Где производится лада: Официальный сайт LADA

АВТОВАЗ

Группа АВТОВАЗ входит в состав Альянса Renault-Nissan-Mitsubishi и производит автомобили по полному циклу производства и автокомпоненты для четырех брендов: LADA, Renault, Nissan, Datsun. 

Президент АВТОВАЗа – Ив Каракатзанис.

История компании 

20 июля 1966 года вышло постановление правительства СССР о строительстве в городе Тольятти завода по выпуску 600 тысяч легковых автомобилей в год. Эта дата считается днем рождения Волжского автомобильного завода. 

Волжский автозавод был построен в рекордно короткие сроки: в 1967 году началось строительство, а в 1970 году появилась первая продукция – автомобили ВАЗ-2101, которые положили начало широко известной и популярной сегодня марке LADA.

Хронология:

1966 – принято правительственное постановление о строительстве в городе Тольятти автомобильного завода. Генеральным директором строящегося завода по производству легковых автомобилей назначен В.

Н. Поляков

1970 – начат выпуск автомобилей ВАЗ-2101

1977 – собран первый автомобиль LADA 4×4 (ВАЗ-2121 «Нива»)

1984 – начат выпуск автомобилей семейства LADA Samara. В истории LADA началась эпоха переднеприводных моделей

1986 – правительством СССР принято решение о создании в объединении «АВТОВАЗ» отраслевого научно-технического центра

1993 – образовано открытое акционерное общество «АВТОВАЗ»

1996 – стартовало серийное производство LADA 110

2004 – начато производство автомобилей нового семейства – LADA Kalina

2007 – выпуск нового флагмана в линейке автомобилей – LADA Priora

2008 – подписано соглашение о стратегическом партнерстве с компанией Renault

2011 – начато производства LADA Granta

2012 – выпущен первый автомобиль LADA, построенный на платформе Альянса Renault-Nissan – LADA Largus

2015 – стартовали продажи автомобиля LADA нового поколения – LADA Vesta

2016 – стартовали продажи компактного городского кроссовера LADA XRAY

2017 – расширение семейства Vesta: впервые в истории марки налажен серийный выпуск битопливного автомобиля – LADA Vesta CNG.

Стартовали продажи новых автомобилей LADA Vesta SW и LADA Vesta SW Cross

2018 – стартовали продажи LADA Vesta Cross sedan, LADA XRAY Cross и нового семейства LADA Granta

Компания сегодня

АВТОВАЗ является уникальным предприятием, это крупнейший производитель Альянса Renault-Nissan-Mitsubishi в России. Завод в г. Тольятти является одним из крупнейших автозаводов в мире и единственным в Альянсе, который выпускает по полному циклу автомобили и автокомпоненты для четырех брендов (LADA, Renault, Nissan и Datsun). 

Модельный ряд LADA представлен пятью семействами автомобилей.

Продукция 

• LADA Vesta (седан, выпускается с 2015 года, с 2017 года выпускаются LADA Vesta CNG (битопливная модификация седана), LADA Vesta SW, LADA Vesta SW Cross, с 2018 года выпускается LADA Vesta Cross)

• LADA XRAY (компактный кроссовер – выпускается с 2015 года, с 2018 года выпускается LADA XRAY Cross)

• LADA Largus (пяти- и семиместный универсал, фургон – выпускается с 2012 г. , LADA Largus Cross – c 2015 года)

• LADA Granta (новое семейство выпускается с 2018 года и представлено в кузовах седан, хэтчбек, универсал и лифтбек)

• LADA 4х4 (трехдверный универсал в производстве с 1977 года, рестайлинг 1993 год, модернизация 2009 год, 2013 год, пятидверный универсал выпускается с 1995 года, LADA 4х4 Urban – c 2014 года)

Все автомобили LADA соответствуют международным экологическим нормам Евро-5, а экспортируемые в страны ЕС –  Евро-6.

Разработки и инновации

Согласно среднесрочному плану развития, до 2026 года компания планирует выпустить восемь новых и провести фейслифтинг девяти моделей LADA. 

Состав холдинга

Производственные площади Группы расположены в г. Тольятти – АО «АВТОВАЗ» и в г. Ижевск – ООО «ЛАДА Ижевск».

Сайт: http://lada.ru

50 лет спустя: сколько, где и какие автомобили LADA в РФ?

Сегодня, 19 апреля 2020 года, исполняется 50 лет с начала производства в России автомобилей марки LADA (бывшее название «Жигули»).

В этот день в 1970 году с конвейера Волжского автозавода в Тольятти сошли первые 6 седанов ВАЗ-2101 – автомобилей, с которых, собственно, в стране началась массовая автомобилизация населения. Всего за 50 лет на АВТОВАЗе (так теперь называется бывший Волжский автомобильный завод) было выпущено около 30 млн автомобилей.

Эксперты аналитического агентства «АВТОСТАТ» в связи со столь значимым событием решили привести ряд интересных фактов. Так, по данным агентства, в России зарегистрировано 14 млн машин марки LADA (легковых и LCV, на 1 января 2020 года). Это почти каждый третий автомобиль в стране!

Самым распространенным семейством среди них является «классическое» – таких машин насчитывается в количестве 4,7 млн единиц. На втором месте находится «Самара» – автомобилей этого семейства (с учетом «Самары – 2») числится 3,2 млн экземпляров. В тройку лидеров здесь попадает и «десятое» семейство (1,5 млн шт.). Также миллионную отметку в российском парке преодолевает и LADA 4×4 (1,2 млн шт.), или «Нива».

Из более современных семейств отечественного бренда выделяется «Гранта» (930 тыс. шт.). Уже ушедшие в историю «Калина» и «Приора» представлены в нашей стране 836 тыс. и 788 тыс. машин соответственно. У других действующих семейств показатели парка еще ниже: Largus – 362 тыс., Vesta – 343 тыс. (производится на автозаводе «ЛАДА Ижевск»), XRAY – 114 тыс.

Также стоит отметить, что в рейтинге моделей лидирует LADA 2107 – на начало года в РФ было зарегистрировано 1,7 млн «семерок». И это самый распространенный автомобиль в стране! Вторую позицию занимает «шестерка» (1,4 млн шт.), а третью – уже упоминавшаяся «Нива» (1,2 млн шт.).

Средний возраст автомобилей LADA, которые есть в России, превышает 16 лет. При этом более 10% этого парка – еще не старше 5 лет (1,5 млн шт.). А свыше 30% вазовских машин было произведено уже более 20 лет назад (4,4 млн шт.). Интересно, что примерно каждый восьмой автомобиль (1,8 млн шт.) был выпущен еще во времена СССР, т.е. до 1992 года.

Больше всего автомобилей LADA в стране зарегистрировано в Краснодарском крае – 674 тыс. единиц. В Башкирии на 1 января нынешнего года насчитывалось 555 тыс. таких машин, в Московской области – 523 тыс. Самарская область, которую можно считать родиной LADA, имеет в своем автопарке 506 тыс. автомобилей этой марки. Кроме них, в десятку регионов по количеству зарегистрированных автомобилей LADA также входят Ростовская область, Татарстан, Москва, Свердловская область, Челябинская область и Дагестан. В каждом из этих субъектов РФ числится от 400 тыс. до 500 тыс. таких машин.

Быстро узнать актуальную стоимость автомобиля LADA (и не только) на рынке можно с помощью калькулятора «Оценка авто».

Кузовной ремонт LADA Largus, Vesta, Granta, XRAY, 4×4, Калина

Кузовной ремонт автомобилей Лада

Кузов автотранспортного средства наиболее подвержен внешним повреждениям. Сервис компании «ТЕХИНКОМ» выполняет кузовной ремонт разной степени сложности, возвращая его первоначальный вид.

Кузов является несущей конструкцией автомобиля, в котором устанавливаются агрегаты и элементы управления, а также перевозятся грузы и пассажиры. Несмотря на установку современных сенсоров, парковочных камер и прочих высокотехнологичных устройств, человеческий фактор остается главной причиной повреждения корпуса и деталей.

В зависимости от объема урона, полученного кузовом, выделяют три степени сложности восстановления:

1. Легкая — включает в себя демонтаж и косметический ремонт отдельных деталей Лада Веста и Гранта, выправление незначительных вмятин, локальное шпатлевание и покраску, абразивную полировку. Этот объем работ выполняется при несерьезных ударах автомобиля на малой скорости.
2. Средняя — кроме прочего в нее входит рихтовка сильно поврежденных деталей вследствие нарушения геометрии съемных элементов кузова при ДТП или неудачном маневре.
3. Тяжелая — решается вопрос о целесообразности ремонта ввиду его высокой стоимости, которая может превысить цену самого транспортного средства. В большинстве случаях, автомобиль Лада после серьезного ДТП выставляется на аукционах — разборках, которых в Москве целое множество. Если выбор пал на реставрацию, то производится полное восстановление геометрии каркаса, замена съемных деталей, остекления и прочих разрушенных элементов с последующим полным окрашиванием авто.

Что входит в кузовные работы автомобиля Лада

Сервисный центр компании «ТЕХИНКОМ» предлагает свои услуги по восстановлению авто с любой степенью повреждений. Мы выполняем местный и капитальный ремонт кузова Лада, демонтаж и рихтовку съемных элементов, малярно-кузовные и стекольные работы, доводку и полировку лакокрасочного покрытия. При крайней необходимости (или по желанию клиента) производим демонтаж старых частей с заменой на новые детали от производителя.

Кузовной ремонт всех моделей Лада 4×4, XRAY, Веста, Гранта, Калина, Ларгус

«ТЕХИНКОМ» является официальным дилером Лада, и осуществляет все виды ремонта и регулировки моделей линейки: Гранта, Калина, Ларгус, Веста, XRAY, 4×4, включая быстрое устранение вмятин, царапин и потертостей кузова.

Отличный результат, в первую очередь, достигается за счет профессионализма и усердности наших работников, их полной отдаче своему делу. Сотрудники компании имеют за плечами многолетний опыт работы в автосервисе, и регулярно проходят курсы подготовки по повышению квалификации.

Большую роль играет наличие в цехе современного оборудования, позволяющего достичь максимального уровня качества ремонта за считанные минуты. Третья составляющая успеха компании — в использовании фирменных расходных материалов, отличающихся своей долговечностью и надежностью.

Ждем вашей заявки или звонка по телефону +7 (495) 778-98-50.

АВТОВАЗ | TLT.ru — Новости Тольятти

13 августа 20:04  118

9 августа 17:17  2104

3 августа 21:03  169

28 июля 20:35  4109  3 28 июля 18:55  752  4 18 июня 12:31  626  1

30 апреля 13:45  1107

23 апреля 08:03  282

21 апреля 20:30  964

21 апреля 11:45  198

19 апреля 11:05  1051

16 апреля 17:14  356

16 апреля 15:38  717

13 апреля 15:32  490

5 апреля 16:37  461

2 апреля 13:17  591  3

30 марта 19:18  419

26 марта 16:10  406

26 марта 08:55  570

24 марта 15:42  1556

19 марта 19:45  940

19 марта 17:59  795

15 марта 20:51  930

25 февраля 17:09  717

24 февраля 13:47  261

20 февраля 09:49  451

15 февраля 15:14  736

13 февраля 10:04  1300  1

9 февраля 13:19  627

4 февраля 14:16  2486  1

4 февраля 14:10  922

4 февраля 13:17  858

Автомобили ВАЗ (LADA) | Авто Волгограда

История автомобилей Lada (ВАЗ)

Волжский автомобильный завод (ВАЗ) является самым известным российским автомобильным концерном выпустившим с конвейера такие известные автомобильные марки как: Жигули, Нива и LADA. Их главный офис расположен в Самарской области, а именно в городе Тольятти.

Закладка завода началась еще во времена СССР в 1967 году. На должности первого генерального директора советом министров СССР был назначен заместитель министра автопромышленности Поляков В.Н., Соловьев В.С. занял должность главного конструктора. Завод запустили уже в 71-м году, и ему сразу была поставлена задача, выпустить за этот год 220 000 автомобилей.

