лечения. 18–20

Дальнейшие перспективы, касающиеся диффузионной МРТ при опухолях головного мозга, связаны с текущим развитием новых методов многооболочечной диффузии, 11,21 с использованием высоких значений b за пределами типичного диапазона DTI (≤1 мкм 2 / мс).Эти методы обращаются к свойствам негауссовой диффузии воды в ткани и кодируют дополнительные микроструктурные особенности. В частности, визуализация диффузного эксцесса (DKI) 22 позволяет оценить метрики тензора диффузии (DT) и специфического тензора эксцесса (KT) из одного и того же измерения в клинически приемлемые сроки сбора данных. Следовательно, он привлекает растущий интерес к нейрорадиологии, сообщается о его применениях при инсульте, нейродегенеративных заболеваниях и опухолях, 11,21,23 , и были обнаружены многообещающие биомаркеры для оценки степени глиомы и клеточной пролиферации. 24,25

Небольшое количество исследований продемонстрировало потенциал комбинирования 18 F-FET PET с диффузионными и / или другими методами МРТ для обследования пациентов с опухолью головного мозга 26,27 с помощью современного гибридного PET / МРТ-технологии. 28 Также появляется все больше свидетельств того, что использование комбинации структурных и расширенных методов МРТ наряду с 18 F-FET PET может значительно повысить диагностическую точность для обнаружения TPR и прогнозирования ответа на лечение. 3,27,29,30

Мы предполагаем, что поражения, демонстрирующие незначительное отклонение от нормы или повышенное 18 поглощение F-FET в области предполагаемого TPR, могут быть полезны для выявления областей с аномальными микроструктурными свойствами, которые затем могут быть дифференцированы. с использованием расширенных методов диффузной МРТ. Целью этого исследовательского гибридного исследования ПЭТ / МРТ было оценить параметры DT и KT в поражениях с повышенным поглощением 18 F-FET и оценить их точность в дифференциации TPR и TRC с использованием анализа гистограмм.

Материалы и методы

Пациенты

С февраля 2013 г. по март 2016 г. в исследование ретроспективно были включены 32 пациента с гистопатологически подтвержденной глиобластомой и клиническими признаками или результатами МРТ, указывающими на TPR на основе критериев RANO 8 . Все пациенты были обследованы с помощью гибридного сканера ПЭТ / МРТ и соответствовали следующим критериям включения: (1) гибрид 18 F-FET ПЭТ / МРТ с DKI и протоколом структурной МРТ визуализации опухоли головного мозга, (2) предварительная резекция опухоли или биопсия с последующей химиолучевой терапией темозоломидом (TMZ) и (3) данные повторной биопсии или последующего клинического наблюдения и данные визуализации, доступные как минимум через 6 месяцев после гибридных исследований ПЭТ / МРТ.Местный комитет по этике одобрил ретроспективный анализ данных. Никакого противоречия с Хельсинкской декларацией не было. Перед визуализацией все пациенты дали письменное информированное согласие на исследование ПЭТ и МРТ и использование полученных данных в научных целях. Более подробная информация о группе пациентов представлена ​​в дополнительной таблице S1.

Диагноз TRC или TPR был основан на критериях, определенных Young et al. 31 Если гистопатология без повторов была доступна (у 20 пациентов), клинический диагноз TRC или TPR был установлен на основе консенсуса 2 опытных нейроонкологов на основе полного обзора диаграммы и обзора МРТ после наблюдения.Диагноз TRC предполагался, если не требовалось никаких изменений в лечении в течение как минимум 6 месяцев после ПЭТ / МРТ.

18 F-FET ПЭТ-визуализация и анализ данных

Все пациенты были сканированы с использованием гибридного 3T-сканера ПЭТ / МРТ с высоким разрешением (BrainPET, Siemens Healthcare, осевое поле зрения, 19,2 см). Данные изображения были скорректированы на случайные совпадения и совпадения по разбросу, а также на мертвое время до реконструкции OP-OSEM, предоставленной производителем (2 подмножества, 32 итерации). Восстановленный набор динамических данных состоял из 16 временных кадров (5 × 1 мин; 5 × 3 мин; 6 × 5 мин).Поскольку гибридный сканер ПЭТ / МРТ не обеспечивает источник передачи, коррекция затухания проводилась на основе шаблона с использованием МРТ. 30

18 Данные ПЭТ с F-FET были применены и проанализированы, как описано ранее. 32 Вкратце, исследования динамической ПЭТ проводились в течение 50 минут после внутривенной инъекции приблизительно 3 МБк 18 F-FET / кг массы тела. Среднее поглощение 18 F-FET в опухоли определяли с помощью двумерного (2D) процесса авто-контурирования с использованием отношения опухоли к мозгу (TBR) не менее 1.6 в суммированных 18 ПЭТ-изображениях F-FET через 20-40 минут после инъекции. Для расчета максимального поглощения аминокислот круговая интересующая область (ROI) диаметром 1,6 см была сосредоточена на максимальном поглощении опухолью. Средние и максимальные TBR (TBR среднее и TBR max ) рассчитывались путем деления среднего и максимального стандартизованного значения поглощения (SUV) ROI опухоли на среднее SUV здоровой ткани мозга. Кривые время-активность (ТАС) захвата 18 F-FET в опухоли были получены путем нанесения интересующего сферического объема объемом 2 мл (диаметр 1.6 см) ко всему динамическому набору данных. Значения времени до пика, полученные из TAC (TTP; минимум от начала динамического сбора данных до максимального SUV поражения) и наклона TAC поглощения 18 F-FET, были рассчитаны с помощью аппроксимации линия линейной регрессии к поздней фазе кривой (20–50 мин после инъекции). Наклон выражался в смене внедорожника в час.

Протокол получения МРТ

Протокол МРТ, используемый с гибридным сканером ПЭТ / МРТ, включал последовательность быстрого градиентного эхо-сигнала (MP-RAGE), взвешенную по T 1, , взвешенную по намагниченности (MP-RAGE), T 2 -взвешенную инверсию с ослаблением жидкости последовательность восстановления, и последовательность MP-RAGE с усиленным контрастом T 1 (CE-T 1 ), проведенная после инъекции контрастного вещества, гадотериновой кислоты (Dotarem; Guerbet) в дозе 0.1–0,2 ммоль / кг массы тела. 33 Диффузионная последовательность МРТ имела следующие параметры сбора: TR / TE = 9700/105 мс; полоса пропускания = 1594 Гц / пикс; b значения = 0, 1000, 2500 с / мм 2 ; количество средних = 2; количество направлений градиента = 30; размер вокселя = 2 × 2 × 2 мм 3 ; размер матрицы = 112 × 112 × 68.

Обработка изображений DKI

МРТ-изображения, взвешенные по диффузии, были скорректированы на вихретоковые искажения и движение головы с использованием инструмента «Eddy-corrective», доступного в FSL; Направления градиентного поля были переориентированы 34 с использованием собственных скриптов Matlab (R2014a, 2014, The Mathworks Inc.). Положительное смещение в сигнале было скорректировано с использованием метода изображений мощности, 35,36 со стандартным отклонением фонового шума, оцененным с использованием подхода Aja-Fernández et al. 37 и далее упорядочены с помощью ExploreDTI. 38 Анализ DKI был выполнен с использованием нелинейной оценки методом наименьших квадратов, доступной в ExploreDTI. Наконец, показатели DT (средняя / радиальная / осевая диффузионность, MD / RD / AD) и конкретные KT (средний / радиальный / осевой куртоз, MK / RK / AK) были оценены с помощью ExploreDTI.

Совместная регистрация изображений и сегментация опухоли были выполнены с помощью инструмента анализа ПЭТ / МРТ мозга программного обеспечения PMOD (версия 3.707, 2015, PMOD Technologies Ltd) сертифицированными радиологами (F.M. и C.F.). Изображения ПЭТ были совместно зарегистрированы посредством жесткого сопоставления с нормализованной взаимной информацией с использованием алгоритма сглаживания по Гауссу, примененного к Т 1 -взвешенной 3-мерной (3D) МРТ с повышенным контрастом. Карты параметров DT / KT были впоследствии зарегистрированы в CE-T 1 посредством аффинной регистрации твердого тела с нормализованной взаимной информацией в качестве функции стоимости.3D области интереса были полуавтоматически сегментированы на изображениях ПЭТ с использованием порогового значения TBR 1,6. 39 После этого были извлечены соответствующие трехмерные области интереса на основе вокселей за вокселями для всех показателей DT / KT из карт параметров и использованы для генерации гистограмм. 2D области интереса были нарисованы на картах параметров DT / KT в противоположном нормальном белом веществе, на уровне полуовального центра, избегая пространств CSF и побочных продуктов крови, если они присутствуют. Два читателя (F.D. и G.B.) оценили точность совместных регистраций и отсутствие видимых искажений.

Анализ гистограммы показателей DT и KT

Анализ гистограммы был выполнен для наборов данных DT / KT 3D ROI с использованием Matlab и собственных скриптов. Значения интенсивности вокселей вне диапазона 0,5–3,5 мкм 2 / мс для карт DT и вне диапазона 0,4–1,2 для карт KT были отброшены, чтобы уменьшить влияние зашумленных точек. Гистограммы относительной частоты были сгенерированы для каждого субъекта после нормализации индивидуальных гистограмм вокселов на интервал по объему соответствующей трехмерной области интереса.Сглаживание гистограммы выполнялось с использованием окна скользящего среднего 0,14 мкм 2 / мс для DT и 0,04 для гистограмм KT. Средние значения гистограммы и центили (C5, C10 для DT и C90, C95 для карт KT) были извлечены из гистограммы каждого отдельного субъекта, таким образом, получив в общей сложности 18 переменных DT / KT. Нормализация параметров гистограммы к значениям контралатеральных областей интереса белого вещества с нормальным внешним видом не проводилась, поскольку межгрупповые различия в этих областях не были значительными (дополнительная таблица S2).

Статистический анализ

Статистический анализ выполняли с использованием программного обеспечения MedCalc (c17.2, MedCalc Software Bvba, 2017). Нормальность распределения переменных оценивалась с помощью критерия Колмогорова – Смирнова. Межгрупповые различия в средних значениях параметров DT / KT, относящихся к 2D ROI в нормальном белом веществе, параметрах гистограммы 3D ROI для показателей DT / KT и 18 параметров F-FET PET (TBR max , TBR среднее , TTP, slope) сравнивали с помощью U-критерия Манна – Уитни.

Параметры гистограммы 3D ROI для показателей DT / KT считались значимыми для P ≤ 0,0028 = 0,05 / 18, где значение α было установлено с использованием поправки Бонферрони для множественных сравнений ( n = 18). Сравнение 4 18 параметров ПЭТ с F-FET считалось значимым для P ≤ 0,0125 = 0,05 / 4. Учитывая исследовательский характер данной работы и ограничительный характер поправки Бонферрони, мы дополнительно рассматривали нескорректированное α = 0.05 и обратитесь к результатам с 0,003 < P ≤ 0,05 для показателей DT / KT и с 0,0125 < P ≤ 0,05 как «значимым до коррекции». 40 Возможные ассоциации между переменными игнорировались, поскольку основной целью этого исследования было выявление наиболее многообещающих биомаркеров.

Кривые рабочих характеристик приемника (ROC) использовались для оценки площадей под кривой ROC (AUC) и для поиска оптимальных значений отсечки параметров гистограммы.Учитывались только параметры, которые были статистически значимыми при межгрупповых сравнениях. Статистически значимые различия между AUC были исследованы с использованием методологии Делонга с точным биномиальным 95% доверительным интервалом.

Одномерные логистические регрессии с «диагнозом» в качестве зависимой бинарной переменной использовались для проверки прогностической способности параметров гистограммы DT / KT, которые были значимыми согласно результатам U-критерия Манна – Уитни. Наконец, чтобы определить комбинации параметров, которые могут более точно предсказать TPR по сравнению с отдельными параметрами, была построена модель многомерной логистической регрессии с диагнозом в качестве зависимой переменной.Коэффициенты регрессии для MK C90 (4,7) и TBR max (39,2) в дальнейшем использовались в качестве весовых коэффициентов для получения единого клинически применимого индекса FET – DKI для дифференциации между TPR и TRC следующим образом:

Индекс FET-DKI = 4,7 × TBRmax + 39,2 × MKC90.

(1)

Результаты

Одиннадцать пациентов были отнесены к группе TRC, а 21 пациент - к группе TPR. Диагноз был поставлен на основании гистопатологического исследования в 12 случаях и результатов клинического наблюдения в 20 случаях.У одного пациента из группы TRC в анамнезе был рецидив до ПЭТ / МРТ, в то время как у 11 пациентов из группы TPR был один или несколько рецидивов. Вся когорта подверглась хирургическому вмешательству и одновременной химиолучевой терапии TMZ плюс адъювантная TMZ в качестве терапии первой линии. Бевацизумаб второй линии (BEV) применялся отдельно или в комбинации с другими препаратами у 3 пациентов. На момент проведения ПЭТ / МРТ 17 пациентов получали TMZ, 1 пациент из группы TPR лечился BEV, а 14 пациентов не получали терапию (дополнительная таблица S1).

Статистически значимое ( P <0,0028) увеличение было обнаружено для всех параметров гистограммы показателей KT в TPR по сравнению с группой TRC, за исключением AK C90 и AK C95 (которые были значимыми до коррекции, P ≤ 0,05). Параметры гистограммы показателей DT не достигли статистической значимости ( P > 0,008) после поправки Бонферрони. Однако стоит отметить, что показатели DT показали явную тенденцию к снижению в группе TPR, и 4 из них (среднее RD, RD C5, RD C10 и MD C10) были значительными до коррекции ( P ≤.05). Не было значимой разницы в параметрах 18 F-FET PET: TBR , среднее значение , TTP и крутизна между группами, тогда как TBR max было значительно ниже в TRC. предоставляет сводку медиан и межквартильного диапазона, оцененных для параметров гистограммы 3D ROI DT / KT и параметров ПЭТ 18 F-FET для обеих групп, а также значения P межгрупповых сравнений.

Таблица 1.

Сравнение показателей DT / KT (верхняя панель) и 18 параметров F-FET PET (нижняя панель) в группах TRC и TPR

* 7 905 1,32 (1,20 / 1,37) /0,60)
Параметр TRC ( n = 11) TPR ( n = 21) -П,
MD Среднее значение 1.54 (1,42 / 1,7) 1,32 (1,24 / 1,55) 0,060
C5 1,00 (0,94 / 1,10) 0,93 (0,80 / 1,02) 0,065
1,13 (1,05 / 1,18) 1,02 (0,87 / 1,1) 0,023 *
RD Среднее 1,54 (1,31 / 1,63) 1,21 (1,13–1,43) .
C5 0,92 (0,85 / 1,00) 0.80 (0,66 / 0,86) 0,020 *
C10 0,99 (0,96 / 1,10) 0,87 (0,73 / 0,94) 0,008 *
AD Среднее значение 1,69 / 1,91) 1,57 (1,46 / 1,83) .100
C5 1,24 (1,13 / 1,30) 1,14 (0,96 / 1,30) 0,197
1,20 (1,03 / 1,35) .171
MK Среднее 0,50 (0,48 / 0,58) 0,61 (0,57 / 0,69) 0,002 **
C90 0,61 (0,55 / 0,703) 0,78 /0,83) .001 **
C95 0,68 (0,57 / 0,77) 0,82 (0,76 / 0,90) .001 **
RK Среднее значение 0,63 (0,58 / 0,68) .002 **
C90 0.65 (0,57 / 0,76) 0,81 (0,73 / 0,88) .002 **
C95 0,74 (0,59 / 0,80) 0,88 (0,78 / 0,98) .002 **
AK Среднее значение 0,51 (0,48 / 0,55) 0,59 (0,55 / 0,65) .002 **
C90 0,62 (0,56 / 0,68) 0,73) ( .003 *
C95 0,68 (0,61 / 0,76) 0.78 (0,72 / 0,86) 0,015 *
[ 18 F] -FET PET TBR среднее 2,00 (1,83 / 2,08) 2,00 (1,90 / 2,23) .
TBR макс. 2,50 (2,13 / 3,20) 3,30 (2,75 / 3,93) 0,012 **
TTP 37,5055 (37,52 9055) 27,50 (37,50 / 27,5) 27,50 /22,5) .067
Наклон 0.42 (0,65 / 0,32) 0,25 (0,61 / 0,03) .210

Примеры 18 поглощения F-FET, CE-T 1 , карты параметров DT / KT и соответствующие гистограммы к областям интереса, выделенным на картах для одного репрезентативного пациента из каждой группы TRC и TPR, показаны в и, соответственно. У пациента TRC () гистограммы коэффициента диффузии представляют собой большие области с более высокими значениями, тогда как гистограммы KT явно смещены в сторону более низких значений по сравнению с пациентом из группы TPR ().Соответственно, на уровне группы кумулятивные гистограммы относительной частоты параметров DT / KT в группе TPR кажутся смещенными в сторону более низких коэффициентов диффузии и более высоких значений диффузионного куртоза по сравнению с группой TRC ().