Первым автомобилем, что был создан на этом заводе, является ВАЗ-2101, по народному «копейка». Этот автомобиль был сконструирован на основе FIAT-124 и комплектовался 60 сильной рядной четверкой, которая выжимала максимальную скорость в 140 км/ч. Первоначально «копейка» рассчитывалась как народная машина, что будет способна удовлетворить потребности обычных граждан. Но от этой великой идеи в скорости отказались, и про доступность можно было забыть. Это произошло из-за различных проблем с конструированием автомобилей, которые с каждым выпуском новой модели дорожали как на дрожжах. Но, невзирая на это, спрос на автомобили был огромным, и люди выстраивались в очереди, чтобы приобрести желанный товар. Конец семидесятых годов ознаменовался выходом ВАЗ-2102 в кузове универсал и примерно в это же время конструкторы выпустили полноприводный автомобиль НИВА.

Жигули постоянно модернизировались, и уже в начале 1980-х была создана LADA, которая поступала на заграничный рынок. За время производства в советском союзе ВАЗ выпустил 9 различных моделей Жигулей. Среди всех них самыми популярными стали: ВАЗ-2106 имеющий задний привод и ВАЗ-2109 с передним приводом. Стоит отметить один интересный факт что «шестерка» благодаря своей известности производилась тридцать лет. Но эта известность постепенно начала снижаться с конца девяностых, когда в производство вышли ВАЗ-2110.

Первый универсал, что был выпушен на этом заводе, назывался ВАЗ-2102, который сразу же стал любимчиком дачников благодаря своему вместительному багажнику. Но когда ВАЗ начал производить «четверки», звание лучшего друга садовода перешло к ней.

1972 год ознаменовался для завода выпуском более современной на тот момент модели ВАЗ-2103, которую большинство водителей приняли за абсолютно новый автомобиль. Понятное дело что «тройка» стала более дорогой и престижной моделью. Но по факту это была всего лишь топовая версия ВАЗ-2101, в основу которой легла модель Фиата 124 Speciale 1968 года выпуска. Для того чтобы наладить производство этих автомобилей ВАЗу пришлось заключить соглашение с Фиат. Комплектовалась эта машина 77 сильным 1,5 литровым двигателем модели 2103.

В 76-м году концерн начал производство новой модели жигулей ВАЗ-2106, которая моментально обросла популярностью среди водителей. За основу при конструировании был взят RAT 124 Speciale выпущенный четырьмя годами ранее. Но тогда никто даже не подозревал об огромной популярности «шестерки».

Первый внедорожник ВАЗа НИВА сразу же после выхода на рынок вызвал неожиданный фурор за границей. Но при этом отечественный покупатель относился с опаской к этому автомобилю и машины расходились слабо, даже ни взирая на крупный дефицит автомобилей в то время. Зато в Познани на 53 международной выставке автомобилей НИВА была удостоена званием лучшего автомобиля и получила золотую медаль.

ВАЗ-2107 начала производится уже в 82-м году и стала более престижным автомобилем чем ВАЗ-2105. Похожая ситуация произошла некогда с шестеркой, когда ее стали считать на порядок лучшей чем тройку. Такое же событие произошло с универсалами. ВАЗ-2104 уже начиная с 1984 года, отправил на задний план «двойку», но при этом их еще вместе производили до конца 85-го года.

Конец 1984 года стал эпохальным для концерна. Именно тогда был выпущен трех-дверный хетчбек ВАЗ-2108 Спутник, более известный под названием LADA Samara. Именно благодаря этому автомобилю отечественные автостроители начали массово выпускать разнообразные модели легковушек с передним приводом.

Видео о производстве автомобилей Lada (ВАЗ)

Через три года после выхода «восьмерки» коллектив завода в третий раз был награжден почетным призом «Золотой Меркурий» за внесение огромного вклада в развитие отечественного автопрома и международного сотрудничества.

Когда же в 87-м на свет появилась «девятка» ее стали считать более престижным хетчбеком чем ВАЗ-2108 из за пяти дверей и менее вызывавшему внешнему виду. ВАЗ-21099 или Samara Forma на самом деле является обычной девяткой только выполненной в кузове четырех дверного седана.

ВТО «Авто LADA» в 1989 году получило приз международного совета торговых руководителей «Трейд Лидерз Клаб» за занятие передовых позиций в торговле и неоценимый вклад в экономическое развитие африканских стран.

С момента распада СССР этот завод, как и остальные заводы гиганты и отросли индустрии, впал в состояние глубокого кризиса. Но, в конце концов, после череды неудач и чуть ли не банкротства ВАЗу все-таки удалось переломить свое положение, и постепенно начали улучшать свои дела.

Вначале это предполагалось сделать с помощью производства автомобиля «Ока», который на протяжении десятка лет считался самым доступным потребителю малолитражным автомобилем отечественного производства. Его даже хотели номинировать на звание народного автомобиля и отводить место под производство в Елабуге. Благодаря этому автомобилю даже хотели, наконец, решить проблему с дефицитом. Но все эти надежды были разрушены и в скорости, а точнее в середине 1990-х годов ВАЗ-11113 отдали на сборку СеАЗ и КамАЗ.

После неудачи с Окой, в 1994 году концерн АвтоВАЗ презентовал новую модель ВАЗ-2110 на автомобильной выставке в Париже. А начиная с 98-го года завод начал производство универсалов с передним приводом ВАЗ-2111.

В 1996 году на выставке в Риме «технологии из России» автозавод представил публике роторно-поршневой двигатель, что предназначался для мелких самолетов. А в СКП была создана 250-я товарная «десятка».

В Московском автосалоне на выставке 1997 года были представлены такие модели 2120, 2129, НИВА с длиной базой — 2329, 2131 и спортивный автомобиль 21107. Тогда же количество созданных машин за год составило 730 000 штук.

Буквально через год ВАЗ выпускает новый автомобиль ВАЗ-2111, и в это же время десятки начали оборудоваться силовыми агрегатами на 16 клапанов. В том же 98 году мир увидела LADA Надежда, что является минивеном с дизайнерским экстерьером и наличием отдвижной двери, что находится на правом борту.

Сегодня серьезную конкуренцию отечественному автомобилестроению составляют азиатские производители. В связи с этим АвтоВАЗу приходится регулярно придумывать что-то новое, чтобы противостоять конкурентам. Именно для этого концерн согласился на совместное изготовление Опеля Астра последнего поколения. Но, не смотря на это АвтоВАЗ является самым крупным автомобильным заводом в России, и производит большую половину всех легковых автомобилей нашего производства.

В будущем ВАЗ собирается выпустить новое поколение Калины, в классе В. На данный момент производят три модели этого автомобиля в трех разных видах кузова: седан, универсал и хетчбек. Также конструкторы предполагают выпустить унифицированную под десятку платформу Калины, которая будет несколько короче оригинала. Комплектоваться она будет улучшенным двигателем объемом 1,6 литра.

Плановое ТО ЛАДА | Автоцентр Питер-Лада

Стоимость планового ТО LADA в Санкт-Петербурге

Плановое ТО LADA включает в себя проведение осмотра, диагностических процедур и устранение неисправностей, выявленных в ходе обслуживания. В зависимости от модели автомобиля могут незначительно меняться запланированные работы, при этом остается неизменным предусмотренный производителем автомобиля график проведения регламентных техобслуживаний.

Стоимость ТО автомобилей семейства LADA зависит от необходимого состава регулярных работ, пробега автомобиля и установленного порядка их проведения по времени. Промежуток между процедурами осмотра составляет 1 год. В регламенте АВТОВАЗ предусмотрено выполнение цепочки от ТО-1 до ТО-6 с внесением соответствующей отметки в сервисные документы автомобиля.

Нулевое плановое ТО LADA Гранта и Ларгус необходимо провести после пробега 2 — 3 тысяч километров, чтобы выявить:

• Посторонние шумы, признаки некорректной работы АКПП или механики;

• Отклонения и неисправности световых приборов;

• Отклонения в развале-схождении колес;

• Признаки ускоренного износа агрегатов.

В ходе этого обслуживания производится замена масла в двигателе и масляного фильтра.

 

Выберите автомобиль:

Выберите автомобильLADA GrantaLADA VestaLADA XRAYLADA LargusLADA 4x4LADA Granta 2011-2018LADA KalinaLADA Priora

Прайс-лист ТО Сводный прайс-лист ТО Записаться на сервис

Как происходит плановое техническое обслуживание

Регламент планового технического обслуживания автомобилей LADA предусматривает проведение работ по пробегу примерно 15 тысяч километров. Для планового ТО LADA Веста и других моделей семейства необходимо пригнать автомобиль в официальный сервисный центр, где его проверят с использованием диагностических стендов. В зависимости от конкретного вида обслуживания проводится проверка (диагностика) и устранение неисправностей кузова, двигателя, тормозной системы и электроники, рулевого управления. Мастера смазывают дверные петли, проверяют подвеску, устраняют люфты и заменяют перетершиеся патрубки.

Все процедуры планового ТО LADA регламентированы производителем, о проведении работ делаются отметки в сервисной карте автомобиля (кроме ТО нулевого цикла). В процессе обслуживания могут быть выявлены и устранены серьезные неисправности, приводящие к сокращению межремонтного периода. Регулярное прохождение техобслуживания позволяет снизить затраты на содержание автомобиля и продлить его эксплуатацию.

Наши преимущества

Дилерский центр «Питер-Лада» предлагает свои услуги по организации регламентного ТО автомобилей LADA всех моделей. Преимущества обращения к нам:

• Компания официально представляет производителя на территории Северо-Запада России и выполняет все необходимые работы в установленные сроки;

• Уровень цен и общая стоимость техобслуживания оптимальны для владельцев Лады любой модели;

• Для замены деталей и агрегатов имеется база легально произведенных сертифицированных запасных частей;

• Предоставляются официальные гарантии, персонал проходит регулярное обучение и подтверждает квалификацию у производителя.

Обращение к нам — это гарантия качественного добросовестного ТО машин семейства LADA и возможность сэкономить на содержании машины за счет оптимальной стоимости обслуживания.

одна платформа на всех — Авторевю

Сегодня Группа Renault представила свою очередную стратегию работы под названием Renaulution (то есть «революция Renault»). Казалось бы, прежний план был принят меньше года назад, но в июле 2020-го у компании сменился руководитель: в должность вступил Лука де Мео, перешедший из компании Seat. А как известно, новая метла по-новому метет.

В стратегии Renaulution много интересных моментов, но для нас наиболее любопытны планы, которые касаются АВТОВАЗа и бренда Лада (они входят в Группу Renault). И здесь точно намечается маленькая революция: в иерархии концерна Лада будет объединена с румынской маркой Dacia. Идеологически они близки и сейчас (оба бренда выпускают простые и недорогие автомобили), а впереди у них полная техническая унификация.

Сейчас Лада и Dacia используют четыре платформы на двоих. Все Дачии построены на тележке B0 (и ее производных), а у Лады также есть платформы Гранты, Весты и Нивы. При этом на Ладу приходится лишь четверть совокупного объема выпуска этих двух брендов. Впереди — оптимизация. По плану, к 2025 году обе марки полностью перейдут на модульную платформу CMF-B, которая уже использована для новых моделей Dacia Logan/Sandero. Общее количество моделей и типов кузова будет сокращено с 18 до 11, а совокупный объем производства превысит один миллион машин в год.

Что это значит для АВТОВАЗа? Через четыре года в Лету канут не только устаревшие Гранта и две Нивы, но и в целом удачная Веста. А собственный инжиниринг будет сводиться лишь к созданию новых «надстроек» для платформы CMF-B и адаптации машин для российских условий эксплуатации. Кстати, в плане Группы Renault марка Лада характеризуется как Rough & Tough («суровая и крепкая»).

Согласно плану Renaulution, в 2021 и 2022 годах АВТОВАЗ не представит ни одной полностью новой модели. Ближайшие премьеры назначены на 2023 год — это две модели B-сегмента (видимо, новая Гранта в двух вариантах). Еще одна B-машина запланирована на 2024 год: официально подтверждено, что это новая Нива, плюс показан новый рендер, который заметно отличается от концепт-кара трехлетней давности. А в 2025-м должна появиться Лада класса C — кроссовер. Напомним, все они будут созданы на единой реношной платформе.

Что касается марки Dacia, то в этом году на рынок выйдет серийный электромобиль Spring, по одной модели B-класса запланировано на 2022 и 2024 годы. А в 2025-м должна выйти первая Dacia класса C — тоже кроссовер. Общая цель союза Лада-Dacia — увеличение прибыли с трех до пяти миллиардов евро к 2025 году.

Обучение игре на грифе | Мир уроков игры на гитаре

Изучение грифа — это задача, которую этот урок поможет вам эффективно решить. Знаете ли вы, что гитара с 22 ладами содержит 138 нот? Это огромная задача, которая бросает вызов как начинающим, так и опытным гитаристам. Этот урок расскажет вам, почему некоторые люди учат его неправильно (неэффективно и скучно).

Почему вы должны изучать гриф

Вы должны изучить гриф по одной простой причине.Вы хотите играть быстрее!

Обычно, когда люди говорят о скорости, они говорят о физических аспектах обучения игре на гитаре. Обычно я думаю о шредерах, прокладывающих путь к безумным потокам нот. Измельчение требует много практики, но это другой тип скорости.

Когда вы учитесь играть на грифе, вы играете быстрее, потому что можете мгновенно вспомнить ноту. Мгновенный вызов позволяет как можно быстрее найти и сыграть любую ноту. Это скорость mental , которая позволяет вам решать, находить и играть быстрее.

Почему изготовление грифа не работает

Большинство гитаристов утверждают, что знают гриф, потому что могут найти любую ноту. Многие песни имеют темп 120 ударов в минуту, что составляет 2 секунды на такт.

• Вся нота = 2 секунды
• Половинная нота = 1 секунда
• Четвертная нота = 1/2 секунды
• Восьмая нота = 1/4 секунды
• Шестнадцатая нота = 1/8 секунды

Вам нужно вспоминать заметки за доли секунды! Вот почему умение найти любую заметку не работает.Без мгновенного отзыва вы не сможете успевать!

Как научиться играть на грифе

Научиться играть на грифе несложно, но требует практики. Большинство гитаристов находят эту задачу скучной, потому что они выучили ее неправильно. Вдобавок они пытаются использовать ярлыки, которые не работают! Лучший способ научиться играть на грифе — использовать несколько способов запоминания ноты. Это не только интереснее, но и эффективнее.

Ассоциации использования

Человеческий мозг запоминает с помощью ассоциаций.Когда вы играете ноту, вы думаете о ноте, которую хотите. Вы находите это на грифе. Вы слышите записку. Вы видите гриф. Все эти предметы можно связать друг с другом, чтобы сформировать многомерные упражнения. Позже я дам вам упражнения, которые объединят то, что вы видите, слышите и чувствуете, чтобы максимально повысить вашу эффективность.

Практика запоминания

Вы когда-нибудь готовились к экзамену и забыли то, что вы узнали? Когда вы попытаетесь выучить гриф, вы забудете об этом. Ваш мозг переводит вашу кратковременную память в долговременную, когда вы спите.Я рекомендую практиковаться на грифе по 10-20 минут в день, пока вы не осознаете это.

Избегайте этих методов

Вот список неэффективных или скучных способов обучения игре на грифе. Это мой список антирекомендаций.

• Не пытайтесь визуально запомнить изображение нот на грифе. Это, наверное, самый скучный метод, и вы не связываете звук
• Не пытайтесь сократить путь, изучая только лады 1–12. Лады 13+ расположены ближе друг к другу, поэтому ощущается по-другому, и они имеют более высокий тон.Мгновенный отзыв требует умственного и физического отзыва !
• Не ограничивайтесь 5 ^th и 6 ^th Многие гитаристы разучивают эти две струны и извлекают остальные ноты. Это просто недостаточно быстро.
• Не повторяйте слишком много нот за одно занятие. Большинство людей могут запомнить около 7 пунктов за один присест без особых дополнительных усилий. Как ни странно, существует семь естественных названий нот (A, B, C, D, E, F, G). Я рекомендую сначала заняться ими.

Что нужно знать перед началом практики

В этом разделе я дам вам необходимую информацию.

Нумерация строк и стандартная настройка

Струны пронумерованы от самой тонкой струны (1-я струна) до самой толстой (6-я струна). Настройка дается от 6-й до 1-й струны: E-A-D-G-B-E. Эта настройка (E-A-D-G-B-E) называется стандартной настройкой.

Ноты названы с использованием первых семи букв алфавита, однако на гитаре воспроизводится более семи высот или нот.Названия нот или буквы повторяются. Например: название банкноты
после G — A:… E-F-G-A-B-C-D-E-F-G-A-B-C…

Нумерация ладов

Лады пронумерованы от грифа к корпусу, начиная с 1. Иногда цифра 0 или буква O используется для обозначения открытой струны или струны, на которой играется без ударов ноты.

Фреттинг ноты выполняется нажатием на струну за ладом (со стороны грифа лада).

Движение грифа

Гитаристы могут перемещаться по грифу горизонтально вверх и вниз, а также вертикально поперек грифа.Это общие термины, используемые для обозначения того, как перемещать руки при игре на гитаре.

Расположение нот на грифе

В этом разделе показано, где можно сыграть каждую ноту на гитаре. Обозначения даны для полноты картины. У меня есть урок по чтению стандартных обозначений и табулатур, если вам нужна дополнительная информация.

Ноты первой струны (High E String)

Ноты второй струны (струна B)

Ноты третьей струны (G String)

Ноты четвертой струны (струна D)

5-я струна (струна)

Шестая струна (E струна)

Обозначение всех нот

Следующие обозначения и табулатура показывают полный диапазон гитары в стандартной настройке.

Некоторые ноты можно воспроизвести только в одном месте, в то время как другие можно воспроизвести максимум в пяти местах.

Упражнения по восходящей и нисходящей

Это простые упражнения, но вы хотите попробовать несколько вещей во время их выполнения.

• Скрывайте табулатуру во время игры. Показывать только обозначения (чтобы не обмануть).
• Не используйте один палец для всех заметок. Найдите как можно меньше сдвигов рук.
• Вы заметите, что я использовал четвертные ноты для B-C и E-F.Это полутона друг от друга. Я использовал половинные ноты, когда интервал составляет целый шаг (2 полутона). Это должно усилить различные интервалы.
• Произнесите ноты во время игры, чтобы связать имя с нотой.
• Наблюдайте за своей беспокойной рукой, когда вы говорите, и играйте по нотам.
• Прослушайте записи. Постарайтесь запомнить их звук вместе с чувством беспокойства в этой позе.
• Попробуйте слушать с закрытыми глазами и не отрывая глаз от ладов.
• Обратите внимание, как точки на грифе соответствуют каждой ноте.
• Используйте метроном со скоростью 60 ударов в минуту (1 секунда на удар). Каждый раз увеличивайте скорость на 20 ударов в минуту. Посмотрите, как быстро вы сможете играть чисто. Если вы становитесь небрежным, действуйте медленнее, чтобы не сформировать вредных привычек.

Ноты шестой строки по возрастанию

Я рекомендую переместить руку из открытого / первого положения в 5-ю, 10-ю, 15-ю и 19-ю позиции. Не стесняйтесь пробовать другие смены рук, чтобы изменить это.

Ноты шестой струны по убыванию

Еще раз попробуйте разные положения ручного переключения передач.

Мажорные аккорды, укорененные в 6-й струне

Ноты пятой струны по возрастанию

Ноты пятой струны по убыванию

5-я струна мажорных аккордов по возрастанию

Сыграйте эти аккорды по возрастанию, а затем по убыванию.

Прочие упражнения для восхода и спуска

Я оставлю эти на ваше усмотрение, что само по себе является отличным умственным упражнением.

• Вы заметите, что я использовал мажорные аккорды в форме ми и ля.Попробуйте сыграть последовательность диатонических аккордов в тональности C: CMaj, Dm, Em, FMaj, GMaj, Am, Bdim. Например, замените EMaj на Em. Хотя диатоническая гармония — это отдельная тема, я определяю ее для этих упражнений как аккорды, в которых используются ноты мажорной гаммы. В данном случае гамма до мажор.
• Измените аккорды на диатонические септаккорды в тональности C из форм E и A: CM7, Dm7, Em7, FM7, G7, Am7, Bm7b5.
• Поскольку аккорды состоят из третей (мажорная и малая третьи интервалы), попробуйте сыграть третями (каждую другую ноту на струне), чтобы вы знали ноты аккорда вдоль струны.Это работает для всех диатонических аккордов в тональности. Для примера возьмем ми минор 7: E- (пропустить F) -G- (пропустить A) -B- (пропустить C) -D. Ноты Em7 — это E G B D. Если вы хотите Em, пропустите последнюю ноту. Обожаю это упражнение. Он учит сразу многим нюансам музыки.

Еще упражнения

Вот лишь несколько дополнительных упражнений, которые вы можете использовать.

• Сыграйте ноту, затем сыграйте ее октаву на той же струне (на 12 ладов вверх). Повторите это для всех нот.
• Сыграйте ноту, затем сыграйте ту же ноту на соседней строке.Пример. A на 5-й струне, открытая; А на 6-й струне, 5-м ладу.
• Сыграйте ноту, затем сыграйте ее октаву на соседней струне. Пример E на 6-й струне, открытая; E на 5-й струне, 7-м ладу.
• Сыграйте ноту, затем сыграйте ее октаву на расстоянии двух струн. Пример: E на 6-й струне, открытая; E на 4-й струне, 2-м ладу. Обратите внимание, как эти октавы используются в известных вам аккордах.
• Сыграйте аккорд и определите основные ноты в этом аккорде.

Есть намного больше упражнений, поэтому я предлагаю книгу, чтобы все это организовать, чтобы вы могли быстро сосредоточиться на изучении грифа! Он содержит 159 упражнений, чтобы ваши практические занятия были свежими.Он включает в себя теорию музыки, аккорды и многое другое, поэтому вы изучаете несколько концепций одновременно. Я до сих пор использую эти упражнения, чтобы оставаться свежей. Они работают от новичков до профи. Подумайте о покупке моей книги The Secrets of Learning the Fretboard !

Последние мысли

Надеюсь, вам понравился этот урок по обучению игре на грифе. Требуется много практики, но оставаться мотивированным — проблема №1. Есть много интересных способов попрактиковаться в игре на гитаре. Разнообразные упражнения — это лучший способ сохранить свою практику свежей.Как только вы это сделаете, вы вырветесь из колеи и получите гораздо больше удовольствия от игры на гитаре!

Если этот урок вам помог, пожалуйста, поставьте лайк на моей новой странице на Facebook и подумайте о том, чтобы рассказать о том, как это помогло вам.

Флуоресцентная микроскопия с резонансным переносом энергии (FRET) — Общие понятия

Вводные понятия

Точное расположение и природа взаимодействий между конкретными молекулярными видами в живых клетках представляет большой интерес во многих областях биологических исследований, но исследованиям часто мешает ограниченное разрешение инструментов, используемых для изучения этих явлений.Обычная широкопольная флуоресцентная микроскопия позволяет локализовать флуоресцентно меченые молекулы в пределах оптического пространственного разрешения, определяемого критерием Рэлея, примерно 200 нанометров (0,2 микрометра). Однако для понимания физических взаимодействий между белками-партнерами, участвующими в типичном биомолекулярном процессе, относительная близость молекул должна быть определена более точно, чем позволяют традиционные методы оптической визуализации с дифракционным ограничением. Метод резонансной передачи энергии флуоресценции (чаще обозначаемый аббревиатурой FRET ) в применении к оптической микроскопии позволяет определять сближение двух молекул в пределах нескольких нанометров (см. Рисунок 1), расстояние, достаточно близкое для происходить молекулярные взаимодействия.