Примеры захвата 18 F-FET, МРТ CE-T 1 и карты параметров DT / KT (A), а также гистограммы, соответствующие областям интереса, выделенным на картах для пациента с TRC (B).

Примеры захвата 18 F-FET, МРТ CE-T 1 и карты параметров DT / KT (A), а также гистограммы, соответствующие областям интереса, выделенным на картах для пациента с TPR (B).

Примеры кумулятивных относительных частотных гистограмм параметров DT (MD / RD / AD) и KT (MK / RK / AK), показывающих сдвиги в сторону более низких значений коэффициента диффузии и более высоких значений диффузионного эксцесса в TPR по сравнению с группой TRC .

Значение отсечки MK C90, равное 0,62, дало наибольшее значение AUC = 0,87 ( P <0,0001) с чувствительностью 100%, специфичностью 64% и точностью 88%. Чувствительность 100% также была достигнута по среднему значению МК и RK C90, показывающему AUC равным 0.85 ( P <.0001) и 0,83 ( P = .0001) соответственно. Наибольшая специфичность (91%) наблюдалась у МК C95 с AUC 0,86 ( P <0,0001). AUC существенно не различались между параметрами KT ( P > 0,05). ROC-анализ для TBR max , единственного значимого параметра среди показателей 18 F-FET PET, дал пороговое значение 2,95 и AUC 0,77 ( P = 0,003) с чувствительностью 71%, специфичностью. 73% и точность 72%.

Модель многомерной логистической регрессии была протестирована для комбинации показателей с наивысшими правильными показателями классификации в каждом из DKI и 18 наборов параметров F-FET PET (т. Е. Среднее MK, MK C90 и TBR max ), а также для различных комбинаций параметров DKI и 18 F-FET PET, которые были значимыми при межгрупповых сравнениях. Однако, поскольку ни одна из последних комбинаций не дала лучшей диагностической точности, чем комбинация MK C90 и TBR max , эти тесты не рассматривались в дальнейшем анализе.Комбинация MK C90 и TBR max дала наивысшую диагностическую точность (94%) с AUC 0,97 (, нижняя панель). ROC-анализ одного индекса FET – DKI (уравнение 1) дал порог более 41 для определения TPR, что дало AUC 0,97, чувствительность 95%, специфичность 91% и точность 94%. для различения TPR и TRC. суммирует результаты анализа кривой ROC и логистической регрессии для параметров гистограммы показателей KT и TBR max из 18 поглощения F-FET.Результаты анализа ROC для дифференциации между группами TPR и TRC визуализированы для MK C90 (красный), TBR max (зеленый) и индекса FET – DKI (черный) для сравнения.

Таблица 2.

Диагностическая точность параметров гистограммы KT и TBR max FET PET для дифференциации между TRC и TPR по оценке ROC и одномерного логистического регрессионного анализа (верхняя панель) и многомерной логистической регрессии (нижняя часть). Панель): AUC, значения отсечения, значения 95% ДИ в скобках, чувствительность, специфичность и значения P

83 9055 9055 83 9055 анализ для анализа OC дифференциация между группами TPR и TRC на основе MK C90 (красный), TBR max (зеленый) и индекса FET – DKI (черный). AUC указаны в легенде к рисунку.

Обсуждение

Основной результат нашего исследовательского исследования показывает, что использование комбинированной информации, относящейся к транспорту аминокислот с помощью 18 F-FET PET и микроструктурной информации из диффузионной МРТ, может предложить синергетические преимущества для клинической практики при решении проблемы различения между TPR и TRC.То есть для пациентов с подозрением на рецидив глиобластомы области мозга с повышенным поглощением 18 F-FET демонстрируют микроструктурные различия, которые могут быть зафиксированы параметрами гистограммы KT, что позволяет дифференцировать TPR и TRC с высокой диагностической точностью. Еще один важный вывод заключается в том, что показатели KT в областях с высоким уровнем потребления 18 F-FET существенно превосходят показатели DT при различении TPR и TRC. Этот вывод согласуется с ранее сообщавшейся более высокой чувствительностью показателей KT при характеристике различных патологических состояний мозга. 41,42 Кроме того, многомерный логистический регрессионный анализ показал, что различие между TPR и TRC может быть улучшено за счет комбинации параметров гистограммы KT и TBR max . Основываясь на этом результате, мы сгенерировали единый надежный индекс FET – DKI, суммируя взвешенные значения TBR max и MK C90 (уравнение 1). Индекс FET – DKI позволил дифференцировать TPR и TRC с AUC 0,97 при пороговом значении 41 и, таким образом, может быть полезен при принятии клинических решений.Мы хотели бы подчеркнуть, что высокая производительность показателей KT и комбинированного подхода FET – DKI, наблюдаемая в этой работе, может быть связана, с одной стороны, с сегментацией поражений по областям с повышенным поглощением 18 F-FET а не на МРТ с контрастным усилением и, с другой стороны, к применению анализа гистограмм, уменьшая усредняющие эффекты либо TPR, либо неоднородности поражения, модулируемой лечением.

Наши результаты, касающиеся параметров DT / KT, требуют обсуждения в контексте современной литературы.Что касается белого вещества нормального вида, значения коэффициентов диффузии и диффузионного куртоза, наблюдаемые в этой работе, находились в диапазоне значений, наблюдаемых в предыдущих исследованиях. 24,25 На сегодняшний день лишь в небольшом количестве исследований гистограмма DKI применялась к пациентам с опухолями головного мозга. 43,44 Эти исследования, однако, были сосредоточены в первую очередь на оценке глиомы, поэтому прямое сравнение с нашими результатами невозможно. Тем не менее, в нескольких исследованиях изучалась роль обычного DTI в дифференциации TPR от TRC 30,45,46 , при этом большинство данных указывает на недостаточную диагностическую точность.В нашем исследовании наблюдалась четкая тенденция к более низким значениям коэффициента диффузии в группе TPR; однако ни один из показателей DT не достиг статистической значимости при межгрупповой дифференциации.

Положительная корреляция между показателями эксцесса и Ki-67, маркером клеточной пролиферации, была обнаружена Jiang et al., 25 , предполагая, что более высокая клеточность в сочетании с другими клеточными, субклеточными и внеклеточными изменениями способствует увеличению микроструктурных изменений. сложность опухолевой ткани.Аналогичным образом Hempel et al. 41 недавно обнаружил значительные вариации МК в зависимости от молекулярных подтипов глиом с хорошо известными различиями в гистологических особенностях. В более общем плане предполагается, что за исключением наиболее простых количественных параметров, таких как плотность клеток, различные дополнительные характеристики (размер, форма, соотношение нуклеоплазмы и цитоплазмы и т. Д.) Опухолевых клеток 47 и состав внеклеточного матрикса 48 также может влиять на диффузию воды.

Результаты показывают, что многокомпонентное нарушение микросреды после лечения 49 приводит к более низкому диффузионному эксцессу в TRC по сравнению с плотно организованными пучками аксонов нормального белого вещества. Напротив, в TPR пролиферирующие и вторгающиеся / инфильтрирующие клетки и извилистость внеклеточного пространства приводят к более высокому эксцессу, чем в TRC, но не так высокому, как в нормальном белом веществе. Различное сочетание признаков, предполагающих TPR и TRC, обычно регистрируется при гистологии. 49 В этом отношении наш новый подход к определению ROI на основе 18 F-FET PET позволил нам сосредоточиться на метаболически активной ткани, тем самым отбросив «чистый» вазогенный перилезионный отек и неспецифическое нарушение гематоэнцефалического барьера, в то же время включая окружающие нормальные - паренхима на МРТ, которая, однако, показала выше порогового значения 18 поглощение F-FET на ПЭТ. Кроме того, поскольку диффузионный сигнал может колебаться во время и после терапии, что приводит к путанице в интерпретации при измерении в один момент времени, 18,48 метаболическая информация, предоставляемая 18 F-FET PET, также может помочь в уменьшении мешающих факторов.

В настоящем исследовании для выявления метаболически аномальной ткани использовался порог поглощения 18 F-FET на 1,6 или более выше фона. Этот порог был определен в необработанных глиомах, чтобы лучше дифференцировать ткань глиомы от перитуморальной ткани. 8 Однако в посттерапевтической ситуации реактивные изменения в ткани, такие как реактивный астроцитоз, приводят к умеренному увеличению поглощения F-FET на 18 , так что 3D ROI, используемый в этом исследовании, вероятно, включает как TPR, так и TRC.Тем не менее, 18 F-FET PET показал хорошую диагностическую точность при различении TRC и TPR. 9,29 Наши результаты согласуются с опубликованными, 9,29 , хотя мы не обнаружили значительных различий для TBR , среднее значение , что может быть связано с относительно небольшим размером выборки в нашем исследовании.

Ограничения этой работы относятся к относительно небольшому количеству пациентов, отсутствию набора для валидации, моноцентрическому подходу, небольшому количеству биопсий в группе TRC, широкому диапазону времени после различных процедур, что может помешать обобщаемость результатов.Кроме того, антиангиогенные препараты или кортикостероиды могут оказывать влияние, особенно на усиление контрастности при МРТ, то есть проницаемость гематоэнцефалического барьера. Однако поглощение 18 F-FET, которое использовалось для определения ROI, не зависит от нарушения BBB. Следовательно, влияние этих препаратов на результаты маловероятно. Более того, существует систематическая ошибка отбора, поскольку на 18 F-FET PET направляются только пациенты, у которых диагноз неясен на основании обычных МРТ и клинических параметров.Таким образом, коллектив представляет проблемные случаи в клинической практике, что усиливает достоверность результатов. Тем не менее, дальнейшие исследования с невропатологической проверкой результатов нейровизуализации у большего числа пациентов необходимы для подтверждения наших результатов.

В заключение, наши результаты показывают, что совместное использование аминокислотного ПЭТ с использованием индикатора 18 F-FET и анализа гистограммы KT может помочь точно определить различия между TPR и TRC.Было продемонстрировано, что анализ гистограммы KT имеет потенциальную ценность при определении тонких различий в визуализации между прогрессирующей глиобластомой и TRC и работает лучше, чем показатели DT. Более высокая диагностическая точность была получена путем объединения 18 F-FET PET (TBR max ) и центилей гистограммы KT более высокого уровня (MK C90) по сравнению с автономными метриками 18 F-FET PET и DT / KT. . Таким образом, комбинированный анализ аминокислот с помощью ПЭТ и расширенной МРТ дает больше диагностической информации, чем любой метод по отдельности.В будущих исследованиях следует искать аномалии диффузии в субрегионах опухолей с максимальным поглощением 18 F-FET и проводить сравнения с гистомолекулярными данными, чтобы пролить больше света на их взаимосвязь с микроструктурными и морфологическими особенностями среды обитания опухоли с наибольшей плотностью клеток.

Дополнительные материалы

vdab044_suppl_Supplementary_Table_S1
vdab044_suppl_Supplementary_Table_S2

Благодарности

Авторы благодарят Петру Энгельс, Эльзан Фреанзен, пациентку Сьюзан Фрехтсхолц, Эльзан Бехтхенц, пациента исследования; Йоханнес Эрмерт, Силке Графмюллер, Эрика Ваббалс и Саша Ребейн за радиосинтез 18 F-FET; Клэр Рик за вычитку рукописи.

Заявление о конфликте интересов . Конфликт интересов не требуется.

Заявление об авторстве

Схема эксперимента: F.D., F.G., N.J.S., and K.-J.L .; реализация: F.D., F.G., N.G., C.F., E.F. и G.S; анализ данных: F.D., F.G., J.M., G.B., E.F., C.F. и P.L .; интерпретация: F.D., F.G., N.G., G.B., P.L., N.J.S., F.M.M. и K.-J.L .; в письменной форме участвовали: все; прочитал и одобрил: все.