Типичные методы флуоресцентной микроскопии основаны на поглощении флуорофором света на одной длине волны (возбуждение) с последующим испусканием вторичной флуоресценции на большей длине волны. Длины волн возбуждения и излучения часто отделены друг от друга на десятки и сотни нанометров. Маркировка клеточных компонентов, таких как ядра, митохондрии, цитоскелет, аппарат Гольджи и мембраны, специфическими флуорофорами позволяет их локализовать в фиксированных и живых препаратах.Путем одновременного мечения нескольких субклеточных структур отдельными флуорофорами, имеющими отдельные спектры возбуждения и испускания, можно использовать специальные комбинации флуоресцентных фильтров для изучения близости меченых молекул в пределах одной клетки или участка ткани. При использовании этого метода молекулы, которые расположены ближе друг к другу, чем предел оптического разрешения, кажутся совпадающими, и эта очевидная пространственная близость подразумевает, что молекулярная ассоциация возможна. В большинстве случаев, однако, нормального разрешения флуоресцентного микроскопа с ограничением дифракции недостаточно, чтобы определить, действительно ли имеет место взаимодействие между биомолекулами.Флуоресцентный резонансный перенос энергии — это процесс, при котором происходит безызлучательная передача энергии от флуорофора в возбужденном состоянии ко второму хромофору в непосредственной близости. Поскольку диапазон, в котором может происходить передача энергии, ограничен приблизительно 10 нанометрами (100 ангстрем), а эффективность передачи чрезвычайно чувствительна к расстоянию между флуорофорами, измерения резонансной передачи энергии могут быть ценным инструментом для исследования молекулярных взаимодействий. .

Механизм резонансной передачи энергии флуоресценции включает донор флуорофор в возбужденном электронном состоянии, который может передавать свою энергию возбуждения соседнему акцептору хромофору без излучения посредством диполь-дипольных взаимодействий на большие расстояния. Теория, поддерживающая передачу энергии, основана на концепции рассмотрения возбужденного флуорофора как колеблющегося диполя, который может подвергаться обмену энергией со вторым диполем, имеющим аналогичную резонансную частоту.В этом отношении резонансная передача энергии аналогична поведению связанных осцилляторов, таких как пара камертонов, колеблющихся на одной и той же частоте. Напротив, радиационная передача энергии требует испускания и повторного поглощения фотона и зависит от физических размеров и оптических свойств образца, а также от геометрии контейнера и путей волнового фронта. В отличие от радиационных механизмов, резонансный перенос энергии может дать значительный объем структурной информации о донорно-акцепторной паре.

Резонансный перенос энергии нечувствителен к окружающей оболочке растворителя флуорофора и, таким образом, дает молекулярную информацию, уникальную по сравнению с той, которая выявляется с помощью зависящих от растворителя событий, таких как гашение флуоресценции, реакции возбужденного состояния, релаксация растворителя или измерения анизотропии. Основное влияние растворителя на флуорофоры, участвующие в резонансной передаче энергии, — это влияние на спектральные свойства донора и акцептора. Безызлучательный перенос энергии происходит на гораздо больших расстояниях, чем эффекты растворителя на коротких расстояниях, а диэлектрическая природа компонентов (растворителя и макромолекулы хозяина), расположенных между задействованными флуорофорами, очень мало влияет на эффективность резонансной передачи энергии, которая в первую очередь зависит от расстояние между донорным и акцепторным флуорофором.

Явление резонансной передачи энергии флуоресценции не опосредуется испусканием фотонов, и, кроме того, даже не требует, чтобы акцепторный хромофор был флуоресцентным. Однако в большинстве приложений и донор, и акцептор являются флуоресцентными, и возникновение передачи энергии проявляется в тушении донорной флуоресценции и уменьшении времени жизни флуоресценции, сопровождаемом также увеличением эмиссии флуоресценции акцептора. Эффективность процесса передачи энергии изменяется пропорционально обратной шестой степени расстояния, разделяющего молекулы донора и акцептора.Следовательно, измерения FRET могут использоваться в качестве эффективной молекулярной линейки для определения расстояний между биомолекулами, помеченными соответствующим донорным и акцепторным флуорохромом, когда они находятся в пределах 10 нанометров друг от друга.

Гипотетический пример резонансного переноса энергии флуоресценции между двумя флуорохромами, прикрепленными к противоположным концам одного и того же макромолекулярного белка, представлен на рисунке 1. В нативной конформации (рисунок 1 (а)) два флуорофора разделены расстоянием приблизительно 12 нанометров, слишком далеко для передачи энергии внутримолекулярного резонанса между флуорохромами.Однако, когда белок подвергается конформационному изменению (рис. 1 (b)), два флуорохрома сближаются гораздо ближе и теперь могут участвовать в молекулярных взаимодействиях FRET. На рисунке возбуждение донорного флуорохрома показано синим свечением вокруг желтой трехъядерной ароматической молекулы, в то время как соответствующая акцепторная эмиссия (рисунок 1 (b)) представлена ​​зеленым свечением, окружающим второй гетероциклический флуорохром справа. -ручная сторона белка.Измерения передачи энергии часто используются для оценки расстояний между участками макромолекулы и влияния конформационных изменений на эти расстояния. В экспериментах этого типа степень передачи энергии используется для расчета расстояния между донором и акцептором и получения структурной информации о макромолекуле.

Хотя резонансный перенос энергии флуоресценции часто использовался для исследования межмолекулярных и внутримолекулярных структурных и функциональных модификаций белков и липидов, основным препятствием для реализации методов FRET-микроскопии в живых клетках было отсутствие подходящих методов мечения конкретных внутриклеточных белки с соответствующими флуорофорами.Клонирование зеленого флуоресцентного белка медузы ( GFP ) и его экспрессия в самых разных типах клеток стали критическим ключом к разработке маркеров как для экспрессии генов, так и для структурной локализации белка в живых клетках. Было разработано несколько вариантов мутаций этого белка, различающихся по спектру, включая флуоресцентный белок, излучающий синий свет ( синий флуоресцентный белок , BFP ). Спектры возбуждения и излучения для нативных мутантов GFP и BFP достаточно разделены по длинам волн, чтобы быть совместимыми с подходом FRET.Рисунок 2 иллюстрирует стратегию обнаружения белок-белковых взаимодействий с использованием флуоресцентного резонансного переноса энергии и мутантных флуоресцентных белков. Если два белка, один из которых помечен BFP (донор), а другой — GFP (акцептор), физически взаимодействуют, то при возбуждении комплекса при максимальной длине волны поглощения будет наблюдаться повышенная интенсивность в максимуме эмиссии акцептора (510 нанометров). (380 нм) донора. Неспособность белков образовать комплекс не приводит к эмиссии акцептора (GFP) флуоресценции.

В сочетании с достижениями в области импульсных лазеров, микроскопической оптики и компьютерных технологий визуализации разработка методов маркировки, в которых донорные и акцепторные флуорофоры фактически являются частью самих биомолекул, позволила визуализировать динамические взаимодействия белков в живых клетках. В дополнение к исследованию взаимодействий белков-партнеров, недавние применения флуоресцентного резонансного переноса энергии включают исследования активности протеаз, изменений потенциалов мембранного напряжения, метаболизма кальция и проведение высокопроизводительных скрининговых анализов, таких как количественная оценка экспрессии генов в одиночные живые клетки.

Принципы передачи энергии резонанса флуоресценции

Процесс резонансной передачи энергии ( RET ) может иметь место, когда донорный флуорофор в электронно возбужденном состоянии передает свою энергию возбуждения соседнему хромофору, акцептору. В принципе, если спектр излучения флуоресценции молекулы-донора перекрывает спектр поглощения молекулы-акцептора и они находятся в пределах минимального пространственного радиуса, донор может напрямую передавать свою энергию возбуждения акцептору через диполь-дипольные межмолекулярные соединения на большие расстояния. связь.Теория, предложенная Теодором Фёрстером в конце 1940-х годов, первоначально описывала молекулярные взаимодействия, участвующие в резонансной передаче энергии, и Фёрстер также разработал формальное уравнение, определяющее взаимосвязь между скоростью передачи, межхромофорным расстоянием и спектральными свойствами задействованных хромофоров.

Резонансная передача энергии — это безызлучательный квантово-механический процесс, который не требует столкновения и не требует выделения тепла. Когда происходит передача энергии, молекула-акцептор гасит флуоресценцию молекулы-донора, и если акцептор сам является флуорохромом, наблюдается повышенное или сенсибилизированное излучение флуоресценции (см. Рисунок 3).Это явление можно наблюдать, возбуждая образец, содержащий как донорные, так и акцепторные молекулы, светом с длинами волн, соответствующими максимуму поглощения донорного флуорофора, и детектируя свет, излучаемый с длинами волн с центром вблизи максимума излучения акцептора. Альтернативный метод обнаружения, быстро набирающий популярность, заключается в измерении времени жизни флуоресценции донорного флуорофора в присутствии и в отсутствие акцептора.

На рисунке 3 представлена ​​диаграмма Яблонского, иллюстрирующая связанные переходы между испусканием донора и поглощением акцептора при резонансном переносе энергии флуоресценции.Абсорбционные и эмиссионные переходы представлены прямыми вертикальными стрелками (зелеными и красными соответственно), а колебательная релаксация — волнистыми желтыми стрелками. Связанные переходы показаны пунктирными линиями, что указывает на их правильное расположение на диаграмме Яблонского, если они возникли в результате опосредованных фотонами электронных переходов. В присутствии подходящего акцептора донорный флуорофор может передавать энергию возбужденного состояния непосредственно акцептору, не испуская фотон (показано синей стрелкой на рисунке 3).Получающееся в результате сенсибилизированное флуоресцентное излучение имеет характеристики, аналогичные спектру излучения акцептора.

Чтобы произошла резонансная передача энергии, необходимо выполнить несколько критериев. В дополнение к перекрывающимся спектрам излучения и поглощения донорных и акцепторных молекул, два задействованных флуорофора должны располагаться на расстоянии от 1 до 10 нанометров друг от друга. Как описано в уравнениях, выведенных Фёрстером (и обсуждаемых ниже), эффективность передачи энергии между донорными и акцепторными молекулами уменьшается в шестой степени расстояния, разделяющего их.Следовательно, способность донорного флуорофора передавать свою энергию возбуждения акцептору за счет безызлучательного взаимодействия резко снижается с увеличением расстояния между молекулами, ограничивая явление FRET максимальным радиусом разделения донор-акцептор, составляющим приблизительно 10 нанометров. На расстояниях менее 1 нанометра возможны несколько других режимов передачи энергии и / или электронов. Зависимость процесса резонансной передачи энергии от расстояния является основной основой его полезности при исследовании молекулярных взаимодействий.В исследованиях живых клеток с участием молекул, меченных донорными и акцепторными флуорофорами, резонансная передача энергии будет происходить только между молекулами, которые находятся достаточно близко, чтобы биологически взаимодействовать друг с другом.

Дополнительным требованием для резонансной передачи энергии является то, что время жизни флуоресценции донорной молекулы должно быть достаточным для того, чтобы событие могло произойти. Как скорость ( K (T) ), так и эффективность ( E (T) ) передачи энергии напрямую связаны со временем жизни донорного флуорофора в присутствии и в отсутствие акцептора.Согласно теории Фёрстера и подтвержденной экспериментально, скорость передачи энергии определяется уравнением:

KT = (1 / τD) • [R0 / r] 6

, где R (0) — критическое значение Фёрстера расстояние , τ (D) — время жизни донора в отсутствие акцептора, а r — расстояние, разделяющее донорные и акцепторные хромофоры. Критическое расстояние Фёрстера ( R (0) ) определяется как радиус разделения акцептор-донор, для которого скорость передачи равна скорости распада донора (снятия возбуждения) в отсутствие акцептора.Другими словами, когда радиус донора и акцептора ( r ) равен расстоянию Ферстера, то эффективность переноса составляет 50 процентов. На этом радиусе разделения половина энергии возбуждения донора передается акцептору за счет резонансной передачи энергии, а другая половина рассеивается за счет комбинации всех других доступных процессов, включая излучение флуоресценции.