Список литературы

1. Тыкоцки Т., Эльтаеб М.. Десятилетняя выживаемость при глиобластоме. Систематический обзор. J Clin Neurosci. 2018; 54: 7–13. [PubMed] [Google Scholar] 2. Брандес А.А., Тосони А., Спаньолли Ф. и др. Прогрессирование или псевдопрогрессия заболевания после сопутствующего лечения радиохимиотерапией: подводные камни нейроонкологии. Neuro Oncol. 2008. 10 (3): 361–367. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 3. Zikou A, Sioka C, Alexiou GA, Fotopoulos A, Voulgaris S, Argyropoulou MI .. Лучевой некроз, псевдопрогрессия, псевдорекликация и рецидив опухоли: проблемы с визуализацией для оценки обработанных глиом.Contrast Media Mol Imaging. 2018; 2018: 6828396. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Ян D . Стандартизированная МРТ-оценка ответа на глиомы высокой степени: обзор основных элементов и ошибок критериев РАНО. Neurooncol Pract. 2016; 3 (1): 59–67. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. O’Neill BE, Hochhalter CB, Carr C, Strong MJ, Ware ML .. Достижения в методах нейроонкологической визуализации. Охснер Дж. 2018; 18 (3): 236–241. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 7. Langen KJ, Galldiks N, Hattingen E, Shah NJ.. Достижения в области нейроонкологической визуализации. Nat Rev Neurol. 2017; 13 (5): 279–289. [PubMed] [Google Scholar] 8. Альберт Н.Л., Веллер М., Сухорска Б. и др. Оценка ответа в рабочей группе по нейроонкологии и рекомендации Европейской ассоциации нейроонкологов по клиническому использованию ПЭТ-визуализации при глиомах. Neuro Oncol. 2016; 18 (9): 1199–1208. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Галлдикс Н., Дункл В., Стоффельс Г. и др. Диагностика псевдопрогрессии у пациентов с глиобластомой с помощью ПЭТ O - (2- [ 18 F] фторэтил) -L-тирозин.Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2015. 42 (5): 685–695. [PubMed] [Google Scholar] 10. Маурер Г.Д., Брюкер Д.П., Стоффельс Г. и др. 18 F-FET ПЭТ-визуализация для дифференциации прогрессирования глиомы от изменений, связанных с лечением: опыт одного центра. J Nucl Med. 2020; 61 (4): 505–511. [PubMed] [Google Scholar] 11. Nilsson M, Englund E, Szczepankiewicz F, van Westen D, Sundgren PC .. Визуализация микроструктуры опухоли головного мозга. Нейроизображение. 2018; 182: 232–250. [PubMed] [Google Scholar] 13. Чен Л., Лю М., Бао Дж и др.Корреляция между кажущимся коэффициентом диффузии и клеточностью опухоли у пациентов: метаанализ. PLoS One. 2013; 8 (11): e79008. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 14. Мардор Ю., Пфеффер Р., Шпигельманн Р. и др. Раннее выявление ответа на лучевую терапию у пациентов со злокачественными новообразованиями головного мозга с помощью стандартной диффузно-взвешенной магнитно-резонансной томографии с высоким значением b. J Clin Oncol. 2003. 21 (6): 1094–1100. [PubMed] [Google Scholar] 15. Reimer C, Deike K, Graf M и др. Дифференциация псевдопрогрессии и реального прогрессирования глиобластомы с использованием параметрических карт ответа ADC.PLoS One. 2017; 12 (4): e0174620. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 17. Кан И, Чой Ш., Ким Й. Дж. И др. Глиомы: анализ гистограмм карт кажущихся коэффициентов диффузии со стандартным или высоким b-значением диффузионно-взвешенной МРТ - корреляция со степенью опухоли. Радиология. 2011. 261 (3): 882–890. [PubMed] [Google Scholar] 18. Padhani AR, Miles KA .. Многопараметрическая визуализация ответа опухоли на терапию. Радиология. 2010. 256 (2): 348–364. [PubMed] [Google Scholar] 19. Папа У. Б., Лай А., Мехта Р. и др.Анализ гистограммы кажущегося коэффициента диффузии стратифицирует выживаемость без прогрессирования у недавно диагностированной глиобластомы, леченной бевацизумабом. AJNR Am J Neuroradiol. 2011. 32 (5): 882–889. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20. Рахман Р., Хамдан А., Цвайфлер Р. и др. Анализ гистограммы кажущегося коэффициента диффузии в увеличивающихся и не увеличивающихся объемах опухоли у пациентов с рецидивирующей глиобластомой, получавших бевацизумаб. J Neurooncol. 2014. 119 (1): 149–158. [PubMed] [Google Scholar] 23. Маррале М., Коллура Г., Брай М. и др.Физика, методы и обзор нейрорадиологических приложений визуализации диффузного эксцесса (DKI). Clin Neuroradiol. 2016; 26 (4): 391–403. [PubMed] [Google Scholar] 24. Ван Каутер С., Вераарт Дж., Сиджберс Дж. И др. Глиомы: диффузный эксцесс МРТ в оценке. Радиология. 2012. 263 (2): 492–501. [PubMed] [Google Scholar] 25. Цзян Р., Цзян Дж., Чжао Л. и др. Визуализация диффузного эксцесса может эффективно оценить степень глиомы и клеточную пролиферацию. Oncotarget. 2015; 6 (39): 42380–42393. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 26.Neuner I., Kaffanke JB, Langen KJ, et al. Мультимодальная визуализация с использованием встроенного МР-ПЭТ для оценки опухоли головного мозга человека. Eur Radiol. 2012. 22 (12): 2568–2580. [PubMed] [Google Scholar] 27. Ломанн П., Вернер Дж. М., Шах Н. Дж., Финк Г. Р., Ланген К. Дж., Галлдикс Н. Комбинированная позитронно-эмиссионная томография аминокислот и расширенная магнитно-резонансная томография у пациентов с глиомой. Раки. 2019; 11 (2): 153. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28. Шах Нью-Джерси. Гибридная визуализация MR-PET: системы, методы и приложения.Кембридж, Великобритания: Королевское химическое общество; 2018. [Google Scholar] 29. Галлдикс Н., Кочер М., Ланген К.Дж. Псевдопрогрессия после терапии глиомы: обновленная информация. Эксперт Rev Neurother. 2017; 17 (11): 1109–1115. [PubMed] [Google Scholar] 30. Вернер Дж. М., Стоффельс Дж., Лихтенштейн Т. и др. Дифференциация изменений, связанных с лечением, от прогрессирования опухоли: прямое сравнение между динамическими значениями FET PET и ADC, полученными с помощью DWI MRI. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2019; 46 (9): 1889–1901. [PubMed] [Google Scholar] 31.Молодой Р.Дж., Гупта А., Шах А.Д. и др. Потенциальная польза обычных признаков МРТ в диагностике псевдопрогрессии при глиобластоме. Неврология. 2011; 76 (22): 1918–1924. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 32. Галлдикс Н., Стоффельс Г., Филсс С. и др. Применение динамического O - (2- (18) F-фторэтил) -L-тирозин ПЭТ в диагностике пациентов с прогрессирующей и рецидивирующей глиомой. Neuro Oncol. 2013; 15: 196. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Филсс С.П., Галлдикс Н., Стоффельс Г. и др.Сравнение ПЭТ с 18F-FET и перфузионно-взвешенной МРТ: гибридное исследование ПЭТ / МРТ у пациентов с опухолями головного мозга. J Nucl Med. 2014; 55 (4): 540–545. [PubMed] [Google Scholar] 34. Leemans A, Jones DK .. B-матрица должна быть повернута при коррекции движения объекта в данных DTI. Magn Reson Med. 2009. 61 (6): 1336–1349. [PubMed] [Google Scholar] 35. МакГибни Дж., Смит М.Р. Несмещенная мера отношения сигнал / шум для изображений магнитного резонанса. Med Phys. 1993. 20 (4): 1077–1078. [PubMed] [Google Scholar] 36.Миллер А.Дж., Джозеф П.М. Использование мощных изображений для количественного анализа МР-изображений с низким ОСШ. Магнитно-резонансная томография. 1993. 11 (7): 1051–1056. [PubMed] [Google Scholar] 37. Аха-Фернандес С., Тристан-Вега А., Альберола-Лопес С. Оценка шума в данных магнитного резонанса с одной и несколькими катушками на основе статистических моделей. Магнитно-резонансная томография. 2009. 27 (10): 1397–1409. [PubMed] [Google Scholar] 38. Leemans A, Jeurissen B, Sijbers J, Jones DK .. ExploreDTI: графический набор инструментов для обработки, анализа и визуализации диффузионных МР-данных.Proc Intl Soc Mag Reson Med. 2009; 17: 3537. . [Google Scholar] 39. Галлдикс Н., Ланген К.Дж., Холи Р. и др. Оценка ответа на лечение у пациентов с глиобластомой с использованием ПЭТ O - (2- 18 F-фторэтил) -L-тирозин в сравнении с МРТ. J Nucl Med. 2012. 53 (7): 1048–1057. [PubMed] [Google Scholar] 40. Кочунов П., Ганджгахи Х., Винклер А. и др. Гетерохронность развития белого вещества и старения объясняет региональные различия в контроле пациентов при шизофрении. Hum Brain Mapp.2016; 37 (12): 4673–4688. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 41. Хемпель Дж. М., Шиттенхельм Дж., Бисдас С. и др. Оценка in vivo неоднородности опухоли по классам глиомы по классификации ВОЗ 2016 с использованием визуализации диффузного эксцесса: диагностическая эффективность и повышение применимости в повседневной клинической практике. J Neuroradiol. 2018; 45 (1): 32–40. [PubMed] [Google Scholar] 42. Гринберг Ф., Фаррер Э., Чобану Л., Джеффрой Ф., Ле Бихан Д., Шах Нью-Джерси. Негауссовская диффузионная визуализация для увеличения контраста ткани мозга, пораженной ишемическим инсультом.PLoS One. 2014; 9 (2): e89225. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 43. Ци XX, Ши Д.Ф., Рен С.Х. и др. Анализ гистограммы карт, полученных с помощью визуализации диффузного эксцесса, может различать глиомы низкой и высокой степени злокачественности до операции. Eur Radiol. 2018; 28 (4): 1748–1755. [PubMed] [Google Scholar] 44. Хемпель Дж. М., Шиттенхельм Дж., Брендл С. и др. Анализ гистограммы оценок диффузного эксцесса визуализации для оценки in vivo степени глиомы, ВОЗ, 2016 г .: перекрестное обсервационное исследование. Eur J Radiol.2017; 95: 202–211. [PubMed] [Google Scholar] 45. Ван С., Мартинес-Лаге М., Сакаи Ю. и др. Дифференциация прогрессирования опухоли от псевдопрогрессии у пациентов с глиобластомами с использованием тензорной диффузной визуализации и МРТ с контрастом динамической восприимчивости. AJNR Am J Neuroradiol. 2016; 37 (1): 28–36. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 46. Qian X, Tan H, Zhang J, Zhao W, Chan MD, Zhou X .. Стратификация псевдопрогрессии и истинного прогрессирования мультиформной глиобластомы на основе визуализации тензора продольной диффузии без сегментации.Med Phys. 2016; 43 (11): 5889. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 47. Eida S, Van Cauteren M, Hotokezaka Y, et al. Длина интактной плазматической мембраны определяет диффузионные свойства клеточной воды. Научный доклад 2016; 6: 19051. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 48. Сандгрен П.К., Фан Х, Вейбрайт П. и др. Дифференциация рецидивирующей опухоли головного мозга по сравнению с лучевым поражением с использованием тензорной диффузионной визуализации у пациентов с новыми контрастными поражениями. Магнитно-резонансная томография. 2006. 24 (9): 1131–1142.[PubMed] [Google Scholar] 49. Мельгисо-Гавиланес И., Брунер Дж. М., Гуха-Такурта Н., Хесс К. Р., Пудувалли В. К. Характеристика псевдопрогрессии у пациентов с глиобластомой: гистология - золотой стандарт? J Neurooncol. 2015; 123 (1): 141–150. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]


Статьи из Neuro-oncology Advances предоставлены здесь с любезного разрешения Oxford University Press

Неинвазивные маркеры фиброза печени | BMC Gastroenterology

  • 1.

    Schiff ER, Lee SS, Chao YC, Kew-Yoon S, Bessone F, Wu SS, Kryczka W, Lurie Y, Gadano A, Kitis G, Beebe S, Xu D, Tang H, Iloeje U : Длительное лечение энтекавиром вызывает исчезновение выраженного фиброза или цирроза печени у пациентов с хроническим гепатитом B.Clin Gastroenterol Hepatol. 2010,

    Google ученый

  • 2.

    Chang TT, Liaw YF, Wu SS, Schiff E, Han KH, Lai CL, Safadi R, Lee SS, Halota W, Goodman Z, Chi YC, Zhang H, Hindes R, Iloeje U, Beebe S , Кретер Б. Длительная терапия энтекавиром приводит к обращению фиброза / цирроза и продолжающемуся гистологическому улучшению у пациентов с хроническим гепатитом В. Гепатология. 2010, 52 (3): 886-893. 10.1002 / hep.23785.

    CAS PubMed Google ученый

  • 3.

    Rygiel KA, Robertson H, Marshall HL, Pekalski M, Zhao L, Booth TA, Jones DE, Burt AD, Kirby JA: Эпителиально-мезенхимальный переход способствует фиброгенезу портального тракта при хроническом заболевании печени у человека. Lab Invest. 2008, 88: 112-123. 10.1038 / labinvest.3700704.

    CAS PubMed Google ученый

  • 4.

    Бреннер Д.А. Молекулярный патогенез фиброза печени. Труды Американской клинической и климатологической ассоциации.2009, 120: 361-368.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 5.

    Malhi H, Guicciardi ME, Gregory J, Gores GJ: Смерть гепатоцитов: явная и реальная опасность. Physiol Rev.2010, 90: 1165-1194. 10.1152 / Physrev.00061.2009.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 6.

    Робертс Р.А., Ганей П.Е., Джу К., Камендулис Л.М., Русин И., Клауниг Дж. Э .: Роль клеток Купфера в опосредовании токсичности для печени и канцерогенеза.Токсикологические науки. 2006, 96 (1): 2-7. 10.1093 / toxsci / kfl173. Фридман С.Л. Звездчатые клетки печени: протеановые, многофункциональные и загадочные клетки печени. Physiol Rev.2008, 88 (1): 125-172

    PubMed Google ученый

  • 7.

    Цзяо Дж., Фридман С.Л., Аломан С. Фиброз печени. Курр Опин Гастроэнтерол. 2009, 25 (3): 223-229. 10.1097 / MOG.0b013e3283279668.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 8.

    Баталлер Р., Бреннер Д.А.: Фиброз печени. Журнал клинических исследований. 2005, 115 (2): 209-218.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 9.

    Fontana L, Jerez D, Rojas-Valencia L, Solis-Herruzo JA, Greenwel P, Rojkind M: этанол индуцирует экспрессию мРНК проколлагена альфа1 (I) в системе совместного культивирования, содержащей звездчатые клетки печени. -линейные и свежевыделенные гепатоциты. Biochim Biophys Acta.1997, 1362: 135-144.

    CAS PubMed Google ученый

  • 10.

    Пурохит В., Бреннер Д.А.: Механизмы алкогольного фиброза печени: Резюме симпозиума Рона Турмана. Гепатология. 2006, 43 (4): 872-878. 10.1002 / hep.21107.

    CAS PubMed Google ученый

  • 11.

    Бертолани К., Марра Ф .: Роль адипокинов в фиброзе печени. Патофизиология.2008, 15: 91-101. 10.1016 / j.pathophys.2008.05.001.

    CAS PubMed Google ученый

  • 12.

    Диль AM: Неалкогольный стеатоз и стеатогепатит, Неалкогольная жировая болезнь печени, нарушения функции макрофагов и цитокинов. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2002, 282: G1-G5.

    CAS PubMed Google ученый

  • 13.

    Рахмуни К., Хейнс РГ: Эндотелиальные эффекты лептина: последствия для здоровья и болезней.Curr Diab Rep. 2005, 5: 260-266. 10.1007 / s11892-005-0020-5.

    CAS PubMed Google ученый

  • 14.

    Бертолани С., Санчо-Бру П., Фаилли П., Баталлер Р., Алеффи С., ДеФранко Р., Маззинги Б., Романьани П., Милани С., Джинес П., Колменеро Дж., Парола М., Гельмини С., Тарквини Р., Лаффи Г., Пинзани М., Марра Ф .: Резистин как внутрипеченочный цитокин: сверхэкспрессия во время хронического повреждения и индукция провоспалительных действий в звездчатых клетках печени.Am J Pathol. 2006, 169: 2042-2053. 10.2353 / ajpath.2006.060081.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 15.

    Глейзер С.С., Гаудио Э., Миллер Т., Альваро Д., Альпини Г.: пролиферация холангиоцитов и фиброз печени. Эксперт Rev Mol Med. 2009, 25; 11: e7-

    Google ученый

  • 16.

    Bataller R, Yang L, Brenner DA: Трансгенная мышь с двойным репортерным геном демонстрирует гетерогенность в популяциях фиброгенных клеток печени.Гепатология. 2004, 40: 1151-1159. 10.1002 / hep.20427.

    PubMed Google ученый

  • 17.

    Martin-Vílchez S, Sanz-Cameno P, Rodriguez-Munoz Y, Majano PL, Molina-Jimenez F, Lopez-Cabrera M, Moreno-Otero R, Lara-Pezzi E: белок вируса гепатита B X вызывает паракринную активацию звездчатых клеток печени человека. Гепатология. 2008, 47 (6): 1872-1883. 10.1002 / hep.22265.

    PubMed Google ученый

  • 18.

    Лин У, Ву Дж, Ли С., Вайнберг Э.М., Кумтип К., Пэн Л.Ф., Мендес-Наварро Дж., Чен В.С., Джилг Н., Чжао Х., Гото К., Чжан Л., Брокман М.А., Шуппан Д., Чунг РТ: ВИЧ и HCV кооперативно способствует фиброгенезу печени за счет индукции активных форм кислорода и NF {каппа} B. J Biol Chem. 2010,

    Google ученый

  • 19.

    Себастьяни Г., Альберти А. Неинвазивные биомаркеры фиброза уменьшают, но не заменяют необходимость биопсии печени. Мир Дж. Гастроэнтерол.2006, 12 (23): 3682-3694.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 20.

    West J, Card TR: Снижение показателей смертности после плановой чрескожной биопсии печени. Гастроэнтерология. 2010, 139 (4): 1230-7. 10.1053 / j.gastro.2010.06.015. Epub 2010 12 июня

    PubMed Google ученый

  • 21.

    Terjung B, Lemnitzer I, Dumoulin FL, Effenberger W, Brackmann HH, Sauerbruch T., Spengler U: Осложнения, связанные с кровотечением после чрескожной биопсии печени.Анализ факторов риска. Пищеварение. 2003, 67 (3): 138-45.

    PubMed Google ученый

  • 22.

    Knodell RG, Ishak KG, Black WC, Chen TS, Craig R, Kaplowitz N, Kiernan TW, Wollman J: Формулировка и применение числовой балльной системы для оценки гистологической активности при бессимптомном хроническом активном гепатите. Гепатология. 1981, 1: 431-435. 10.1002 / hep.1840010511.