Концептуально критическое расстояние Фёрстера — это максимальная длина разделения между донорными и акцепторными молекулами, при которой все еще будет происходить резонансная передача энергии.Значение критического расстояния обычно находится в диапазоне от 2 до 6 нанометров, что, к счастью, порядка многих размеров молекул белка. Кроме того, диапазон критических расстояний также соответствует нескольким другим биологически значимым параметрам, таким как толщина клеточной мембраны и расстояние, разделяющее сайты на белках, имеющих несколько субъединиц. Значение R (0) (в нанометрах) может быть вычислено из следующего выражения:

R0 = 2,11 × 10-2 • [

κ

2 • J (λ) • η-4 • QD] 1/6

, в котором κ -квадрат — коэффициент, описывающий относительную ориентацию в пространстве между переходными диполями донора и акцептора, Дж (λ) — интеграл перекрытия в области излучения донора. и спектры поглощения акцептора (с длиной волны, выраженной в нанометрах), η представляет показатель преломления среды, а Q (D) представляет собой квантовый выход донора.

Эффективность передачи энергии, E (T) , является мерой доли фотонов, поглощенных донором, которые передаются акцептору, и связана с расстоянием разделения донор-акцептор, r , соотношением уравнение:

r = R0 • [(1 / ET) — 1] 1/6

и E (T) вычисляется как:

ET = 1 — (τDA / τD)

, где τ (DA) — время жизни донора в присутствии акцептора, а τ (D) — время жизни донора в отсутствие акцептора.Следовательно, измеряя время жизни донорной флуоресценции в присутствии и в отсутствие акцептора (что указывает на степень тушения донора из-за акцептора), можно определить расстояние, разделяющее молекулы донора и акцептора. Во многих обычно применяемых методах эффективность передачи энергии определяется путем измерения в установившемся режиме относительной средней интенсивности флуоресценции донора в присутствии и в отсутствие акцептора (а не путем измерения времени жизни).

Таким образом, скорость передачи энергии зависит от степени перекрытия спектров между спектрами излучения донора и поглощения акцептора (см. Рисунок 4), квантового выхода донора, относительной ориентации дипольных моментов перехода донора и акцептора, и расстояние, разделяющее молекулы донора и акцептора. Любое событие или процесс, которые влияют на расстояние между донором и акцептором, будут влиять на скорость резонансной передачи энергии, что позволяет количественно оценить явление при условии, что артефакты можно контролировать или устранять.

На рисунке 4 представлены спектры поглощения и излучения голубого флуоресцентного белка ( CFP , донор) и красного флуоресцентного белка ( RFP или DsRed , акцептор) в сравнении с их потенциальным применением в качестве пара резонансного переноса энергии флуоресценции. Спектры поглощения обоих биологических пептидов показаны красными кривыми, а спектры испускания представлены синими кривыми. Область перекрытия спектров излучения донора и поглощения акцептора представлена ​​серой областью у основания кривых.Всякий раз, когда спектральное перекрытие молекул слишком сильно увеличивается, возникает явление, известное как спектральное просачивание или кроссовер , в котором сигнал от возбужденного акцептора (возникающий из возбуждающего освещения донора) и излучение донора обнаруживаются в акцепторный канал излучения. В результате получается высокий фоновый сигнал, который необходимо извлекать из излучения слабой флуоресценции акцептора.

Основная теория безызлучательного переноса энергии напрямую применима к паре донор-акцептор, разделенной фиксированным расстоянием, и в этом случае скорость передачи энергии является функцией расстояния Ферстера, R (0) , которое в свою очередь зависит от κ -квадрат, J (λ) , η и Q (D) .Если эти факторы известны, можно рассчитать расстояние между донором и акцептором. Для описания таких ситуаций, как множественные акцепторные хромофоры и распределения расстояний, требуются более сложные формулировки. В таблице 1 представлена ​​серия экспериментально измеренных критических расстояний Фёрстера, которые были установлены из спектрального перекрытия нескольких популярных пар донорно-акцепторных флуорофоров. Поскольку переменная включает выход донорного кванта и степень спектрального перекрытия, оба из которых зависят от локализованных условий окружающей среды, значения расстояния Ферстера должны определяться в тех же экспериментальных условиях, что и те, которые используются для исследования резонансного переноса энергии.

Показатель преломления среды передачи энергии обычно известен из состава растворителя или может быть оценен для конкретной макромолекулы и обычно принимается равным 1,4 в водном растворе. Квантовый выход донора определяется путем сравнения со стандартными флуорофорами с известным квантовым выходом. Поскольку Q (D) появляется как шестой корень при вычислении R (0) , небольшие ошибки или неопределенности в значении Q (D) не имеют большого влияния на расчет расстояния Ферстера.Также из-за зависимости корня шестой степени, R (0) не сильно зависит от изменений J (λ) , но интеграл перекрытия все равно должен оцениваться для каждой пары донор-акцептор. В общем, более высокая степень перекрытия между спектром излучения донора и спектром поглощения акцептора дает более высокие значения критического расстояния Ферстера.

Критическое расстояние Фёрстера для обычных пар донор-акцептор RET

Донор	Акцептор	Расстояние Ферстера (нанометры)
Триптофан	Дансил	2.1
ИАЭДАНЫ (1)	ДДПМ (2)	2,5 — 2,9
BFP	DsRFP	3,1 — 3,3
Дансил	FITC	3,3 — 4,1
Дансил	Октадецилродамин	4.3
CFP	GFP	4.7 — 4,9
CF (3)	Техасский красный	5.1
Флуоресцеин	Тетраметилродамин	4,9 — 5,5
Cy3	Cy5	> 5,0
GFP	YFP	5,5 — 5,7
BODIPY FL (4)	BODIPY FL (4)	5.7
Родамин 6G	Малахитовый зеленый	6.1
FITC	Эозин тиосемикарбазид	6,1 — 6,4
B-фикоэритрин	Cy5	7.2
Cy5	Cy5.5	> 8,0

(1) 5- (2-иодацетиламиноэтил) аминонафталин-1-сульфоновая кислота
(2) N- (4-диметиламино-3,5-динитрофенил) малеимид
(3) карбоксифлуоресцеинсукцинимидиловый эфир
(4) 4,4-дифтор-4-бора-3a, 4a-диаза-s-индацен

Таблица 1

Неопределенность в оценке фактора ориентации ( κ -квадрат) широко обсуждалась в литературе, и, несмотря на экспериментальные доказательства того, что теория Фёрстера действительна и применима к измерению расстояний, эта переменная продолжала оставаться в силе. несколько спорно.Важно понимать, что расстояния Ферстера обычно приводятся для предполагаемого значения κ -квадрат, обычно это динамически усредненное значение 2/3 (0,67). Это предполагаемое значение является результатом рандомизации ориентации донора и акцептора посредством вращательной диффузии до передачи энергии. Фактор ориентации зависит от относительной ориентации в пространстве диполя излучения донора и диполя поглощения акцептора и может находиться в диапазоне от нуля до 4. Значение 1 соответствует параллельным диполям перехода, а значение 4 соответствует диполям, которые оба являются параллельные и коллинеарные.

Из-за связи корня шестой степени с расстоянием Ферстера, изменение коэффициента ориентации от 1 до 4 приводит только к 26-процентному изменению рассчитанного расстояния, а максимальная погрешность в 35 процентов возможна, когда обычно принимаемое значение 0,67 применяется. Наиболее серьезная потенциальная ошибка возникает, если диполи ориентированы точно перпендикулярно друг другу и соответствующее значение в квадрате κ становится равным нулю. Было использовано несколько методов работы с неопределенностью, включая предположение, что существует ряд статических ориентаций, которые не изменяются в течение времени жизни флуорофора в возбужденном состоянии.Измерения анизотропии флуоресценции для донора и акцептора могут позволить определить пределы для отклонения в квадрате κ . Кроме того, использование флуорофоров с низкой поляризацией флуоресценции (из-за излучения нескольких перекрывающихся переходов) снижает неопределенность фактора ориентации. Ограничение возможных значений κ -квадрат таким образом снижает потенциальную ошибку вычисления расстояния, возможно, до 10 процентов.

Во многих случаях фактор ориентации трудно, а то и невозможно определить, а точное значение переменной часто рассматривается как непреодолимая проблема.Однако некоторые данные указывают на ограничение важности фактора в расчетах резонансного переноса энергии. Сравнение донорных и акцепторных расстояний с использованием методов резонансной спектроскопии переноса энергии и дифракции рентгеновских лучей в значительной степени подтверждает обоснованность принятия значения 0,67 для фактора (как предложено теорией Фёрстера), по крайней мере, для небольших пептидов и белков. Больше неопределенности существует для более крупных белков. Использование этого значения для фактора ориентации допустимо при предположении, что зонды донора и акцептора могут свободно совершать неограниченное изотропное движение.Дальнейшее обоснование получено из экспериментальных доказательств того, что для флуорофоров, прикрепленных одинарной или двойной связью к макромолекулам, сегментарные движения донора и акцептора имеют тенденцию приводить к динамически рандомизированным ориентациям.

Для слабосвязанных флуорохромов свободное вращательное движение вокруг одинарных связей должно позволить использовать среднее значение ориентации, но неограниченное движение молекул, связанных через несколько сайтов связывания, вероятно, не происходит. С другой стороны, крайние значения нуля и 4 для κ -квадрат требуют полной поляризации флуоресценции донора и акцептора, а это условие маловероятно.Статистические расчеты были представлены некоторыми исследователями, которые утверждают, что расстояния распределения донор-акцептор и их ориентация определяют наблюдаемое среднее расстояние. При условии, что наблюдается некоторое распределение наблюдаемого расстояния (и это не ограничивается слишком близким расположением донора и акцептора относительно R (0) ), можно надежно получить среднее расстояние между флуорофорами и оценить погрешность, обусловленную фактором ориентации. .

Зависимость фактора ориентации ( κ -квадрат) от относительной ориентации диполя излучения донора и диполя поглощения акцептора (показано на рисунке 5) дается уравнением:

κ

2 = (cos θT — 3cos θDcos θA) 2 = (sin θD sin θAcos Φ — 2cos θDcos θA) 2

, где θ (T) — угол между диполем перехода излучения донора и диполем перехода поглощения акцептор, θ (D) и θ (A) — это углы между этими диполями и вектором, соединяющим донор и акцептор, а Φ — угол между плоскостями, содержащими два переходных диполя.

Эффективность передачи энергии наиболее чувствительна к изменениям расстояния, когда расстояние между донорами и акцепторами приближается к расстоянию Ферстера ( R (0) ) для двух молекул. Рисунок 6 иллюстрирует экспоненциальную зависимость между эффективностью переноса и расстоянием, разделяющим донор и акцептор. Эффективность быстро увеличивается до 100 процентов, когда расстояние разделения уменьшается ниже R (0) , и, наоборот, уменьшается до нуля, когда r больше, чем R (0) .Из-за сильной (шестой степени) зависимости эффективности переноса от расстояния измерения расстояния разделения донора и акцептора надежны только в том случае, если радиус донора и акцептора находится в пределах расстояния Ферстера в два раза. Когда r составляет приблизительно 50 процентов от R (0) , эффективность резонансной передачи энергии близка к максимальной, и более короткие расстояния не могут быть надежно определены. Когда расстояние донор-акцептор превышает значение R (0) на 50 процентов, наклон кривой настолько пологий, что более длинные разделительные расстояния не разрешаются.

Практическое значение знания критического расстояния Ферстера состоит в том, что это значение дает представление о диапазоне расстояний разделения, которые могут быть определены с помощью FRET для данной пары датчиков (см. Таблицу 1). Поскольку измерение передачи энергии очень чувствительно к изменению расстояния, когда расстояния донор-акцептор близки к расстоянию Ферстера, приблизительные размеры целевого молекулярного взаимодействия являются наиболее важным фактором при выборе пары флуоресцентных красителей.Другие факторы, которые следует учитывать в зависимости от того, проводятся ли измерения в установившемся режиме или с временным разрешением, включают химическую стабильность, квантовый выход и время жизни распада флуорофора. Поскольку для обычных методов флуоресцентного резонансного переноса энергии не существует внутреннего эталона расстояния, расстояния, рассчитанные путем измерения эффективности переноса, относятся к расстоянию Ферстера, которое выводится из спектроскопических данных, измеренных на парах донор-акцептор.