    CAS PubMed Google ученый

  • 23.

    Standish RA, Cholongitas E, Dhillon A, Burroughs AK, Dhillon AP: Оценка гистопатологической оценки фиброза печени. Кишечник. 2006, 55: 569-578. 10.1136 / gut.2005.084475.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 24.

    Scheuer PJ: Классификация хронических вирусных гепатитов: необходимость переоценки. Журнал гепатологии. 1991, 13: 372-4. 10.1016 / 0168-8278 (91)

    -О.

    CAS PubMed Google ученый

  • 25.

    Десмет В. Дж., Гербер М., Хофнэгл Дж. Х. и др.: Классификация хронического гепатита: Диагностика, классификация и стадия. Гепатология. 1994, 19: 1513-20. 10.1002 / hep.18401.

    PubMed Google ученый

  • 26.

    Ratnakar KS, Sudha S: Анализ изображений при оценке хронического гепатита. Бахрейнский медицинский бюллетень. 2001

    Google ученый

  • 27.

    Бедосса П., Пойнард Т.: алгоритм оценки активности при хроническом гепатите С.Совместная исследовательская группа МЕТАВИР. Гепатология. 1996, 24 (2): 289-293.

    CAS Google ученый

  • 28.

    Пойнард Т, Гепатит В, Гепатит С: ведение и лечение. Книга Мартина Дуница. 2002, Тейлор и Фрэнсис, Соединенное Королевство, 1

    Google ученый

  • 29.

    Franciscus A: Средства диагностики ВГС: оценка и стадия биопсии печени. 2010, HCSP, версия 2.4

    Google ученый

  • 30.

    Пойнард Т., Рациу В., Бенманов Ю., Мартино В.Д., Бедосса П., Ополон П. Фиброз у пациентов с гепатитом С: выявление и значение. Semin Liver Dis. 2000, 20 (1): 0047-0056. 10.1055 / с-2000-9258.

    CAS Google ученый

  • 31.

    Бедосса П., Каррат Ф .: Фиброз печени: скрининг не является стадийным. J Hepatol. 2009, 50 (6): 1268-1269. 10.1016 / j.jhep.2009.02.011.

    PubMed Google ученый

  • 32.

    Bondini S, Kleiner DE, Goodman ZD, Gramlich T, Younossi ZM: Патологическая оценка неалкогольной жировой болезни печени. Clin Liver Dis. 2007, 11 (1): 17-23. 10.1016 / j.cld.2007.02.002. vii

    PubMed Google ученый

  • 33.

    Poynard T, Halfon P, Castera L, Munteanu M, Imbert-Bismut F, Ratziu V, Benhamou Y, Bourlière M, de Ledinghen V, FibroPaca Group: Стандартизация областей кривой ROC для диагностической оценки фиброза печени маркеры, основанные на распространенности стадий фиброза.Clin Chem. 2007, 53 (9): 1615-22. 10.1373 / Clinchem.2007.085795.

    CAS PubMed Google ученый

  • 34.

    Bedossa P, Dargère D, Paradis V: Вариабельность выборки фиброза печени при хроническом гепатите C. Гепатология. 2003, 38 (6): 1449-57.

    PubMed Google ученый

  • 35.

    Ziol M, Handra-Luca A, Kettaneh A, Christidis C, Mal F, Kazemi F, de Lédinghen V, Marcellin P, Dhumeaux D, Trinchet JC, Beaugrand M: неинвазивная оценка фиброза печени путем измерения скованность у больных хроническим гепатитом С.Гепатология. 2005, 41 (1): 48-54. 10.1002 / hep.20506.

    PubMed Google ученый

  • 36.

    Фридрих-Руст М., Онг М.Ф., Мартенс С., Саррацин С., Боджунга Дж., Цеузем С., Херрманн Е.: Проведение временной эластографии для определения стадии фиброза печени: метаанализ. Гастроэнтерология. 2008, 134 (4): 960-74. 10.1053 / j.gastro.2008.01.034.

    PubMed Google ученый

  • 37.

    Degos F, Perez P, Roche B, Mahmoudi A, Asselineau J, Voitot H, Bedossa P, Исследовательская группа FIBROSTIC: диагностическая точность FibroScan и сравнение с биомаркерами фиброза печени при хроническом вирусном гепатите: многоцентровое проспективное исследование (исследование FIBROSTIC) . J Hepatol. 2010, 53 (6): 1013-21. 10.1016 / j.jhep.2010.05.035.

    PubMed Google ученый

  • 38.

    Fraquelli M, Rigamonti C, Casazza G, Donato MF, Ronchi G, Conte D, Rumi M, Lampertico P, Colombo M: Этиологические детерминанты значений жесткости печени при хроническом вирусном гепатите B или C.J Hepatol. 2011, 54 (4): 621-8. 10.1016 / j.jhep.2010.07.017.

    PubMed Google ученый

  • 39.

    Castéra L, Vergniol J, Foucher J, Le Bail B, Chanteloup E, Haaser M, Darriet M, Couzigou P, De Lédinghen V: перспективное сравнение транзиторной эластографии, фибротеста, APRI и биопсии печени для оценка фиброза при хроническом гепатите С. Гастроэнтерология. 2005, 128 (2): 343-50. 10.1053 / j.gastro.2004.11.018.

    PubMed Google ученый

  • 40.

    Castéra L, Foucher J, Bernard PH, Carvalho F, Allaix D, Merrouche W, Couzigou P, de Lédinghen V: Подводные камни измерения жесткости печени: 5-летнее проспективное исследование 13 369 обследований. Гепатология. 2010, 51 (3): 828-35.

    PubMed Google ученый

  • 41.

    Manning DS, Afdhal NH: Диагностика и количественная оценка фиброза. Гастроэнтерология 2008, 134. Гастроэнтерология. 2008, 134 (6): 1670-1681. 10.1053 / j.gastro.2008.03.001.

    CAS PubMed Google ученый

  • 42.

    Talwalkar JA: Антифибротическая терапия - новые биомаркеры как конечные точки лечения. Нат Рев Гастроэнтерол Гепатол. 2010, 7 (1): 59-61. 10.1038 / nrgastro.2009.197.

    CAS PubMed Google ученый

  • 43.

    Такахаши Х, Оно Н., Эгути Й, Егучи Т, Китадзима Й, Кавагути Й, Накашита С., Одзаки I, Мизута Т., Тода С., Кудо С., Миёси А., Миядзаки К., Фудзимото К.: оценка Акустическая лучевая импульсная эластография для определения стадии фиброза хронического заболевания печени: пилотное исследование.Liver Int. 2010, 30 (4): 538-45. 10.1111 / j.1478-3231.2009.02130.x.

    PubMed Google ученый

  • 44.

    Йонеда М., Сузуки К., Като С., Фудзита К., Нодзаки И., Хосоно К., Сайто С., Накадзима А.: Неалкогольная жировая болезнь печени: акустическая импульсная пластография с радиационной силой в США. Радиология. 2010, 256 (2): 640-7. 10.1148 / радиол.100

    .

    PubMed Google ученый

  • 45.

    Rifai K, Cornberg J, Mederacke I, Bahr MJ, Wedemeyer H, Malinski P, Bantel H, Boozari B, Potthoff A, Manns MP, Gebel M: Клиническая осуществимость эластографии печени с помощью акустической радиационной импульсной визуализации (ARFI). Dig Liver Dis. 2011

    Google ученый

  • 46.

    Kuroda H, Kakisaka K, Tatemichi Y, Sawara K, Miyamoto Y, Oikawa K, Miyasaka A, Takikawa Y, Masuda T., Suzuki K: неинвазивная оценка фиброза печени с использованием акустической радиационной импульсной визуализации в Больные хроническим гепатитом с вирусной инфекцией гепатита С.Гепатогастроэнтерология. 2010, 57 (102-103): 1203-7.

    PubMed Google ученый

  • 47.

    Таули Б., Эхман Р.Л., Ридер С.Б .: Передовые методы МРТ для оценки хронических заболеваний печени. AJR. 2009, 193: 14-27. 10.2214 / AJR.09.2601.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 48.

    Rouviere O, Yin M, Dresner MA, Rossman PJ, Burgart LJ, Fidler JL, Ehman RL: МР-эластография печени: предварительные результаты.Радиология. 2006, 240 (2): 440-448. 10.1148 / радиол.2402050606.

    PubMed Google ученый

  • 49.

    Yin M, Talwalkar JA, Glaser KJ, Manduca A, Grimm RC, Rossman PJ, Fidler JL, Ehman RL, Yin, M: Оценка фиброза печени с помощью магнитно-резонансной эластографии. Clin Gastroenterol Hepatol. 2007, 5: 1207-1213. 10.1016 / j.cgh.2007.06.012.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 50.

    Huwart L, Sempoux C, Vicaut E, Salameh N, Annet L, Danse E, Peeters F, ter Beek LC, Rahier J, Sinkus R, Horsmans Y, Van Beers BE: магнитно-резонансная эластография для неинвазивной диагностики фиброза печени . Гастроэнтерология. 2008, 135 (1): 32-40. 10.1053 / j.gastro.2008.03.076.

    PubMed Google ученый

  • 51.

    Чжоу К., Лу LG: Оценка фиброза при хронических заболеваниях печени. Журнал болезней органов пищеварения. 2009, 10 (1): 7-14.10.1111 / j.1751-2980.2008.00356.x.

    PubMed Google ученый

  • 52.

    Park SH, Kim CH, Kim DJ, Suk KT, Cheong JY, Cho SW, Hwang SG, Lee YJ, Cho M, Yang JM, Kim YB: полезность нескольких биомаркеров для прогнозирования значительного фиброза у хронический гепатит Б. Дж. Клин Гастроэнтерол. 2011, 45 (4): 361-5. 10.1097 / MCG.0b013e31820d3458.

    CAS PubMed Google ученый

  • 53.

    Григореску М: неинвазивные биохимические маркеры фиброза печени. J Gastrointestin Liver Dis. 2006, 15 (2): 149-159.

    PubMed Google ученый

  • 54.

    Гресснер О.А., Вайскирхен Р., Гресснер А.М.: Биомаркеры фиброза печени: клинический перевод молекулярного патогенеза или основанный на тестах на печеночно-зависимые нарушения функции. Clin Chim Acta. 2007, 381: 107-113. 10.1016 / j.cca.2007.02.038.

    CAS PubMed Google ученый

  • 55.

    Veidal SS, Vassiliadis E, Bay-Jensen AC, Tougas G, Vainer B, Karsdal MA: N-концевой пропептид проколлагена I типа (PINP) является маркером фиброгенеза при фиброзе, вызванном перевязкой желчных протоков у крыс. Ремонт тканей фиброгенеза. 2010, 3 (1): 5-10.1186 / 1755-1536-3-5.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 56.

    Либер К.С., Вайс Д.Г., Паронетто Ф., Совместное исследование по делам ветеранов 391 Группа: Значение маркеров фиброза для определения стадии фиброза печени у пациентов с прецирротической алкогольной болезнью печени.Alcohol Clin Exp Res. 2008, 32 (6): 1031-9. 10.1111 / j.1530-0277.2008.00664.x.

    CAS PubMed Google ученый

  • 57.

    Jarcuska P, Janicko M, Veseliny E, Jarcuska P, Skladany L: Циркулирующие маркеры прогрессирования фиброза печени. Clinica Chimica Acta. 2010, 411 (15-16): 1009-1017. 10.1016 / j.cca.2010.04.009.

    CAS Google ученый

  • 58.

    Sun J: Матричные металлопротеиназы и тканевый ингибитор металлопротеиназ необходимы для воспалительной реакции раковых клеток.Журнал передачи сигналов. 2010, 2010: 1-7.

    Google ученый

  • 59.

    Takahara T, Furui K, Yata Y, Jin B, Zhang LP, Nambu S, Sato H, Seiki M, Watanabe A: Двойная экспрессия матричной протеазы -2 и матричной протеиназы I-типа у людей с фиброзом печень. Гепатология. 1997, 26: 1521-1529. 10.1002 / hep.510260620.

    CAS PubMed Google ученый

  • 60.

    Уолш К.М., Тиммс П., Кэмпбелл С., МакСвин Р.Н., Моррис А.Дж.: Уровни в плазме матриксной металлопротеиназы-2 (ММР-2) и тканевых ингибиторов металлопротеиназ-1 и -2 (ТИМП-1 и ТИМП- 2) в качестве неинвазивных маркеров заболевания печени при хроническом гепатите С: сравнение с использованием ROC-анализа.Dig Dis Sci. 1999, 44: 624-630. 10.1023 / А: 1026630129025.

    CAS PubMed Google ученый

  • 61.

    Murawaki Y, Ikuta Y, Idobe Y, Kawasaki H: матричная металлопротеиназа-1 сыворотки у пациентов с хроническим вирусным гепатитом. J Gastroenterol Hepatol. 1999, 14: 138-145.

    CAS PubMed Google ученый

  • 62.

    Хаясака А., Сузуки Н., Фудзимото Н. и др.: Повышенные уровни в плазме матриксной металлопротеиназы-9 (92-кДа коллагеназа IV типа / желатиназа В) при гепатоцеллюлярной карциноме.Гепатология. 1996, 24: 1058-1062. 10.1002 / hep.510240513.

    CAS PubMed Google ученый

  • 63.

    Бадра Г., Лотфи М., Эль-Рефаи А., Обада М., Абдельмонем Э, Кандил С., Фати А: Значение металлопротеиназы-9 матрикса сыворотки и тканевого ингибитора металлопротеиназы-1 у пациентов с хроническим гепатитом С. Acta Microbiol Immunol Hung. 2010, 57 (1): 29-42. 10.1556 / AMicr.57.2010.1.3.

    CAS PubMed Google ученый

  • 64.

    Kanzler S, Baumann M, Schirmacher P, Dries V, Bayer E, Gerken G, Dienes HP, Lohse AW: Прогнозирование прогрессирующего фиброза печени при инфекции гепатита C по уровням трансформирующего фактора роста-бета в сыворотке и тканях. J Viral Hepat. 2001, 8 (6): 430-7. 10.1046 / j.1365-2893.2001.00314.x.

    CAS PubMed Google ученый

  • 65.

    Lydatakis H, Hager IP, Kostadelou E, Mpousmpoulas S, Pappas S, Diamantis I. Неинвазивные маркеры для прогнозирования фиброза печени при неалкогольной жировой болезни печени.Liver Int. 2006, 26: 864-871. 10.1111 / j.1478-3231.2006.01312.x.

    CAS PubMed Google ученый

  • 66.

    Tran A, Benzaken S, Saint-Paul MC, Guzman-Granier E, Hastier P, Pradier C, Barjoan EM, Demuth N, Longo F, Rampal P: Chondrex (YKL-40), потенциально новый маркер фиброза сыворотки крови у пациентов с алкогольной болезнью печени. Eur J Gastroenterol Hepatol. 2000, 12 (9): 989-993. 10.1097 / 00042737-200012090-00004.

    CAS PubMed Google ученый

  • 67.

    Berres ML, Papen S, Pauels K, Schmitz P, Zaldivar MM, Hellerbrand C, Mueller T, Berg T., Weiskirchen R, Trautwein C, Wasmuth HE: функциональные вариации CHI3L1 связаны с серьезностью фиброза печени и YKL-40 уровни сыворотки при хронической инфекции гепатита С. J Hepatol. 2009, 50 (2): 370-6. 10.1016 / j.jhep.2008.09.016.

    CAS PubMed Google ученый

  • 68.

    Kropf J, Gressner AM, Negwer A: Эффективность измерения ламинина в сыворотке для диагностики фиброзных заболеваний печени.Клиническая химия. 1988, 34: 2026-2030.

    CAS PubMed Google ученый

  • 69.

    Корнер Т., Кропф Дж., Гресснер А.М.: Сывороточный ламинин и гиалуронан при циррозе печени: маркеры прогрессирования с высокой прогностической ценностью. J Hepatol. 1996, 25: 684-688. 10.1016 / S0168-8278 (96) 80239-Х.