Явление резонансной передачи энергии с помощью механизма Ферстера является сложным в некоторых аспектах, но простым и надежным по своему результирующему эффекту.Расстояния Ферстера точно предсказываются из спектральных свойств донора и акцептора, и, поскольку никаких исключений из теории еще не выявлено, можно предположить, что резонансная передача энергии происходит при любых условиях, при которых пара молекулы донор-акцептор находится в непосредственной близости. Сложность теории, описывающей перенос диполя, возникает не из-за самого механизма передачи, а из-за наличия распределений расстояний (включая неслучайные распределения) и диффузии молекул донора и акцептора.Когда предпринимаются шаги для усреднения зависимости передачи энергии от расстояния по диапазону геометрий и временных рамок, FRET представляет собой надежный метод исследования пространственного распределения между взаимодействующими молекулами.

Применение методов FRET в оптической микроскопии

Параметры конфигурации микроскопа для исследований флуоресцентного резонансного переноса энергии меняются в зависимости от требований флуорофоров, образца и режима (-ов) визуализации, но практически любой прямой или инвертированный микроскоп можно дооснастить для FRET-микроскопия (см. Рисунок 7).В общем, микроскоп должен быть оборудован охлаждаемой и усиленной системой CCD-камеры с высоким разрешением (12 бит), соединенной с качественными интерференционными фильтрами, имеющими низкие уровни перекрестных помех (минимальный уровень блокировки) и полосы пропускания, соответствующие спектрам флуорофора. Чувствительность детектора определяет, насколько узкой может быть полоса пропускания фильтра, при этом сбор данных может продолжаться с приемлемой скоростью с минимальным спектральным сквозным шумом. В большинстве случаев для получения изображений следует использовать одно дихроматическое зеркало, соединенное с колесами или ползунками фильтров возбуждения и излучения, чтобы минимизировать или исключить сдвиги изображения.

Широкопольная флуоресцентная микроскопия страдает от излучения флуорофора, возникающего выше и ниже фокальной плоскости, что приводит к получению изображений со значительным расфокусированным сигналом, что снижает контраст и приводит к ухудшению качества изображения. Эта проблема усугубляется в микроскопии FRET из-за изначально низких уровней сигнала, возникающих в результате резонансной передачи энергии. Методы цифровой деконволюции могут быть связаны с оптическим секционированием, чтобы уменьшить или исключить сигналы вдали от фокальной плоскости, но этот процесс требует больших вычислительных ресурсов и может быть недостаточно быстрым для многих экспериментов по динамической визуализации FRET.Конфокальные методы лазерного сканирования могут применяться к FRET-микроскопии для значительного улучшения латерального разрешения, позволяя собирать последовательные оптические срезы с интервалами, приближающимися к реальному времени. Основным недостатком конфокальной микроскопии является ограничение длин волн возбуждения стандартными лазерными линиями, доступными для конкретной системы, что ограничивает выбор пар флуорофора донора и акцептора в экспериментах по резонансному переносу энергии. Многофотонное возбуждение также может использоваться в сочетании с методами FRET и меньше повреждает клетки из-за задействованных более длинных волн возбуждения.Кроме того, артефакты автофлуоресценции и фотообесцвечивание образца с меньшей вероятностью возникают в ограниченном объеме возбуждения, характерном для многофотонного возбуждения.

Типичная конфигурация микроскопа, способная наблюдать живые клетки в культуре с несколькими мотивами изображения флуоресцентного резонансного переноса энергии, представлена ​​на рисунке 7. Инвертированный микроскоп для культуры тканей оснащен стандартной вольфрам-галогенной лампой на столбе для исследования и записи. Ячейки используют стандартное светлое поле, фазово-контрастное или дифференциально-интерференционное ( DIC ) освещение.Обратите внимание, что последние два метода усиления контраста можно использовать в сочетании с флуоресценцией, чтобы выявить пространственное расположение флуорофоров в клеточной архитектуре. Стандартная система CCD-камеры с охлаждением Пельтье прикреплена к тринокулярной головке микроскопа для получения широкоугольной флуоресценции и захвата изображений в светлом поле.

Эксперименты по резонансной передаче энергии проводятся с использованием мультиспектрального излучения с использованием либо широкопольного освещения (дуговая разрядная лампа), либо конфокальной сканирующей приставки в реальном времени, оснащенной высокоскоростной дисковой системой Нипкова.Луч аргонно-криптонового лазера сначала фильтруется через акустооптическое устройство с перестраиваемой длиной волны для выбора конкретных длин волн возбуждения перед прохождением к конфокальной сканирующей головке. Изображения собираются с помощью двух охлаждаемых ПЗС-камер высокого разрешения Gen III с усиленным охлаждением, считывающих отдельные каналы, и передаются в буфер на главный компьютер. Сканирование образца в боковой ( x и y ) и осевой ( z ) плоскостях позволяет собирать оптические срезы для восстановления трехмерного изображения.Различные программы обработки изображений совместимы с проиллюстрированной конфигурацией микроскопа.

Основываясь на фундаментальных принципах явления, при проведении измерений резонансного переноса энергии флуоресценции с помощью оптического микроскопа следует учитывать ряд важных практических моментов:

• Необходимо тщательно контролировать концентрации донорных и акцепторных флуорофоров. Статистически самая высокая вероятность достижения резонансного переноса энергии флуоресценции происходит, когда несколько акцепторных молекул окружают одну донорную молекулу.
• Фотообесцвечивание необходимо устранить, поскольку артефакт может изменить молекулярное соотношение донора и акцептора и, следовательно, измеренное значение процесса резонансной передачи энергии.
• Спектр излучения донорной флуоресценции и спектр поглощения акцептора должны иметь значительную область перекрытия.
• Прямое возбуждение акцептора в диапазоне длин волн, используемом для возбуждения донора, должно быть минимальным. Распространенным источником ошибок в измерениях с помощью FRET-микроскопии в установившемся режиме является обнаружение донорной эмиссии с помощью наборов акцепторных фильтров.
• Длины волн излучения как донора, так и акцептора должны совпадать с максимальным диапазоном чувствительности детектора.
• Спектры поглощения и излучения донора должны иметь минимальное перекрытие, чтобы уменьшить возможность самопереноса от донора к донору.
• Донорная молекула должна быть флуоресцентной и иметь достаточно длительное время жизни, чтобы произошла резонансная передача энергии.
• Донор должен обладать низкой поляризационной анизотропией, чтобы минимизировать неопределенности в значении фактора ориентации (-квадрат).Этому требованию удовлетворяют доноры, излучение которых происходит в результате нескольких перекрывающихся переходов возбуждения.
• При использовании методов маркировки антител не следует изменять биологическую активность реагентов, конъюгированных с донорными и акцепторными флуорохромами. Любое снижение активности серьезно повлияет на достоверность результирующих измерений резонансного переноса энергии.
• Поскольку флуоресцентный резонансный перенос энергии требует, чтобы молекулы донора и акцептора имели соответствующее дипольное выравнивание и располагались в пределах 10 нанометров друг от друга, необходимо учитывать третичную структуру реагентов, к которым присоединены молекулы.Например, когда донорно-акцепторные молекулы могут быть присоединены к различным структурным местоположениям (таким как карбокси или аминоконце) на белке, возможно, что FRET не будет наблюдаться, даже если белки действительно взаимодействуют, потому что молекулы донора и акцептора расположены на противоположных концах взаимодействующих молекул.
• Живые клетки, меченные зелеными флуоресцентными мутантами белка для исследований FRET, должны быть проанализированы с использованием традиционных иммуногистохимических методов, чтобы убедиться, что меченый белок принимает ту же внутриклеточную среду обитания и свойства, что и нативный аналог.

Чтобы феномен флуоресцентного резонансного переноса энергии предоставил значимые данные в качестве инструмента в оптической микроскопии, необходимо оптимизировать как подготовку образца, так и параметры визуализации. Выбор подходящих донорных и акцепторных зондов и способа их использования в качестве молекулярных меток является серьезной проблемой. Кроме того, как только стратегия маркировки, которая разрешает передачу энергии, была разъяснена, широкий спектр методов может быть использован для выполнения самого измерения.Большинство количественных исследований флуоресцентной микроскопии проводится путем измерения интенсивности флуоресцентного излучения. Обнаружение FRET на основе интенсивности флуоресценции обычно достигается путем отслеживания изменений относительных величин интенсивности излучения на двух длинах волн, соответствующих донорному и акцепторному хромофорам. Когда условия подходят для возникновения резонансного переноса энергии флуоресценции, увеличение эмиссии акцептора ( I (A) ) сопровождается одновременным уменьшением интенсивности эмиссии донора ( I (D) ).

Хотя изменение относительной интенсивности излучения донора или акцептора можно рассматривать как показатель резонансного переноса энергии, обычно используется отношение двух значений, I (A) / I (D) , как мера FRET. Величина отношения зависит от среднего расстояния между парами донор-акцептор и нечувствительна к различиям в длине пути и объеме, доступном для возбуждающего светового луча. Любое состояние образца, которое вызывает изменение относительного расстояния между парами молекул, приводит к изменению соотношения испускания донора и акцептора.Следовательно, FRET можно наблюдать в микроскопе путем преимущественного возбуждения донорного флуорофора и детектирования повышенного излучения взаимодействующего акцепторного флуорофора, сопровождаемого уменьшением флуоресценции донора, вызванным гашением из-за передачи энергии. Измерение FRET с использованием подхода мониторинга интенсивности называется установившимся режимом флуоресцентным резонансным переносом энергии.

Подходящие донорные и акцепторные зонды выбираются на основе их спектральных характеристик поглощения и излучения.Для максимальной резонансной передачи энергии спектр излучения донора должен существенно перекрывать спектр поглощения акцептора. Кроме того, должно быть минимальное прямое возбуждение акцепторного флуорофора в максимуме возбуждения донора, и не должно быть значительного перекрытия излучения между донором и акцептором в области длин волн, в которой происходит излучение акцептора. На практике может быть сложно идентифицировать пары донор-акцептор, удовлетворяющие этим требованиям.Ситуация часто осложняется тем фактом, что имеющиеся в продаже наборы флуоресцентных фильтров не полностью эффективны в пропускании только желаемых длин волн, и может передаваться небольшой процент света за пределами проектной полосы пропускания. Если не используются очень хорошо охарактеризованные и контролируемые системы экспрессии, может быть трудно определить точную концентрацию донорных и акцепторных флуорофоров. Дополнительные корректировки могут также потребоваться для автофлуоресценции, фотообесцвечивания и фоновой флуоресценции.

Типичное исследование внутриклеточной белковой ассоциации в живой культуре клеток проиллюстрировано на рисунке 8 для событий, связанных с апоптозом, физическим процессом гибели клеток, возникающим в результате сложного каскада последовательных взаимодействий. Генные продукты, непосредственно участвующие в цепи событий, могут быть помечены путем слияния с соответствующими членами семейства флуоресцентных белков (в данном случае BFP и GFP) для совместной экспрессии в одной и той же клетке, чтобы исследовать специфические ассоциации с помощью FRET.Белки, участвующие в апоптозе, взаимодействуют внутри митохондрий и демонстрируют постепенное снижение связывания по мере того, как происходит запрограммированная гибель клеток. Таким образом, изображение излучения донора (рис. 8 (а)) содержит только флуоресценцию от белков, меченных BFP, в то время как соответствующий профиль излучения акцептора (рис. 9 (b)) иллюстрирует сигналы, обусловленные белками, меченными GFP (и некоторый вклад от белков, меченных GFP). донорская эмиссия). Фильтр FRET (рис. 8 (c)), как описано ниже, выявляет флуоресценцию, полученную в результате резонансного переноса энергии между двумя белками

Среди факторов, которые потенциально могут повлиять на точность измерений резонансного переноса энергии флуоресценции в целом, некоторые из них очень специфичны. к оптическому микроскопу.Основной целью микроскопических исследований является получение изображений с высоким разрешением, и это требует особого внимания к качеству и характеристикам оптических фильтров, используемых для спектрального различения длин волн поглощения и излучения донора и акцептора. Чтобы максимизировать отношение сигнал / шум (без вредного воздействия на образец или исследуемый процесс), необходимо тщательно сбалансировать интенсивность и время воздействия возбуждающего света с концентрацией донорных и акцепторных флуорофоров и детектора. эффективность.Если концентрация донорно-акцепторных флуорофоров чрезмерна, может произойти самотушение, влияющее на точность измерений FRET. Фотообесцвечивание является проблемой всех флуорофоров и может влиять на соотношение донор-акцептор, изменяя измерения флуоресценции. Избыточная интенсивность освещения также может повредить образцы, особенно содержащие живые клетки или ткани.