    CAS PubMed Google ученый

  • 70.

    Гресснер О.А., Гресснер AM: Фактор роста соединительной ткани: фиброгенный главный переключатель при фиброзных заболеваниях печени.Liver Int. 2008, 28: 1065-1079. 10.1111 / j.1478-3231.2008.01826.x.

    CAS PubMed Google ученый

  • 71.

    Кэмпс Дж, Марсиллах Дж, Джовен Дж .: Измерение сывороточной активности параоксоназы-1 при оценке функции печени. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2009, 15 (16): 1929-1933. 10.3748 / wjg.15.1929.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 72.

    Ферре Н., Кэмпс Дж., Пратс Е, Вилелла Е., Пол А., Фигера Л., Джовен Дж .: Активность параоксоназы в сыворотке: новый дополнительный тест для улучшенной оценки хронического повреждения печени.Clin Chem. 2002, 48 (2): 261-268.

    CAS PubMed Google ученый

  • 73.

    Molleken C, Sitek B, Henkel C, Poschmann G, Sipos B, Wiese S, Warscheid B, Broelsch C, Reiser M, Friedman SL, Tornoe I, Schlosser A, Kloppel G, Schmiegel W, Meyer HE , Holmskov U, Stühler K: Обнаружение новых биомаркеров цирроза печени с помощью протеомного анализа. Гепатология. 2009, 49 (4): 1257-1266. 10.1002 / hep.22764.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 74.

    Haukeland JW, Schreiner LT, Lorgen I, Frigstad SO, Bang C, Raknerud N, Konopski Z: соотношение АСТ / АЛТ дает прогностическую информацию независимо от класса Чайлд-Пью, пола и возраста при безалкогольном циррозе печени. Сканд Дж Гастроэнтерол. 2008, 43 (10): 1241-1248. 10.1080 / 00365520802158614.

    CAS PubMed Google ученый

  • 75.

    Гибони PT: умеренно повышенные уровни печеночных трансаминаз у бессимптомного пациента. Я семейный врач.2005, 71 (6): 1105-1110.

    PubMed Google ученый

  • 76.

    Nguyen-Khac E, Chatelain D, Tramier B, Decrombecque C, Robert B., Joly JP, Brevet M, Grignon P, Lion S, Le Page L, Dupas JL: Оценка бессимптомного фиброза печени у больных алкоголем с использованием FibroScan: проспективное сравнение с семью неинвазивными лабораторными тестами. Алимент Pharmacol Ther. 2008, 28 (10): 1188-98. 10.1111 / j.1365-2036.2008.03831.x.

    CAS PubMed Google ученый

  • 77.

    Лу LG, Zeng MD, Mao YM, Li JQ, Qiu DK, Fang JY, Cao AP, Wan MB, Li CZ, Ye J, Cai X, Chen CW, Wang JY, Wu SM, Zhu JS, Zhou XQ: отношения между клиническими и патологическими данными у пациентов с хроническими заболеваниями печени. Мир Дж. Гастроэнтерол. 2003, 9 (12): 2796-2800.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 78.

    DallaPiazza M, Amorosa VK, Localio R, Kostman JR, Lo Re V: Распространенность и факторы риска значительного фиброза печени среди пациентов с моноинфекцией ВИЧ.BMC Infect Dis. 2010, 10: 116-10.1186 / 1471-2334-10-116.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 79.

    Lin ZH, Xin YN, Dong QJ, Wang Q, Jiang XJ, Zhan SH, Sun Y, Xuan SY: Показатели соотношения аспартатаминотрансферазы и тромбоцитов для определения стадии фиброза, связанного с гепатитом C. : обновленный метаанализ. Гепатология. 2011, 53 (3): 726-36. 10.1002 / hep.24105.

    PubMed Google ученый

  • 80.

    Росси Э., Адамс Л.А., Булсара М., Джеффри Г.П.: Оценка фиброза печени с помощью моделей маркеров сыворотки. Clin Biochem Rev.2007, 28 (1): 3-10.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 81.

    Guechot J, Lasnier E, Sturm N, Paris A, Zarski JP, ANRS HC EP 23 Исследовательская группа Fibrostar: автоматизация Hepascore и проверка в качестве биохимического индекса фиброза печени у пациентов с хроническим гепатитом C из ANRS HC EP 23 Когорта Fibrostar.Clin Chim Acta. 2010, 411 (1-2): 86-91. 10.1016 / j.cca.2009.10.011.

    CAS PubMed Google ученый

  • 82.

    Sterling RK, Lissen E, Clumeck N, Sola R, Correa MC, Montaner J, S. Sulkowski M, Torriani FJ, Dieterich DT, Thomas DL, Messinger D, Nelson M, APRICOT Clinical Investigators: Разработка простой неинвазивный индекс для прогнозирования значительного фиброза у пациентов с коинфекцией ВИЧ / ВГС. Гепатология. 2006, 43: 1317-1325.10.1002 / hep.21178.

    CAS PubMed Google ученый

  • 83.

    Vallet-Pichard A, Mallet V, Nalpas B, Verkarre V, Nalpas A, Dhalluin-Venier V, Fontaine H, Pol S: FIB-4: недорогой и точный маркер фиброза при инфекции HCV. сравнение с биопсией печени и фибротестом. Гепатология. 2007, 46 (1): 32-36. 10.1002 / hep.21669.

    CAS PubMed Google ученый

  • 84.

    Kelleher TB, Mehta SH, Bhaskar R, Sulkowski M, Astemborski J, Thomas DL, Moore RE, Afdhal NH: Прогнозирование фиброза печени у пациентов с коинфекцией ВИЧ / ВГС с использованием маркеров сывороточного фиброза: индекс SHASTA. J Hepatology. 2005, 43 (1): 78-84. 10.1016 / j.jhep.2005.02.025.

    Google ученый

  • 85.

    Braden B, Faust D, Sarrazin U, Zeuzem S, Dietrich CF, Caspary WF, Sarrazin C: дыхательный тест с 13C-метацетином в качестве теста функции печени у пациентов с хронической инфекцией вируса гепатита C.Алимент Pharmacol Ther. 2005, 21 (2): 179-85. 10.1111 / j.1365-2036.2005.02317.x.

    CAS PubMed Google ученый

  • 86.

    Lalazar G, Pappo O, Hershcovici T, Hadjaj T., Shubi M, Ohana H, Hemed N, Ilan Y: непрерывный дыхательный тест с метацетином 13C для неинвазивной оценки внутрипеченочного воспаления и фиброза у пациентов с хронической инфекцией HCV. и нормальный АЛТ. J Viral Hepat. 2008, 15 (10): 716-728. 10.1111 / j.1365-2893.2008.01007.x.

    CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • 87.

    Patel K, Gordon SC, Jacobson I, Hezode C, Oh E, Smith KM, Pawlotsky JM, McHutchison JG: Оценка панели неинвазивных сывороточных маркеров для дифференциации легкого фиброза печени от умеренного до прогрессирующего. Больные хроническим гепатитом С. J Hepatol. 2004, 41: 935-942. 10.1016 / j.jhep.2004.08.008.

    CAS PubMed Google ученый

  • 88.

    Patel K, Nelson DR, Rockey DC, Afdhal NH, Smith KM, Oh E, Hettinger K, Vallee M, Dev A, Smith-Riggs M, McHutchison JG: Корреляция FIBROSpect II с гистологической и морфометрической оценкой фиброза печени при хроническом гепатит С. Клин Гастроэнтерол Гепатол. 2008, 6 (2): 242-247. 10.1016 / j.cgh.2007.11.009.

    PubMed Google ученый

  • 89.

    Росси Э., Адамс Л., Принс А., Булсара М., де Бур Б., Гарас Г., Маккуиллан Г., Спирс Д., Джеффри Г.: оценка биохимических маркеров FibroTest при оценке фиброза печени у пациентов с гепатитом С.Подтверждение Clin Chem. 2003, 49 (3): 450-454.

    CAS PubMed Google ученый

  • 90.

    Imbert-Bismut F, Messous D, Thibault V, Myers RB, Piton A, Thabut D, Devers L, Hainque B, Mercadier A, Poynard T: Внутрилабораторная аналитическая изменчивость биохимических маркеров фиброза (Fibrotest ), активности (Actitest) и референсных диапазонов у здоровых доноров крови. Clin Chem Lab Med. 2004, 42 (3): 323-333. 10.1515 / CCLM.2004.058.

    CAS PubMed Google ученый

  • 91.

    Friedrich-Rust M, Rosenberg W, Parkes J, Herrmann E, Zeuzem S, Sarrazin C: Сравнение ELF, FibroTest и FibroScan для неинвазивной оценки фиброза печени. BMC Gastroenterology. 2010, 10: 103-10.1186 / 1471-230X-10-103.

    PubMed PubMed Central Google ученый

  • 92.

    Koda M, Matunaga Y, Kawakami M, Kishimoto Y, Suou T., Murawaki Y: FibroIndex, практический индекс для прогнозирования значительного фиброза у пациентов с хроническим гепатитом C.Гепатология. 2007, 45: 297-306. 10.1002 / hep.21520.

    PubMed Google ученый

  • 93.

    Sebastiani G, Vario A, Guido M, Alberti A: Эффективность неинвазивных маркеров фиброза печени снижается при хроническом гепатите C с нормальными трансаминазами. J Viral Hepat. 2008, 15 (3): 212-218.

    CAS PubMed Google ученый

  • 94.

    Pilette C, Rousselet MC, Bedossa P, Chappard D, Oberti F, Rifflet H и др.: Гистопатологическая оценка фиброза печени: количественный анализ изображений против полуколичественных оценок.Сравнение с маркерами сыворотки. J Hepatol. 1998, 28: 439-446. 10.1016 / S0168-8278 (98) 80318-8.

    CAS PubMed Google ученый

  • 95.

    Cales P, Boursier J, Oberti F, Hubert I, Gallois Y, Rousselet MC, Dib N, Moal V, Macchi L, Chevailler A, Michalak S, Hunault G, Chaigneau J, Sawadogo A, Lunel F. : FibroMeters: семейство анализов крови на фиброз печени. Гастроэнтерол Clin Biol. 2008, 32 (6 Приложение 1): 40-51.

    CAS PubMed Google ученый

  • 96.

    Angulo P, Hui JM, Marchesini G, Bugianesi E, George J, Farrell GC, Enders F, Saksena S, Burt AD, Bida JP, Lindor K, Sanderson SO, Lenzi M, Adams LA, Kench J, Therneau TM, Day CP: Оценка фиброза НАЖБП: неинвазивная система, позволяющая выявлять фиброз печени у пациентов с НАЖБП. Гепатология. 2007, 45: 846-854. 10.1002 / hep.21496.

    CAS PubMed Google ученый

  • 97.

    Rosenberg WM, Voelker M, Thiel R, Becka M, Burt A, Schuppan D, Hubscher S, Roskams T., Pinzani M, Arthur MJ, European Liver Fibrosis Group: Сывороточные маркеры обнаруживают наличие фиброза печени: когортное исследование.Гастроэнтерология. 2004, 127: 1704-1713. 10.1053 / j.gastro.2004.08.052.

    PubMed Google ученый

  • 98.

    Guha IN, Parkes J, Roderick P, Chattopadhyay D, Cross R, Harris S, Kaye P, Burt AD, Ryder SD, Aithal GP, Day CP, Rosenberg WM: неинвазивные маркеры фиброза в неинвазивных -алкогольная жировая болезнь печени: проверка Европейской панели по фиброзу печени и изучение простых маркеров. Гепатология. 2008, 47 (2): 455-460.

    PubMed Google ученый

  • 99.

    Callewaert N, Vlierberghe HV, Hecke AV, Laroy W., Delanghe J, Contreras R: Неинвазивная диагностика цирроза печени с использованием гликомики общего сывороточного белка на основе секвенатора ДНК. Природная медицина. 2004, 10: 429-434. 10,1038 / нм1006.

    CAS PubMed Google ученый

  • 100.

    Бломм Б., Ван Стинкисте С, Каллеварт Н., Ван Влиерберг Х. Изменение гликозилирования белков при заболеваниях печени. J Hepatol. 2009, 50 (3): 592-603. 10.1016 / j.jhep.2008.12.010.

    CAS PubMed Google ученый

  • 101.

    Юноси З.М., Баранова А., Степанова М., Пейдж С., Калверт В.С., Афенди А., Гудман З., Чандхок В., Лиотта Л., Петрикоин Е: фосфопротеомные биомаркеры, позволяющие прогнозировать гистологический неалкогольный стеатогепатит и фиброз. J Proteome Res. 2010, 9 (6): 3218-24. 10.1021 / pr100069e.

    CAS PubMed Google ученый

  • 102.

    Себастьяни Г., Варио А., Гвидо М., Новента Ф, Плебани М., Пистис Р., Феррари А., Альберти А. Пошаговые алгоритмы комбинирования неинвазивных маркеров для диагностики значительного фиброза при хроническом гепатите С. J Hepatol. 2006, 44 (4): 686-93. 10.1016 / j.jhep.2006.01.007.

    CAS PubMed Google ученый

  • 103.

    Sebastiani G, Halfon P, Castera L, Pol S, Thomas DL, Mangia A, Di Marco V, Pirisi M, Voiculescu M, Guido M, Bourliere M, Noventa F, Alberti A: БЕЗОПАСНАЯ биопсия: a валидированный метод крупномасштабного определения стадии фиброза печени при хроническом гепатите С.Гепатология. 2009, 49 (6): 1821-7. 10.1002 / hep.22859.

    PubMed Google ученый

  • Границы | Гетерологичная иммунизация вакцинами с определенной РНК и субъединицей усиливает Т-клеточные ответы, защищающие от Leishmania donovani

    Введение

    Очень важно, чтобы мы разработали эффективные меры по противодействию инфекционным агентам, которые продолжают появляться (1). Технология РНК-вакцины продемонстрировала свою способность вызывать ответные реакции антител и, таким образом, способность вызывать быстрые ответы на несколько возникающих патогенов (2–5).Относительная простота в разработке и производстве вакцин на основе нуклеиновых кислот также предполагает потенциал для недорогого и отчасти генерического производства, и для некоторых целей были разработаны надежные производственные процессы (4). Среди стратегий, используемых для усиления иммуногенной природы вакцин с нуклеиновыми кислотами, была адаптация вектора нуклеиновой кислоты для обеспечения нацеливания на врожденную иммунную систему для усиления последующих адаптивных ответов и манипулирование системами доставки для обеспечения эффективной трансфекции клеток-хозяев in vivo .Хотя вирусные векторы, такие как конструкции на основе альфа- и лентивирусов, также сильно активируют Т-клетки, меньше известно о том, как технология РНК-вакцины может быть использована для индукции и характеристики Т-клеточных ответов против внутриклеточных патогенов.

    Leishmania donovani - важный патоген для человека, который может проявляться висцеральным лейшманиозом (ВЛ). Подсчитано, что до 90% людей, инфицированных L. donovani , остаются в бессимптомном состоянии с эффективным антигенспецифическим Т-клеточным ответом, имеющим решающее значение для сдерживания инфекции и предотвращения перехода к ВН (6).Экспериментальная инфекция мышей Leishmania расширила наши представления о вспомогательных Т-клетках во время инфекции и позволила разделить парадигму Th2 / Th3 (7–9). Кроме того, поскольку защита обеспечивается клетками Th2 в устойчивых штаммах, а чувствительность индуцируется клетками Th3 в чувствительных штаммах, эти модели выявили генетические механизмы, участвующие в развитии заболевания (7, 10–12). Эти экспериментальные данные весьма актуальны, поскольку CD4-Т-клетки бессимптомных инфицированных индивидуумов продуцируют IFNγ в клетке L.donovani антиген-специфическим образом (13–20). Также есть доказательства того, что взаимодействие с CD8 Т-клетками также может участвовать в защите как в экспериментальных, так и в физиологических ситуациях (17, 21, 22). Учитывая, что они хорошо описаны, модели инфекции Leishmania представляют собой контролируемые экспериментальные системы для оценки вакцин, индуцирующих Т-клетки (23). На сегодняшний день мы произвели несколько определенных субъединичных вакцин, состоящих из рекомбинантных слитых белков, соответствующим образом составленных с адъювантом, которые вызывают защитные Th2-ответы (24–26).