Метод, известный как донорский фотообесцвечивающий резонансный перенос энергии флуоресценции ( pbFRET ), который использует процесс фотообесцвечивания для измерения FRET, часто применяется при исследовании фиксированных образцов.Основанный на попиксельном анализе, этот метод был применен для измерения отношений близости между белками клеточной поверхности, меченными моноклональными антителами, конъюгированными с флуорофором. Фотообесцвечивание FRET основано на теории, согласно которой флуорофор чувствителен к фотоповреждению только тогда, когда он находится в возбужденном состоянии. Статистически только небольшая часть молекул находится в возбужденном состоянии в любой момент времени, и поэтому флуорофоры с более длительным временем жизни флуоресценции имеют более высокую вероятность фотоповреждения и демонстрируют более высокую скорость фотообесцвечивания.

Экспериментальные доказательства, подтверждающие эту концепцию, продемонстрировали, что время фотообесцвечивания флуорофора обратно пропорционально времени его жизни в возбужденном состоянии. Возникновение резонансной передачи энергии снижает время жизни флуоресценции молекулы донора, эффективно защищая ее от фотообесцвечивания. Расчеты pbFRET основаны на уменьшении скорости фотообесцвечивания донора по сравнению с измеренной для донора в отсутствие резонансной передачи энергии. Измерение фотообесцвечивания в исследованиях FRET требует относительно длительного периода времени и поэтому наиболее применимо к образцам фиксированных клеток, в которых временные данные не важны, а влияние фотообесцвечивания на функцию клеток не является проблемой.В некоторых отношениях методика фотообесцвечивания доноров менее сложна, чем измерение сенсибилизированного излучения, хотя подгонка постоянных времени к кривым фотообесцвечивания, включающим несколько компонентов, представляет некоторые дополнительные трудности.

Эффективность передачи энергии также может быть определена с помощью методов фотообесцвечивания акцептора , в которых изменение в тушении эмиссии донора измеряется путем сравнения значения до и после селективного фотообесцвечивания молекулы акцептора.Анализ изменения интенсивности флуоресценции донора в одних и тех же областях образца до и после удаления акцептора имеет то преимущество, что требует подготовки только одного образца, и напрямую связывает эффективность передачи энергии с флуоресценцией как донора, так и акцептора.

Точное измерение резонансного переноса энергии флуоресценции в микроскопе требует компенсации всех потенциальных источников ошибок. Был разработан простой метод корректировки обнаружения донорной флуоресценции с помощью фильтра эмиссии акцептора и флуоресценции акцептора с фильтром эмиссии донора (из-за кроссовера или спектрального просвечивания).Метод также корректирует зависимость FRET от концентраций донорных и акцепторных флуорофоров. Стратегия измерения, которая требует минимум спектральной информации, использует комбинацию из трех наборов фильтров и может быть легко реализована. Наборы фильтров донора, FRET и акцептора предназначены для выделения и максимизации трех конкретных сигналов: флуоресценции донора, флуоресценции акцептора, относящейся к FRET, и флуоресценции непосредственно возбужденного акцептора, соответственно. На практике три разных образца, содержащие только донор, только акцептор, и донор, и акцептор, исследуются с каждым из трех наборов фильтров, и полученные данные обрабатываются арифметически для корректировки кроссовера и неконтролируемых изменений концентраций донор-акцептор.

На рисунке 9 представлены схематические иллюстрации кроссовера (спектральное просачивание) и перекрестных помех фильтра, двух существенных проблем, которые необходимо преодолеть, чтобы получить количественные результаты в экспериментах по флуоресцентному резонансному переносу энергии. Кроссовер или просачивание проявляется в перекрытии спектра излучения донорной флуоресценции с полосой пропускания интерференционного фильтра эмиссии акцептора на рисунке 9, в результате чего сигнал эмиссии донора (нежелательные длины волн) проходит через эмиссионный фильтр.Напротив, перекрестные помехи фильтра описывают минимальный уровень затухания (блокировки) в определенном диапазоне двух фильтров, установленных вместе последовательно, и вызывают беспокойство при согласовании фильтров возбуждения и излучения для наборов флуоресценции. Дихроматические зеркала часто включают в оценку перекрестных помех комбинаций флуоресцентных фильтров. Хотя два эмиссионных фильтра редко устанавливаются на световом пути одновременно, спектры объединены на рисунке 9, чтобы одновременно проиллюстрировать обе концепции.Обратите внимание, что два спектра фильтра (синяя и красная кривые) представляют коэффициент пропускания света интерференционными фильтрами, тогда как кривая излучения донора (зеленый) представляет собой график зависимости интенсивности от длины волны.

Дополнительные факторы, которые потенциально могут привести к значительным ошибкам, также требуют исправления при использовании методов измерения FRET в установившемся режиме. Кроме того, желателен тщательный контроль концентрации донорного и акцепторного флуорофора. Определения концентрации флуорофора можно частично избежать за счет применения измерений флуоресценции с временным разрешением , которые обеспечивают метод получения среднего времени жизни без точного знания концентраций доноров.Метод позволяет количественно определять расстояние разделения донор-акцептор и основан на измерениях времени жизни донора в присутствии и в отсутствие акцептора. Измерение спада интенсивности флуоресценции как функции времени проясняет динамику излучения молекулы в возбужденном состоянии, и, следовательно, может быть получена более подробная информация о природе донорно-акцепторного взаимодействия. Графические графики спада интенсивности иллюстрируют усредненные по времени детали процесса затухания флуоресценции (см. Рисунок 10 (а)), которые не разрешаются при использовании методов устойчивого состояния.Измерения, показывающие одно и то же значение для среднего времени жизни, когда регистрируется как интенсивность в установившемся режиме, нормированная на поглощение, могут соответствовать существенно разным формам кривых затухания на графиках данных с временным разрешением, указывая на различия в участвующих межмолекулярных процессах.

Время жизни флуоресценции ( τ ) флуорофора — это характерное время, в течение которого молекула находится в возбужденном состоянии перед возвращением в основное состояние. Представляя затухание флуоресценции в упрощенной единственной экспоненциальной форме после короткого импульса возбуждающего света, интенсивность флуоресценции как функция времени ( t ) задается уравнением:

I (t) = I0 exp (-t / τ )

, где I (0) — начальная интенсивность излучения флуоресценции сразу после импульса возбуждающего света, а I (t) — интенсивность флуоресценции, измеренная в момент времени t .Время жизни флуоресценции ( τ ) определяется как время, необходимое для уменьшения интенсивности до 1 / e от ее начального значения (приблизительно 37 процентов от I (0) ; Рисунок 10 (a)), и составляет величина, обратная константе скорости затухания флуоресценции из возбужденного состояния в основное.

Основным общим преимуществом измерений FRET с временным разрешением по сравнению с установившимся режимом является то, что расстояние разделения донор-акцептор может быть нанесено на карту с большей количественной точностью.Частично это происходит из-за того, что время жизни флуоресценции не зависит от локальной интенсивности или концентрации и в значительной степени не зависит от фотообесцвечивания флуорофоров. Однако времена жизни флуоресценции очень чувствительны к среде флуорофора, и даже молекулы со сходными спектрами могут проявлять разные времена жизни в разных условиях окружающей среды. Поскольку рассеяние не влияет на время жизни флуорофора, измерения изменения времени жизни могут предоставить информацию, которая конкретно связана с локальными молекулярными процессами.

Срок службы флуорофора может быть изменен множеством переменных в локальном микроокружении, включая такие факторы, как гидрофобность, концентрация кислорода, ионная сила других компонентов среды, связывание с макромолекулами и близость к молекулам акцептора, которые могут истощать возбужденное состояние. состояние за счет резонансной передачи энергии. Значительным практическим преимуществом является то, что измерения времени жизни могут служить абсолютными индикаторами молекулярных взаимодействий и не зависят от концентрации флуорофора.

Два общих метода, обычно используемых для измерения времени жизни флуоресценции, классифицируются как во временной области ( импульсный , см. Рисунок 10 (a)) и в частотной области (также называемый с фазовым разрешением ; рисунок 10 (б)) методы. При измерении срока службы во временной области используются источники света с импульсным возбуждением, а время жизни флуоресценции получают путем прямого измерения сигнала излучения или регистрации с помощью счета фотонов. Подход с частотной областью использует синусоидальную модуляцию источника возбуждающего света (полученную из импульсных или модулированных лазерных систем), а время жизни определяется по фазовому сдвигу и глубине демодуляции сигнала флуоресцентного излучения.Каждый из этих подходов к визуализации времени жизни флуоресценции имеет определенные преимущества и недостатки, и оба широко применяются в традиционной широкопольной, конфокальной и многофотонной микроскопии.

На рисунке 10 показаны схематические диаграммы, представляющие методы временной и частотной области для определения времени жизни флуоресценции. В подходе во временной области (рис. 10 (а)) образец возбуждается коротким импульсом лазерного света, длительность которого намного короче, чем время жизни возбужденных частиц, и измеряется экспоненциальный профиль затухания как функция времени.Затухание флуоресценции обычно является моноэкспоненциальной функцией для одного флуорофора, но может иметь гораздо более сложный характер, если возбужденное состояние имеет многочисленные пути релаксации, доступные в окружающей среде. Синусоидально модулированный свет от лазера непрерывного действия, соединенного с акустооптическим модулятором, используется для возбуждения флуорофора в экспериментах в частотной области (рис. 10 (b)). Результирующее флуоресцентное излучение модулируется синусоидально на той же частоте, что и возбуждение, но сопровождается фазовым сдвигом и уменьшением глубины модуляции.В случае однократного экспоненциального затухания время жизни флуоресценции можно рассчитать, определив либо степень фазового сдвига ( φ ), либо коэффициент модуляции ( M ), используя уравнения, представленные на рисунке 10 (b). Если два значения идентичны, затухание флуоресценции действительно состоит из одной экспоненциальной функции. Когда присутствует более одного флуоресцентного вещества (или один флуорофор находится в сложной среде), фазовый сдвиг и время жизни модуляции следует оценивать в широком диапазоне частот.

Метод измерения времени жизни флуоресценции во временной области в основном основан на подсчете одиночных фотонов и требует системы детектирования с достаточным временным разрешением для сбора почти 100 процентов фотонов, генерируемых каждым импульсом возбуждения. Хотя методы с фазовым разрешением относительно менее требовательны в исполнении, они, как правило, не так чувствительны, как метод подсчета фотонов. Когда фазовая модуляция используется для разрешения сложных времен жизни мультифлуорофоров, длительное время воздействия повреждающего возбуждающего освещения может оказаться чрезмерным для некоторых образцов, а также может не обеспечить достаточного временного разрешения для процессов с живыми клетками.Предпочтительный метод зависит как от информации, необходимой для исследования, так и от типа исследуемого образца.

Измерения времени жизни флуоресценции оказались чувствительным индикатором FRET и имеют особые преимущества при исследованиях живых клеток из-за независимости измерений времени жизни от таких факторов, как концентрация и длина светового пути, которые трудно контролировать в живых образцах. Основное преимущество выполнения FRET-исследований с помощью измерения времени жизни флуоресценции заключается в том, что можно различать перенос энергии даже между донорно-акцепторными парами с аналогичными спектрами излучения.Когда время жизни флуоресценции измеряется напрямую (в отличие от использования значений в установившемся состоянии), определение FRET возможно без фотодеструкции донорных или акцепторных флуорофоров. Поскольку FRET уменьшает время жизни флуоресценции донорной молекулы за счет передачи энергии акцептору, прямое сравнение времени жизни донора в присутствии акцептора ( τ (DA) ) с временем жизни в отсутствие акцептора ( τ ( D) ), позволяет вычислять значение эффективности FRET ( E (T) ) для каждого пикселя изображения.