    Учитывая важность антигенспецифических Т-клеток в борьбе с несколькими возникающими инфекционными заболеваниями, мы решили использовать слитые белки LEISH-F2 и LEISH-F3 + в качестве известных антигенных мишеней, чтобы определить, можем ли мы быстро произвести вакцины-кандидаты, способные повышать защитные свойства организма. Ответы Т-клеток. Мы разработали РНК-репликон на основе альфавируса, экспрессирующий гены F2 и F3 + (F2-РНК и F3 + РНК, соответственно), а затем оценили их способность дополнять активность определенной субъединицы (рекомбинантный белок с глюкопиранозиллипидом A второго поколения в стабильной маслосодержащей среде). -водная эмульсия; SLA-SE) вакцины для быстрого и сильного образования антиген-специфических Т-клеточных ответов.

    Материалы и методы

    Репликон РНК

    Плазмида, кодирующая 5 'и 3' нетранслируемые области и неструктурные гены штамма TC-83 вируса венесуэльского конского энцефалита (VEEV), была использована в качестве основы репликона, как описано ранее (27). Последовательности генов для конструкций LEISH-F2 и LEISH-F3 + были оптимизированы по кодонам, синтезированы и клонированы в вектор pUC57 по сайтам NotI и SphI с помощью Genscript (Piscataway, NJ). Лиофилизированную ДНК восстанавливали в дистиллированной воде и расщепляли NotI-SphI, затем клонировали в репликон Tc83.ДНК репликона линеаризовали ферментативным расщеплением сначала NotI, затем протеиназой K, с последующей обработкой фенолом хлороформом и осаждением этанолом. Плазмиду транскрибировали с использованием набора для транскрипции MEGAscript ® T7 (Invitrogen, Carlsbad, CA) с последующим кэппированием системой NEB Vaccinia Capping System. Экспрессию вставки подтверждали вестерн-блоттингом. Вкратце, 2 мкл клеточного лизата загружали и обрабатывали трис-глициновым гелем, а затем переносили на нитроцеллюлозную бумагу. Перенесенную нитроцеллюлозную бумагу затем инкубировали с кроличьей сывороткой против F2 в 5% сухом молочном фосфатно-солевом буферном растворе - Твин (PBST) с последующим обнаружением с использованием козьего антикроличьего IgG (Southern Biotech, Birmingham, AL 4050-05).

    Стимуляция клеток

    HEK293-Blue-TLR2, -TLR3, -TLR4, -TLR7 или нулевые клетки (все из InvivoGen, Сан-Диего, Калифорния) поддерживали в среде для культивирования клеток DMEM + GlutaMax, содержащей 10% FCS, 1% пенициллин и стрептомицин 50. мкг / мл неомицина и селективные антибиотики (HEK-Blue ™ Selection, Blasticidin или Zeocin; InvivoGen). Клетки не обрабатывали или обрабатывали смесью Lipofectamine ™ 3000 (Invitrogen) и F2 или контрольными конструкциями РНК. Для стимуляции клетки высевали в 96-луночные планшеты в концентрации 2.5–5 × 10 5 клеток на мл в среде для обнаружения HEK-Blue ™ (InvivoGen), затем инкубируют с соответствующими агонистами TLR. Активация индуцировала экспрессию SEAP (секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы), и ее измеряли спектрофотометрически при OD650 нм.

    Мыши

    Самок мышей C57BL / 6 (приобретенных в Charles River Laboratories, Уилмингтон, Массачусетс) и TLR7 - / - (приобретенных в Jackson Laboratories, Бар-Харбор, Мэн) содержали в определенных условиях, свободных от патогенов, и в соответствии с процедурами для животных, утвержденными Комитет IDRI по уходу за животными и их использованию.Мыши начали эксперименты в возрасте 6-8 недель.

    Анализ дренирующих лимфатических узлов

    Мышам вводили 20 мкл вакцины в икроножную мышцу. РНК-вакцина была приготовлена ​​таким образом, чтобы обеспечить общую дозу 10 мкг. SLA-SE вводили в дозе 5 мкг на инъекцию, чтобы служить положительным контролем иммунной активации. В разное время после инъекции дренирующий лимфатический узел вырезали и готовили суспензии единичных клеток. Мононуклеарные клетки подсчитывали с использованием анализа ViaCount с системой PCA (Guava Technologies, Hayward, CA).

    Прививки

    Мышей иммунизировали путем внутримышечной инъекции вакцины в бедро.

    Рекомбинантные слитые белки LEISH-F2 и LEISH-F3 + были сконструированы путем выравнивания последовательностей отдельных генов в виде единого продукта, который затем был клонирован и экспрессирован в E. coli , как описано ранее (28, 29). Фракции очищенного аффинно белка анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и количественно определяли с помощью анализа белка BCA (Pierce, Rockford, IL).Уровни эндотоксина измеряли с помощью анализа Limulus Amebocyte Lysate QCL-1000 (Lonza Inc., Базель, Швейцария), и каждый из них был <100 EU / мг белка. Рекомбинантная антиген-содержащая вакцина (F2 или F3 + с SLA-SE) была приготовлена ​​для обеспечения всего 5 мкг белка и 5 мкг SLA на инъекцию. Предполагаемое компактное связывание SLA с TLR4, по-видимому, приводит к профилю цитокинов, более напоминающему TRIF-зависимую передачу сигналов по сравнению с альтернативным TLR4L глюкопиранозиллипидным адъювантом (GLA) (30). Были приготовлены конструкции РНК, чтобы обеспечить общую дозу 10 мкг.Каждая вакцина доставлялась в общем объеме 100 мкл, разделенном до объема 50 мкл на каждое бедро. Гомологичные и гетерологичные схемы первичной бустерной иммунизации с этими двумя вакцинами включали событие прайминга, за которым через 3 недели следовала бустерная иммунизация.

    Ответы антиген-специфических антител

    Кровь была взята из ретро-глазничной пазухи и подготовлена ​​сыворотка. Антиген-специфические ответы IgG выявляли с помощью иммуноферментного анализа (ELISA). Вкратце, планшеты для ELISA (Nunc, Rochester, NY) были покрыты 1 мкг / мл антигена в 0.1 М бикарбонатного буфера и блокировали 0,1% BSA-PBS. Затем, в последовательном порядке и после промывок в PBS / Tween, серийно разведенных образцов сыворотки, антител к мышиным IgG-HRP (Southern Biotech, Бирмингем, AL) и ABTS-H 2 O 2 (Kirkegaard and Perry Laboratories, Gaithersburg , MD). Планшеты анализировали при 405 нм (EL X 808, Bio-Tek Instruments Inc, Winooski, VT). Конечный титр определяли как последнее значение оптической плотности (OD), превышающее пороговое значение, определенное сыворотками от контрольных мышей, иммунизированных физиологическим раствором.

    Секреция антиген-специфических цитокинов

    Селезенки удаляли через 4 недели после последней иммунизации и получали суспензии единичных клеток. Клетки культивировали в количестве 2 × 10 5 клеток на лунку в двух экземплярах в 96-луночном планшете (Corning Incorporated, Corning, NY) в RPMI-1640 с добавлением 5% термоинактивированной FCS и 50000 единиц пенициллина / стрептомицина (Invitrogen). . Антиген-специфический ответ на возврат определяли путем инкубации клеток с 10 мкг / мл рекомбинантного белка или пептидов, ограниченных MHCI, в течение 3 дней перед сбором культурального супернатанта.Содержание цитокинов (IL-5 и IFNγ) в супернатанте измеряли с помощью ELISA в соответствии с инструкциями производителей (eBioscience, Inc., Сан-Диего, Калифорния).

    Проточная цитометрия

    Для определения состава иммунных клеток дренирующих лимфатических узлов (DLN) были приготовлены суспензии отдельных клеток и инкубированы с блоком рецептора Fc (clone2.4G2) перед инкубацией при комнатной температуре в течение 30 минут со следующими антителами: анти-CD4 (клон RM4 -5), анти-CD8a-FITC (клон 53-6.7), анти-CD11b (клон M1 / ​​70), анти-CD11c (клон N418), анти-CD19 (клон 1D3), анти-F4 / 80 (клон BM8 ) и анти-Ly6G (клон 1A8).Экспрессию выбранных поверхностных молекул определяли путем инкубации с анти-CD69 (клон h2.2F3) и анти-CD80 (клон 16-10A1). Антитела были приобретены у BD Biosciences, eBioscience, BioLegend или Tonbo Biosciences.

    Антиген-специфические Т-клеточные ответы памяти, вызванные вакцинацией, определяли после инкубации клеток селезенки с 10 мкг / мл рекомбинантного белка F2. Клетки культивировали в количестве 1 × 10 6 клеток на лунку в двух экземплярах в 96-луночном планшете (Corning Incorporated, Corning, NY) в RPMI-1,640 с добавлением 5% термоинактивированной FCS и 50000 единиц пенициллина / стрептомицина (Invitrogen). в течение 18–20 ч в присутствии GolgiStop (BD Bioscience).Каждый образец инкубировали с блоком рецептора Fc (клон 2,4G2) перед инкубацией при комнатной температуре в течение 30 мин со следующими антителами: анти-CD4 (клон RM4-5), анти-CD8a-FITC (клон 53-6,7) и анти-CD4. -CD44 (клон IM7). Экспрессию выбранных цитокинов определяли путем инкубации с анти-IFNγ (клон XMG1.2), анти-IL-2 (клон JES6-5h5), анти-CD154 (клон МРТ), анти-TNFα (клон MP6-XT22), анти-IL-2. -IL-5 (клон TRFK5) и анти-гранзим B (NGZB). Антитела были приобретены у BD Biosciences, eBioscience, BioLegend или Tonbo Biosciences.Данные были получены с помощью Fortessa (BD Biosciences) и проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo (FlowJo, LLC).

    Leishmania Вызов мышей

    Мышей инфицировали инъекцией 1 × 10 6 L. donovani (MHOM / SD / 00 / 1S-2D) в ретроорбитальный синус. Через четыре недели печень собирали и гомогенизировали. ДНК экстрагировали из гомогената с использованием мини-наборов QIAmp DNA (Qiagen) и количественно определяли с помощью спектрофотометра Nanodrop UV-Vis (ND-1000). Л.ДНК donovani затем была обнаружена с помощью ПЦР в реальном времени с использованием праймеров для L42486 (прямой, 5'-GCGACGTCCGTGGAAAGAA-3 '; и обратный, 5'-GGCGGGTACACATTAGCAGAA-3') с репортерной последовательностью FAM (5'- CAACGCG'TATTCCC-3 который обнаруживает область геномного повтора длиной 203 п.н., специфичную для видов Leishmania (NCBI Blastn). Mouse Gapdh FAM (Life Technologies) использовали в качестве внутреннего эталонного контроля. Количество паразитов на мкл ДНК определяли путем экстраполяции точек пересечения (Cps) каждого образца на стандартную кривую, построенную для известных количеств паразитов, а затем нагрузки, выраженные как паразитов на орган.

    Статистический анализ

    Статистический анализ проводился с использованием одностороннего дисперсионного анализа и критериев множественного сравнения Даннета или Тьюки, используемых для сравнения двух групп. Статистическую значимость считали, когда значения p были <0,05.

    Результаты

    РНК F2 индуцирует транслокацию NF-κB через участие TLR7

    Чтобы определить, может ли F2-РНК способствовать активности через известные рецепторы врожденного иммунитета, клетки HEK293-Blue, экспрессирующие различные Toll-подобные рецепторы (TLR) человека, инкубировали с конструкцией РНК-вакцины.Единственным испытанным условием, которое вызывало индукцию SEAP под промотором IFN-β, слитым с сайтами связывания NF-κB и AP-1, было то, что F2-РНК инкубировали с клетками HEK293-TLR7, обработанными липофектамином ™ (рис. 1 и данные не показаны). Эти данные показывают, что РНК F2 может взаимодействовать с TLR7 внутри клетки, чтобы инициировать транскрипцию генов, регулируемых NF-κB.

    Рисунок 1 . Репликоны F2-РНК задействуют внутриклеточный TLR7. В (A) показаны схематические изображения репликонов F2-РНК и F3 + -РНК.В (B) клетки HEK293-Blue и HEK293-Blue, экспрессирующие TLR7 человека, инкубировали с имхимодом (IMQ), липофектамином или липофектамином и двумя разными прогонами продуцирования конструкции вакцины РНК F2 (rep1 и rep2). Экспрессию SEAP, индуцированную активацией, измеряли при OD650 нм. Данные были получены для каждого условия в трех повторностях и показаны в виде среднего и SE-кратного изменения для лунок, содержащих только среду.

    Ранняя иммунная активация после инокуляции F2-РНК

    Ранее мы продемонстрировали, что у мышей, получавших агонист TLR4 в стабильной эмульсии (SE), наблюдались поддающиеся измерению изменения в дренируемых лимфатических узлах, включая повышенную регуляцию маркеров ранней активации (31).Инъекция F2-РНК в икроножную мышцу аналогичным образом вызвала дозозависимое увеличение дренирующего лимфатического узла и измеримое увеличение числа клеток DLN через 24 и 48 часов после инъекции (фигура 2A и данные не показаны). Проточная цитометрия выявила повышающую регуляцию костимулирующей молекулы CD80 на CD11c + DC, а также инверсию отношения Т-клеток к В-клеткам в узле через 48 часов после инъекции (рисунки 2B, C). Большая часть B-клеток в DLN мышей, иммунизированных F2-РНК, экспрессировала CD69, хотя и на более низких уровнях, чем мыши, обработанные SLA-SE (фигура 2D).Как доля В-клеток, экспрессирующих CD69, так и уровень CD69 были максимальными через 24 часа после инъекции и со временем уменьшались (рисунки 2D, E). Таким образом, F2-РНК способна активировать врожденные иммунные ответы in vivo , создавая среду, способную индуцировать антиген-специфические Т-клеточные ответы.

    Рисунок 2 . Быстрая местная иммунная активация после инокуляции РНК-F2. Мышам C57BL / 6 вводили 20 мкл вакцины в икроножную мышцу. РНК-вакцина была приготовлена ​​таким образом, чтобы обеспечить общую дозу 10 мкг.SLA-SE вводили в дозе 5 мкг на инъекцию, чтобы служить положительным контролем иммунной активации. В разное время после инъекции дренирующий лимфатический узел вырезали, готовили суспензии единичных клеток и подсчитывали (A) . Клетки инкубировали с флуоресцентно мечеными антителами, затем подвергали проточной цитометрии для определения состояния активации (B) (экспрессия CD80) на клетках, экспрессирующих CD11c; (C) отношение Т-клеток (CD3) к В-клеткам (CD19); (D, E) Состояние активации (экспрессия CD69) на В-клетках, экспрессирующих CD19.Каждая точка отображает данные из одной выборки ( n = 5 на группу), в то время как горизонтальные и вертикальные полосы показывают среднее значение и SEM, соответственно. Данные представляют результаты, полученные в 2–3 независимых экспериментах. ns = не значимо, и * и ** = p -значение <0,05 и <0,01, соответственно, при сравнении указанной группы с контрольной группой, которой вводили физиологический раствор.

    Для оценки важности находки in vitro , указывающей на вовлечение TLR7, мы вводили физиологический раствор или F2-РНК мышам дикого типа и TLR7 - / -, а затем сравнивали последующие количества клеток DLN.Иммунизация вызвала значительное увеличение количества клеток в дренирующих лимфатических узлах от обоих генотипов мышей (рис. 3). При рассмотрении вместе с данными in vitro , полученными с нокаутированными клетками, эти данные in vivo показывают, что, хотя TLR7 участвует в ответе, он не является критическим для ранней иммунной активации вакциной F2-РНК.

    Рисунок 3 . Активация местного иммунитета после инокуляции РНК-F2 критически не зависит от TLR7.Мышам дикого типа и TLR7 - / - C57BL / 6 вводили 20 мкл вакцины в икроножную мышцу. РНК-вакцина была приготовлена ​​таким образом, чтобы обеспечить общую дозу 10 мкг. Через 24 часа после инъекции дренирующий лимфатический узел вырезали, готовили и подсчитывали суспензии отдельных клеток. Каждая точка отображает данные по одному животному, в то время как горизонтальные и вертикальные полосы показывают среднее значение и SEM, соответственно. Данные представляют результаты, полученные в 2-3 независимых экспериментах. нс, не значимо и ** p -значение <0.01, соответственно, при сравнении указанной группы с соответствующей контрольной группой, которой вводили физиологический раствор.

    Гетерологичные схемы иммунизации Prime-Boost генерируют сильную антиген-специфичную секрецию IFNγ

    Для сравнения способности F2-РНК и субъединичных вакцин вызывать иммунные ответы оценивали продукцию как антиген-специфических антител, так и цитокинов. Гомологичный прайм-буст с F2 + SLA-SE вызывал чрезвычайно высокий антиген-специфический ответ IgG (фиг. 4A). Это контрастировало с реакцией антител в сыворотке мышей, иммунизированных F2-РНК, которая обнаруживалась только при очень низких титрах (рис. 4А).Когда мышам вводили обе вакцины в схемах гетерологичного праймирования / повторной вакцинации, были обнаружены промежуточные уровни антиген-специфических антител на уровнях, которые, по существу, можно отнести к одной инокуляции F2 + SLA-SE (фигура 4A и данные не показаны). Точно так же однократная иммунизация смесью F2-РНК / F2 + SLA-SE вызывала ответы, эквивалентные только иммунизации F2 + SLA-SE.

    Рисунок 4 . Дихотомическая генерация гуморального и клеточного иммунитета субъединичными и РНК-вакцинами.Мышей C57BL / 6 иммунизировали указанным гомологичным или гетерологичным режимом вакцинации. Через четыре недели после иммунизации собирали кровь и готовили сыворотку, удаляли селезенки и готовили суспензии единичных клеток. В (A) величину антиген-специфического ответа F2 IgG определяли разбавлением каждого образца сыворотки в ELISA до получения отрицательных результатов. Каждая точка отображает данные из одной выборки ( n = 5 на группу), в то время как горизонтальные и вертикальные полосы показывают среднее значение и SEM, соответственно.Данные представляют результаты, полученные в 3 независимых экспериментах. Клетки селезенки инкубировали с белком F2, затем с помощью ELISA определяли концентрации (B), IFNγ или (C), IL-5 в супернатантах культур. Клетки также подвергали проточной цитометрии для определения относительной доли CD4 Т-клеток, одновременно продуцирующих (D), IFNγ и TNF или (E), IL-2 и CD154. Данные представлены в виде среднего значения и SEM, n = 3–5 на группу и являются репрезентативными для результатов, полученных в 3 независимых экспериментах.ns = не значимо, и * и ** = p -значение <0,05 и <0,01, соответственно, при сравнении указанной группы с контрольной группой, которой вводили физиологический раствор.

    Хотя большое количество IFNγ секретировалось клетками мышей, получивших гомологичную иммунизацию F2 + SLA-SE, это все еще было ниже, чем чрезвычайно высокие количества IFNγ, секретируемые клетками мышей, примированных F2-РНК, а затем повторно усиленных F2. + SLA-SE (Рисунок 4B). Измерение цитокинов, секретируемых клетками, инкубированными с белком F2, обычно указывает на преимущественную секрецию IFNγ по сравнению с IL-5 (Фигуры 4B, C).Взятые вместе, эти данные показывают, что, хотя режим праймирования F2-РНК, бустинг F2 + SLA-SE не изменял ответы антител, он действительно размножал мощные антигенспецифические Т-клетки CD4.

    Антиген-специфическая секреция IFNγ происходит как из CD4, так и из CD8 Т-клеток

    Для непосредственной оценки антиген-специфических Т-клеточных ответов, CD44 hi Т-клетки памяти CD4 были идентифицированы среди клеток селезенки после инкубации с антигеном F2. Активированные антиген-специфические клетки, на что указывает экспрессия CD154 (CD40L) и продукция IL-2, были индуцированы всеми режимами иммунизации (фигура 4E; все p -значение <0.05 по сравнению с физиологическим раствором). Гомологичный прайм-буст с F2 + SLA-SE генерировал более устойчивый ответ памяти Т-лимфоцитов CD4, чем гомологичный прайм-буст с F2-РНК, о чем свидетельствует большая доля клеток или продуцирующих IFNγ и TNF, или продуцирующих IL-2 и экспрессирующих CD154 ( Рисунки 4D, E). Стратегия гетерологичного прайм-бустинга, включающая прайминг с помощью F2-РНК с последующей имитацией белком и SLA-SE, генерировала значительную популяцию F2-специфичных CD4 Т-клеток, которая была намного больше, чем даже та, которая была индуцирована гомологичным прайм-бустом с F2 +. SLA-SE.Эти данные демонстрируют, что даже несмотря на то, что F2-РНК сама по себе не вызывала очень большой Т-клеточный ответ CD4, она сильно примировала клетки для стимулирования мощного Т-клеточного ответа CD4 при дальнейшей стимуляции F2 + SLA-SE.

    Чтобы расширить наблюдения, сделанные с вакцинами F2, мы иммунизировали мышей вакцинами, содержащими антиген F3 + (25). Инкубация клеток селезенки от мышей, которые были иммунизированы гомологичным первичным бустом с F3 + с SLA-SE или первичной гетерологичной РНК, протеин / адъювант, продуцировали клетки, которые секретировали IFNγ при инкубации с протеином (фиг. 5A).Учитывая, что мы определили эпитопы, ограниченные MHCI, в LEISH-F3 +, эти вакцины также позволили нам оценить, могут ли генерироваться антиген-специфические CD8 Т-клетки. Клетки мышей обеспечивали вакцины на основе РНК (либо гомологичным, либо гетерологичным образом), продуцирующим IFNγ в ответ на пептиды, представляющие эпитопы, ограниченные F3 + MHCI (фиг. 5B). Это контрастировало с клетками мышей, иммунизированных F3 + конструкцией SLA-SE, у которых не было продемонстрированного ответа (фигура 5B). Таким образом, в отличие от гомологичных схем, гетерологичный прайм с конструкцией РНК F3 + с последующим усилением белком F3 + с SLA-SE генерировал как устойчивый ответ памяти Т-клеток CD4, так и ответ Т-клеток CD8.

    Рисунок 5 . Дифференциальная генерация CD4- и CD8-Т-клеточных ответов субъединичными и РНК-вакцинами. Мышей C57BL / 6 иммунизировали указанным гомологичным или гетерологичным режимом вакцинации, включающей антиген или последовательность LEISH-F3 +. Через четыре недели после иммунизации селезенки удаляли и готовили суспензии единичных клеток. Клетки селезенки инкубировали с белком (A), F3 + или (B), , пулом пептидов, ограниченных MHCI, полученных из F3 +. Концентрацию IFNγ в культуральных супернатантах определяли с помощью ELISA.Данные представлены в виде среднего значения и SEM, n = 5 на группу, и являются репрезентативными для результатов, полученных в 3 независимых экспериментах. ns = несущественно и ** = p -значение <0,01, соответственно, при сравнении указанной группы с контрольной группой, которой вводили физиологический раствор. $ = p - значение <0,05 при сравнении указанной группы против F3 + с группой, иммунизированной SLA-SE.

    Гетерологические схемы иммунизации Prime-Boost создают защиту от экспериментального

    L.donovani Инфекция

    Продемонстрировав, что гетерологичные стратегии с использованием F2-РНК и F2 + SLA-SE вызывают сочетание антиген-специфических CD4- и CD8-Т-клеточных ответов, мы оценили, могут ли эти ответы защитить от инфекции L. donovani . Гомологичная (всего две) иммунизация либо F2 + SLA-SE, либо F2-РНК не приводила к значительному снижению количества паразитов в печени у мышей, инфицированных L. donovani (фиг. 6). Однако количество паразитов было значительно снижено у мышей, которые были иммунизированы режимом буст-бустинга гетерологичной F2-РНК / F2 + SLA-SE (фиг.6, p -value = 0.015). Таким образом, укороченные схемы иммунизации, которые включали РНК-вакцину, вызывали ответы, которые были достаточно мощными для защиты от инфекции внутриклеточным паразитом.

    Рисунок 6 . Защита от инфекции L. donovani с помощью схемы гетерологичной иммунизации первичной буст-иммунизации. Мышей C57BL / 6 иммунизировали указанным гомологичным или гетерологичным режимом введения F2-содержащих вакцин. Мышей инфицировали внутривенной инокуляцией паразитов L. donovani через 4 недели после их последней или единственной иммунизации.Через четыре недели после заражения удаляли печень и определяли количество паразитов для каждого животного с помощью ПЦР. Данные представлены в виде среднего значения и SEM, n = 7 на группу. * = p - значение <0,05 при сравнении указанной группы с контрольной группой, которой вводили физиологический раствор.

    Обсуждение

    Перед лицом новых инфекционных заболеваний и патогенов, устойчивых к лекарствам, обычно предпочтительны вакцины, которые могут быстро вызывать защитные реакции. Очень важно разработать быстрые и масштабные процедуры производства таких вакцин.В качестве доказательства концепции быстрого создания вакцины, обеспечивающей защиту через Т-клетки, мы создали РНК F2 с целью защиты от инфекции L. donovani . Встраивание гена F2 в репликон альфавируса создало РНК F2, которая индуцировала врожденные ответы посредством вовлечения внутриклеточного TLR7 и способствовала локальным иммунным ответам с активацией APC. В то время как иммунизация только РНК F2 вызвала только небольшую популяцию антиген-специфических клеток Th2, схема гетерологической иммунизации, включающая праймирование РНК F2 с последующей бустинг-вакциной LEISH-F2 + SLA-SE (рекомбинантный антиген / синтетический адъювант), привела к чрезвычайно высокому результату. мощные ответы Th2 и секреция IFNγ.

    С момента их первоначального зачатия, имитируя иммунизацию живой вакциной, вакцины на основе нуклеиновых кислот, доставляемые вирусным путем, например, с вирусными частицами репликона или аналогичными системами, обещали быть эффективным способом индукции Т-клеточного иммунитета. В частности, вирусная доставка РНК репликона, происходящей из рода альфавирусов, продемонстрировала мощные Т-клеточные ответы CD8 (32). Однако зависимость от вирусных белков, опосредующих доставку нуклеиновых кислот, индуцирует противовекторный иммунитет, что исключает повторное использование платформы по другим показаниям (33).Чтобы обойти эту проблему, мы сосредоточились на иммунизации репликоном голой РНК, полученным из вакцинного штамма альфавируса вируса венесуэльского энцефалита лошадей (VEEV), TC-83, который имеет долгую историю доклинических и, в последнее время, клинических разработок. (32, 34, 35).

    Клинические испытания продемонстрировали безопасность и переносимость вакцин на основе нуклеиновых кислот (36, 37). Относительная простота конструирования и производства вакцин на основе нуклеиновых кислот предполагает, что их можно производить недорого и в некоторой степени универсальным способом.Хотя мы не разработали РНК-вакцину против мишени de novo , основываясь на субъединичной вакцине с уже определенной мишенью, мы смогли использовать РНК-вакцину, производящую ту же мишень, для усиления иммунных ответов и снижения потребности в более чем две прививки. Связывание РНК и субъединичных вакцин в схеме гетерологичной первичной бустерной вакцинации вызывало чрезвычайно сильные ответы Т-лимфоцитов CD4, которые устраняли необходимость в множественной иммунизации субъединичной вакциной. Таким образом, наши данные предполагают, что в условиях, когда доступные количества определенной вакцины могут быть ограничены (т.е., пандемические вспышки), быстрое создание РНК-вакцины, кодирующей тот же антиген-мишень, можно было бы быстро создать как средство восполнения дефицита предложения.

    Интересно, что наши данные показывают, что иммунизация только РНК F2 вызывала иммунные ответы, качественно отличающиеся от субъединичной вакцины LEISH F2. Иммунизация субъединичной вакциной вызвала несколько более сильные ответы Th2 и гораздо более сильные ответы антител, чем иммунизация только РНК F2, которая вызвала низкие ответы Th2 и только очень слабые ответы антител.Эти данные указывают на важное влияние платформы продукции / презентации антигена на иммунитет и предполагают, что иммунизация «голой» РНК может использоваться для преимущественной индукции Т-клеточных ответов. Действительно, эксперименты с вакциной F3 + РНК позволили нам различить преимущественную индукцию антиген-специфичных ответов Т-лимфоцитов CD8. Необходимы долгосрочные эксперименты по иммунизации, чтобы определить, как долго сохраняются эти CD4- и CD8-Т-клеточные ответы. Сведение к минимуму образования антител может быть полезным в клинических или терапевтических ситуациях, когда иммунные комплексы могут вызывать осложнения.

    Наши данные демонстрируют, что, хотя и РНК, и субъединичные вакцины вызывали ранние изменения клеточного состава и состояния активации дренирующего лимфатического узла, были некоторые отличительные особенности. Хотя F2 + SLA-SE индуцировал у большинства клеток CD11c + повышенную регуляцию клеток CD80 и CD19 + для экспрессии высоких уровней CD69, эти изменения были индуцированы на более низких уровнях вследствие инъекции РНК F2. Напротив, РНК F2 вызывала более выраженное регулирование соотношения Т-клетки: В-клетки в дренирующем лимфатическом узле, чем F2 + SLA-SE.В настоящее время мы можем только предполагать, что эти ранние различия способствуют дихотомическим антиген-специфическим Т-клеточным ответам, вызываемым каждой вакциной. Представляется целесообразным дальнейшая оценка этих ранних событий и профилей цитокинов в дренирующем лимфатическом узле. Точно так же относительный вклад CD4 или CD8 Т-клеток в защиту от инфекции Leishmania можно определить путем дальнейших иммунных сравнений или использования мышей с дефицитом гена.

    На сегодняшний день ограничительной особенностью вакцин с голой РНК является их неутешительная эффективность, что указывает на необходимость усилий по повышению иммуногенности.Как и в других отчетах, посвященных изучению мРНК, наши данные показывают, что репликон РНК F2 задействует TLR7 для активации врожденных иммунных ответов (38, 39). Эта активация приводит к изменениям клеточного состава в локальном лимфатическом узле. Хорошо задокументировано, что передача сигналов TLR7 совместима с широким спектром врожденных рецепторов для усиления ответов, что предполагает возможность включения дополнительных агонистов для обеспечения аддитивного или синергетического воздействия на ответы Т-клеток (40). Это будет действовать аналогично повышению эффективности мРНК вакцины путем введения лиганда Flt3 или РНК, кодирующей GM-CSF (41, 42).Следует также отметить, что в нашем исследовании использовался репликон «голой» РНК (т. Е. Составленный только в физиологическом разбавителе), и в настоящее время проводится большое количество исследований по составлению РНК, чтобы защитить ее от разрушающих ферментов, а также для обеспечения ее доставки. через клеточную мембрану. Работа была сосредоточена на инкапсуляции в липосомы и комплексообразовании с катионными полимерами, чтобы защитить их от деградации и повысить клеточное поглощение (43, 44).

    В совокупности наши результаты демонстрируют быстрое производство РНК-вакцины и дополнительно указывают на полезность РНК-вакцин для стимулирования Т-клеточных ответов CD4.Этот процесс разработки имеет большое значение для быстрого предоставления вакцин, которые могут защитить от вновь появляющихся патогенов, для которых отсутствуют четкие стратегии лечения или контроля.

    Авторские взносы

    MD, NH, JE, DS и SR разработали эксперименты и внесли свой вклад в написание рукописей. ZM, RM, JE сконструировали репликоны РНК. ZM, AP, MD и F-CH проводили эксперименты по иммунизации и иммуноанализу. MD, NH, JE и F-CH провели анализ данных.

    Финансирование

    Эта работа финансировалась Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний Национальных институтов здравоохранения под номером R01AI025038 и Фондом Билла и Мелинды Гейтс в рамках гранта № 631 при дополнительной поддержке контракта NIH № HHSN272201600036C.Авторы несут полную ответственность за содержание, которое не обязательно отражает официальную точку зрения Национального института здравоохранения или Фонда Билла и Мелинды Гейтс.

    Заявление о конфликте интересов

    Стивен Рид и Малкольм Дути являются соавторами патента на разработку вакцины против лейшманиоза. Все остальные авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

    Благодарности

    Эта рукопись не была бы завершена без значительного вклада и вклада доктора Др.Дэн Стинчкомб перед смертью 21 февраля 2018 г.

    Сокращения

    APC, антигенпрезентирующая клетка; ELISA, иммуноферментный анализ; GLA, глюкопиранозил липидный адъювант; ИФН, интерферон; ИЛ, интерлейкинп; РНК, рибонуклеиновая кислота; SE, стабильная эмульсия; SLA; TLR, Toll-подобный рецептор; TNF, фактор некроза опухоли; VEEV, вирус венесуэльского конского энцефалита; ВЛ, висцеральный лейшманиоз.

    Список литературы

    2. Парди Н., Хоган М.Дж., Пелк Р.С., Мурамацу Х., Андерсен Х., ДеМасо С.Р. и др.Защита от вируса Зика с помощью однократной вакцинации малой дозой модифицированной нуклеозидами мРНК. Nature (2017) 543: 248–51. DOI: 10.1038 / nature21428

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    3. Ричнер Дж. М., Химансу С., Дауд К. А., Батлер С. Л., Салазар В., Фокс Дж. М. и др. Вакцины с модифицированной мРНК защищают от заражения вирусом Зика. Cell (2017) 168: 1114–25 e1110. DOI: 10.1016 / j.cell.2017.02.017

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    4.Бетанкур Д., де Кейроз Н.М., Ся Т., Ан Дж., Барбер Г.Н. Передний край: вирус везикулярного стоматита, усиливающий врожденный иммунитет, экспрессирующий белки вируса Зика, обеспечивает защитный иммунитет. Дж. Иммунол . (2017) 198: 3023–28. DOI: 10.4049 / jimmunol.1602180

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    5. Хекеле А., Бертолет С., Арчер Дж., Гибсон Д.Г., Палладино Дж., Брито Л.А. и др. Быстро производимая вакцина SAM ((R)) против гриппа H7N9 является иммуногенной для мышей. Emerg Microbes Infect .(2013) 2: e52. DOI: 10.1038 / emi.2013.54

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    6. Блэквелл Дж. М., Факиола М., Ибрагим М. Е., Джеймисон С. Е., Джеронимо С. Б., Миллер Э. Н. и др. Генетика и висцеральный лейшманиоз: мышей и человека. Parasite Immunol . (2009) 31: 254–266. DOI: 10.1111 / j.1365-3024.2009.01102.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    8. Локсли Р.М., Скотт П. Подмножества Т-хелперных Т-клеток при лейшманиозе мышей: индукция, экспансия и эффекторная функция. Immunol Today (1991) 12: A58–61. DOI: 10.1016 / S0167-5699 (05) 80017-9

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    9. Скотт П. Факторы хозяина и паразитов, регулирующие развитие субпопуляций CD4 + Т-клеток при экспериментальном кожном лейшманиозе. Рес Иммунол . (1991) 142: 32–6. DOI: 10.1016 / 0923-2494 (91) -7

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    11. Scharton-Kersten T, Afonso LC, Wysocka M, Trinchieri G, Scott P.IL-12 необходим для активации естественных клеток-киллеров и последующего развития Т-хелперных клеток 1 при экспериментальном лейшманиозе. Дж. Иммунол . (1995) 154: 5320–30.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    12. Хатчинс А.С., Артис Д., Хендрих Б.Д., Берд А.П., Скотт П., Райнер С.Л. Передний край: критическая роль сайленсинга генов в предотвращении чрезмерного иммунитета типа 1. Дж. Иммунол . (2005) 175: 5606–10. DOI: 10.4049 / jimmunol.175.9.5606

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15.Карвалью Е.М., Баселлар О., Браунелл К., Регис Т., Коффман Р.Л., Рид С.Г. Восстановление продукции IFN-гамма и пролиферации лимфоцитов при висцеральном лейшманиозе. Дж. Иммунол . (1994) 152: 5949–56.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    16. Верма С., Кумар Р., Катара Г.К., Сингх Л.С., Неги Н.С., Рамеш В. и др. Количественная оценка паразитарной нагрузки в клинических образцах больных лейшманиозом: уровень ИЛ-10 коррелирует с паразитарной нагрузкой при висцеральном лейшманиозе. PLoS ONE (2010) 5: e10107.DOI: 10.1371 / journal.pone.0010107

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    19. Кумар Р., Сингх Н., Гаутам С., Сингх О.П., Гидвани К., Рай М. и др. Т-лимфоциты CD4, специфичные для лейшмании, выделяют IFN-гамма, который ограничивает репликацию паразитов у пациентов с висцеральным лейшманиозом. PLoS Negl Trop Dis . (2014) 8: e3198. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0003198

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    20. Карвалью Е.М., Бадаро Р., Рид С.Г., Джонс Т.К., Джонсон В.Д. мл.Отсутствие продукции гамма-интерферона и интерлейкина 2 при активном висцеральном лейшманиозе. Дж. Клин Инвест . (1985) 76: 2066–9.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    21. Kaushal H, Bras-Goncalves R, Negi NS, Lemesre JL, Papierok G, Salotra P. Роль CD8 (+) T-клеток в защите от инфекции Leishmania donovani у излеченных лиц с висцеральным лейшманиозом. BMC Infect Dis . (2014) 14: 653. DOI: 10.1186 / s12879-014-0653-6

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    23.Шер А., Газзинелли Р. Т., Освальд И. П., Клеричи М., Куллберг М., Пирс Э. Дж. И др. Роль цитокинов, полученных из Т-клеток, в подавлении иммунных ответов при паразитарных и ретровирусных инфекциях. Immunol Rev. (1992) 127: 183–204. DOI: 10.1111 / j.1600-065X.1992.tb01414.x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Бертолет С., Гото Ю., Картер Л., Бхатиа А., Ховард Р.Ф., Картер Д. и др. Оптимизированная субъединичная вакцина защищает от экспериментального лейшманиоза. Vaccine (2009) 27: 7036–45. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2009.09.066

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    25. Колер Р.Н., Дати М.С., Хофмайер К.А., Гудериан Дж., Джаяшанкар Л., Вергара Дж. И др. От мыши к человеку: безопасность, иммуногенность и эффективность кандидатной вакцины против лейшманиоза LEISH-F3 + GLA-SE. Clin Transl Immunol. (2015) 4: e35. DOI: 10.1038 / cti.2015.6

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26.Дати М.С., Перейра Л., Фавила М., Хофмейер К.А., Рид С.Дж., Метангмо С. и др. Вакцина с определенной субъединицей, которая защищает от трансмиссивного висцерального лейшманиоза. Вакцины NPJ (2017) 2:23. DOI: 10.1038 / s41541-017-0025-5

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    27. Эразмус Дж., Кхандхар А., Гудериан Дж., Грейнджер Б., Арчер Дж., Арчер М. и др. Наноструктурированный липидный носитель для доставки реплицирующейся вирусной РНК обеспечивает однократную защиту от вируса Зика в малых дозах. Mol Ther. (2018) 26: 1–16. DOI: 10.1016 / j.ymthe.2018.07.010

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28. Дути М.С., Гото В., Иретон Г.С., Рис С.Т., Кардосо Л.П., Мартелли С.М. и др. Использование белковых антигенов для ранней серологической диагностики лепры. Clin Vaccine Immunol. (2007) 14: 1400–8. DOI: 10.1128 / CVI.00299-07

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    29. Duthie MS, Goto W., Ireton GC, Reece ST, Sampaio LH, Grassi AB, et al.Антиген-специфические Т-клеточные ответы больных лепрой. Clin Vaccine Immunol. (2008) 15: 1659–65. DOI: 10.1128 / CVI.00234-08

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30. Картер Д., Фокс С. Б., Дэй Т. А., Гудериан Дж. А., Лян Х., Рольф Т. и др. Структурно-функциональный подход к оптимизации лигандов TLR4 для вакцин для человека. Клин Транс Иммунол . (2016) 5: e108. DOI: 10.1038 / cti.2016.63

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    31.Desbien AL, Reed SJ, Bailor HR, Dubois Cauwelaert N, Laurance JD, Orr MT, et al. Эмульсия сквалена усиливает адъювантную активность агониста TLR4, GLA, через воспалительные каспазы, IL-18 и IFN-гамма. Eur J Immunol. (2015) 45: 407–17. DOI: 10.1002 / eji.201444543

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Strauss JH, Strauss EG. Альфавирусы: экспрессия, репликация и эволюция генов. Microbiol Rev. (1994) 58: 491–562.

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    35. Аташева С., Ким Д. Ю., Ахрымук М., Морган Д. Г., Фролова Е. И., Фролов И. Вирус псевдоинфекционного венесуэльского энцефалита лошадей: новое средство ослабления альфавирусов. J Virol. (2013) 87: 2023–35. DOI: 10.1128 / JVI.02881-12

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    36. Ферраро Б., Морроу М.П., ​​Хатник Н.А., Шин Т.Х., Лакке С.Е., Вайнер Д.Б. Клиническое применение ДНК-вакцин: текущий прогресс. Clin Infect Dis . (2011) 53: 296–302. DOI: 10.1093 / cid / cir334

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    37. Alberer M, Gnad-Vogt U, Hong HS, Mehr KT, Backert L, Finak G, et al. Безопасность и иммуногенность мРНК вакцины против бешенства у здоровых взрослых: открытое, нерандомизированное, проспективное, первое клиническое испытание фазы 1 с участием людей. Ланцет (2017). DOI: 10.1016 / S0140-6736 (17) 31665-3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    38.Fotin-Mleczek M, Duchardt KM, Lorenz C, Pfeiffer R, Ojkic-Zrna S, Probst J, et al. Вакцины на основе матричной РНК с двойной активностью вызывают сбалансированные TLR-7-зависимые адаптивные иммунные ответы и обеспечивают противоопухолевую активность. Дж. Иммунодер . (2011) 34: 1–15. DOI: 10.1097 / CJI.0b013e3181f7dbe8

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    39. Шил Б., Тойфель Р., Пробст Дж., Карралот Дж. П., Гегинат Дж., Радсак М. и др. Зависимая от толл-подобных рецепторов активация нескольких типов клеток крови человека с помощью протамин-конденсированной мРНК. Eur J Immunol . (2005) 35: 1557–66. DOI: 10.1002 / eji.200425656

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    40. Fox CB, Sivananthan SJ, Duthie MS, Vergara J, Guderian JA, Moon E, et al. Система доставки нанолипосом для синергического запуска TLR4 И TLR7. Дж. Нанобиотехнология . (2014) 12:17. DOI: 10.1186 / 1477-3155-12-17

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    41. Крейтер С., Дикен М., Селми А., Петченка Дж., Туречи О., Сахин У.Лиганд FLT3 как молекулярный адъювант для вакцин с «голой» РНК. Методы Мол Биол . (2016) 1428: 163–75. DOI: 10.1007 / 978-1-4939-3625-0_11

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    42. Hess PR, Boczkowski D, Nair SK, Snyder D, Gilboa E. Вакцинация мРНК, кодирующей ассоциированные с опухолью антигены и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, эффективно запускает CTL-ответы, но недостаточна для преодоления толерантности к модельной опухоли / собственный антиген. Cancer Immunol Immunother. (2006) 55: 672–83. DOI: 10.1007 / s00262-005-0064-z

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    43. Гелл А.Дж., Верма А., Оттен Г.Р., Шоу Калифорния, Хекеле А., Банерджи К. и др. Невирусная доставка самоусиливающихся РНК-вакцин. Proc Natl Acad Sci USA. (2012) 109: 14604–9. DOI: 10.1073 / pnas.1209367109

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    44. Брито Л.А., Чан М., Шоу КА, Хекеле А., Карсилло Т., Шефер М. и др.Катионная наноэмульсия для доставки РНК-вакцин нового поколения. Mol Ther. (2014) 22: 2118–29. DOI: 10.1038 / mt.2014.133

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    % PDF-1.3 % 14163 0 объект > эндобдж xref 14163 49 0000000016 00000 н. 0000001359 00000 н. 0000001728 00000 н. 0000001882 00000 н. 0000009114 00000 п. 0000009612 00000 н. 0000010383 00000 п. 0000010617 00000 п. 0000011180 00000 п. 0000011613 00000 п. 0000011831 00000 п. 0000012063 00000 п. 0000012095 00000 п. 0000012140 00000 п. 0000012164 00000 п. 0000012690 00000 п. 0000012714 00000 п. 0000013079 00000 п. 0000013103 00000 п. 0000013346 00000 п..|, x-1RF] # nЂ $ KG - zb (Oa) Rѩl} u # L Ⱦq // xt] 0inDgn = Cy / 'r_NźuF ߘ §4 ~ ivd͔d "piYaźD ~ Rsg4d $ zj ~ ̇7 '} y.jSmql9RQY T% T + 6r \ U | R

    Трехмерная биопечать имплантатов с преваскуляризацией для восстановления костных дефектов критического размера

    Abstract

    Для масштабирования трехмерных биопечати тканей до клинически значимых размеров необходимы эффективные стратегии преваскуляризации. обеспечивают необходимые питательные вещества для нормального обмена веществ и удаления побочных продуктов жизнедеятельности. Целью этого исследования было разработать стратегию биопечати для создания преваскуляризированных тканей in vitro и изучить способность таких конструкций усиливать васкуляризацию и регенерацию крупных костных дефектов in vivo .На основе анализа различных биочувствительных элементов было обнаружено, что гидрогель на основе фибрина лучше всего поддерживает прорастание эндотелиальных клеток пупочной вены (HUVEC) и создание сети микрососудов. Когда этот биочувствительный элемент был объединен с HUVECs и поддерживающими стволовыми / стромальными клетками костного мозга человека (hBMSCs), эти сети микрососудов сохранялись in vitro . Кроме того, только ткани с биопринтом, содержащие как HUVEC, так и hBMSC, которым впервые позволили созреть in vitro , поддерживали устойчивое развитие кровеносных сосудов in vivo .Чтобы оценить терапевтическую ценность этой стратегии биопечати, эти биочернила были использованы для преваскуляризации 3D-печатных каркасов из поликапролактона (PCL), которые впоследствии были имплантированы в дефекты бедренной кости критического размера у крыс. Микрокомпьютерная томография (µCT) ангиография выявила повышенные уровни васкуляризации in vivo , что коррелировало с более высокими уровнями образования новой кости. Такие преваскуляризированные конструкции могут быть использованы для усиления васкуляризации ряда крупных тканевых дефектов, что составляет основу множества новых терапевтических средств с биопринтом.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    AUC 95% ДИ Отсечка (>) Чувствительность Специфичность Точность -П,
    MK Среднее значение 0.85 0,68–0,95 0,51 100 64 88 <.0001
    C90 0,87 0,70–0,955 9055 9055 9055 0,70–0,955 9055 9055 <.0001
    C95 0,86 0,69–0,95 0,79 67 91 75 <0,0001
    0,66–0,94 0,56 90 70 84 .0002
    C90 0,83 0,66–0,94 0,66–0,94 0,655 .0001
    C95 0,77 0,66–0,94 0,77 81 73 78 <.0001
    AK 0,67–0,95 0,56 90 64 81 <.0001
    18 F-FET PET TBR max 0,77 0,59–0,90 2,95 71 73 72 .003
    + MK C90 (взвешенный) 0,97 0,89–1,02 41 95 91 94 <.0001
    FET – DKI TBR max и MK C90 0,97 0,83–0,99 - - - 91