В зависимости от метода измерения времени жизни флуоресценции требуют, чтобы образец подвергался воздействию либо высокочастотных повторяющихся импульсов возбуждающего света, либо непрерывного синусоидально модулированного света. В исследованиях с живыми клетками всегда необходимо оценивать эффект интенсивного освещения. Независимо от метода, эталонное время жизни донора без акцептора должно быть определено в экспериментальных условиях, идентичных условиям измерения донор-акцептор.Одним из способов достижения этого с одним образцом является измерение времени жизни только донора после фотообесцвечивания акцептора после эксперимента по передаче энергии.

Выводы

В биологических исследованиях наиболее распространенными применениями резонансного переноса энергии флуоресценции являются измерение расстояний между двумя участками макромолекулы (обычно белка или нуклеиновой кислоты) или исследование взаимодействия in vivo между биомолекулярными объектами.Белки могут быть помечены синтетическими флуорохромами или иммунофлуоресцентными флуорофорами, которые служат донором и акцептором, но достижения в генетике флуоресцентных белков теперь позволяют исследователям маркировать определенные целевые белки с помощью множества биологических флуорофоров, имеющих разные спектральные характеристики. Во многих случаях аминокислота триптофан используется в качестве внутреннего донорного флуорофора, который может быть связан с любым количеством внешних зондов, выступающих в качестве акцептора.

Если макромолекулы помечены одним донором и акцептором, а расстояние между двумя флуорохромами не изменяется в течение времени жизни возбужденного состояния донора, то расстояние между зондами можно определить по эффективности передачи энергии в установившемся состоянии. измерения, как описано выше.В случаях, когда расстояние между донором и акцептором колеблется вокруг кривой распределения, например, белковые сборки, мембраны, одноцепочечные нуклеиновые кислоты или развернутые белки (см. Сценарии, представленные на рисунке 11), FRET все еще можно использовать для изучения явлений, но предпочтительны измерения срока службы с временным разрешением. Некоторые биологические применения, которые попадают в оба случая, показаны на рисунке 11, включая конформационные изменения, диссоциацию или гидролиз, слияние мембраноподобных липидных везикул и взаимодействия лиганд-рецептор.

Хотя для измерения резонансного переноса энергии флуоресценции в оптическом микроскопе доступны различные методы, ни один из них не лишен недостатков. Некоторые методы требуют более сложных и дорогостоящих инструментов, в то время как другие основаны на предположениях, которые необходимо тщательно проверять. Некоторые подходы подходят для фиксированных образцов, но не могут применяться к системам живых клеток, в то время как другие методы должны включать значительные корректирующие вычисления или алгоритмы анализа данных.Однако несомненно, что FRET-анализ показывает большие перспективы для дальнейшего развития полезности и объема биологических приложений. В последние годы произошли драматические улучшения в инструментарии, особенно в отношении методов с временным разрешением.

Измерения времени жизни флуоресценции, которые раньше выполнялись крайне сложно, теперь поддерживаются зрелыми пикосекундными и наносекундными технологиями. Успехи в разработке флуоресцентных зондов позволили получить более мелкие и более стабильные молекулы с новыми механизмами прикрепления к биологическим мишеням.Были также разработаны флуорофоры с широким диапазоном времен жизни в собственном возбужденном состоянии, и значительные усилия прилагаются к развитию большего разнообразия генетических вариаций флуоресцентных белков. Совершенно новые классы флуоресцентных материалов, многие из которых меньше, чем предыдущие флуорофоры, и позволяют оценивать молекулярные взаимодействия на меньших расстояниях разделения, обещают улучшить универсальность мечения и привести к новым применениям метода FRET.

Соавторы

Брайан Херман и Виктория Э.Centonze Frohlich — Департамент клеточной и структурной биологии, Научный центр здравоохранения Техасского университета, 7703 Floyd Curl Drive, San Antonio, Texas 78229.

Joseph R. Lakowicz — Центр флуоресцентной спектроскопии, Департамент биохимии и молекулярной биологии, Университет Мэриленда и Институт биотехнологии Университета Мэриленда (UMBI), 725 West Lombard Street, Baltimore, Maryland 21201.

Thomas J. Fellers and Michael W.Дэвидсон — Национальная лаборатория сильного магнитного поля, 1800 г. Ист. Поль Дирак, доктор, Университет штата Флорида, Таллахасси, Флорида, 32310.

Понимание ладов и износа ладов

Состояние ваших ладов будет определять как хорошо играет твоя гитара. Каждый раз, когда вы прижимаете струны к лады, трение между ними тонко изменяет форму ладов, вызывая их изнашивать. Со временем этот контакт металла с металлом может привести к образованию струны. погремушка и интонация.Величайший повреждение ладов вызвано капо, особенно под простые струны.

---

Износ ладов — это нормальный побочный продукт игры на вашем инструменте. Как гитаристу важно знать, как оценивать повреждения ладов, и понимать, какие варианты у вас есть для их исправления. Большой вопрос: могу ли я отремонтировать лады или пора их заменить? Давайте исследуем предмет, начиная с самого ладового провода.

Из чего сделаны лады?

Хотя провод часто называют «никелевым серебром», на самом деле он не содержит серебра.Скорее, он обычно состоит из 18 процентов никеля, 80 процентов меди и небольшого количества других материалов, таких как цинк, свинец и кадмий. Действительно хорошая проволока для ладов содержит больше цинка и меньше меди. Один из моих любимых брендов — Jescar, и их формула NS состоит из 62 процентов меди, 18 процентов никеля и 20 процентов цинка. Поскольку он тверже, чем традиционный лад, он служит дольше.

Другой вариант — нержавеющая сталь. С нержавеющей сталью очень сложно работать, но она служит значительно дольше, чем традиционные лады.Однако лады из нержавеющей стали имеют высокую цену. Большинство мастеров берут более чем вдвое больше, чтобы повторно натереть гитару из нержавеющей стали, потому что это почти разрушает их инструменты, а работа занимает гораздо больше времени. В конечном итоге это может быть идеальным решением для вашей гитары, поскольку вам, возможно, больше никогда не придется менять лады!

Какого размера лады?

Рис. 1. Проволока лада измеряется по ширине (A) и высоте (B) коронки, а также по размеру зазубрины (C) и глубине выступа (D).

Fretwire бывает разных размеров и форм. Рис. 1 иллюстрирует четыре элемента, которые определяют конкретный стиль ладовой проволоки. Это ширина и высота короны , размер зубца и глубина хвостовика .

Корона — это открытая часть лада. Когда вы трогаете ноту, вы прижимаете струну к самому верху короны. Как ряд крючков, зубцы прикрепляют лад к грифу. Ширина зазубрины определяет ширину прорези лада, а хвостовик определяет глубину прорези лада — i.е. насколько далеко лада проникает в гриф.

Размер и форма каждого из этих четырех элементов специально разработаны для различных игровых предпочтений и типов гитар. Ширина короны может варьироваться от сверхузкой (0,053 дюйма) до сверхбольшой (0,18 дюйма). Высота лада может быть от 0,032 дюйма до 0,060 дюйма. Ширина зубцов и глубина хвостовика также варьируются от 0,019 дюйма до 0,040 дюйма.

Все эти размеры имеют конкретное назначение и являются важными факторами при выборе лада.Например, более широкие лады могут дать более сильный звук, но по мере износа интонация гитары «смещается» дальше, чем на узких ладах. Но и у узкой проволоки есть свои недостатки: узкие лады не вызывают такого смещения интонации, но изнашиваются быстрее, чем широкие лады.

Высокие лады прослужат дольше, прежде чем потребуется их замена. Однако я не рекомендую их тем, кто играет с сильным хватом. Если вы крепко сжимаете гриф во время игры или используете каподастр, струны будут резко натягиваться во время игры.С другой стороны, более короткие лады изнашиваются быстрее (особенно если вы используете каподастр) и их нужно менять чаще.

Размер зубцов и хвостовика оказывает сильное влияние на гриф гитары, и если вы решите установить новые лады, очень важно использовать правильный размер. Если зазубрины и хвостовик слишком узкие или неглубокие для прорезей, лады не будут надежно сидеть на грифе. Это заставляет их подниматься, когда погода меняется, и дает неровные лады и много гудящих или мертвых нот.Когда зазубрины и хвост слишком широкие, они могут треснуть и расколоть гриф или даже привести к перекосу шеи. В случае смычка вам придется перебрать гитару.

Подведем итог: гриф должен иметь лады правильного размера, подходящие для грифа и гитариста. В противном случае вы получите очень дорогой бардак!

Можно ли отремонтировать вмятины на ладах?

Вмятины всегда создают проблемы с ладами.Но означает ли обнаружение вмятин, что вам нужно заменить лады, или это вариант повторной коронки?

Может быть любым, и ответ зависит от глубины вмятины. Когда вмятины глубокие, вашему технику придется удалить слишком много материала с и ладов, чтобы правильно отремонтировать проблемные. Когда высота лада ниже 0,038 дюйма и на нем есть глубокие ямки и вмятины, есть вероятность, что перезарядка лада уместна.

Рис. 2. Помятый и изъеденный лад вызывает интонационные проблемы, создает дребезжание струн и препятствует плавным изгибам струн.

Посмотрите на Fig. 2 и обратите внимание на глубокие ямки на этих ладах. Эти вмятины слишком глубоки для ремонта, поэтому лады необходимо заменить.

Рис. 3. Плоский лад также создает проблемы с хрипом и интонацией.

Вмятины и ямки — не единственная причина для замены ладов. Еще одна причина — плоские пятна на ладах. Чтобы лад работал правильно, он должен иметь куполообразную корону. Если корона плоская, как в Рис. 3 , это вызовет дребезжание струн и проблемы с интонацией.Как и вмятины и ямки, если лад имеет плоскую коронку и слишком короткий, его необходимо заменить.

Рис. 4. Восстановление лада специализированным инструментом.

Если лады достаточно высокие, чтобы их можно было починить, их сначала выравнивают, а затем снова венчают. Чтобы выровнять лад, ваш техник шлифует и шлифует лады до одинаковой высоты. Это оставляет лады с плоской короной. Следующим шагом является повторная коронка лада, удаляя материал с его сторон до тех пор, пока коронка не станет узкой точкой соприкосновения струны. Рис.4 . Это очень кропотливый процесс, и требуются годы практики, чтобы развить необходимые навыки — определенно работа для профессионала.

Что значит повторный лад?

Рис. 5. Полный ре-лад дает гитаре новую жизнь.

В ре-ладе заменены все лады грифа. Процесс очень точный и требует дорогих инструментов и большого мастерства. Основные шаги включают разборку гитары, удаление всех старых ладов, строгание грифа, округление грифа, очистку прорезей для ладов, установку новых ладов, а затем их выравнивание и повторную коронку, очистку грифа и полировку ладов, а также окончательная сборка гитары Рис.5 .

И это всего лишь базовый обзор процесса. Есть еще много-много шагов — достаточно, чтобы заполнить всю книгу. Перетяжка — дело дорогое и трудоемкое, но, как правило, оно того стоит.

На протяжении многих лет у меня были клиенты, которые предпочли заменить старый гриф с болтовым креплением новым, вместо того, чтобы делать выбор в пользу замены лада. Это может быть отличным выбором, но будьте осторожны — почти каждый новый гриф требует уровня лада и повторной коронки. Большинство заводов по производству гитарных деталей не тратят время, как у мастера, чтобы убедиться, что лады выровнены.Так что имейте в виду, что к тому времени, когда вы заплатите за новый гриф и дополнительную резьбу, вы могли бы заново перетянуть исходный гриф и получить некоторые оставшиеся изменения!

А как насчет частичного рефрета?

Иногда достаточно просто заменить несколько ладов, а не все. Обычно это предпочтительнее для грифа, который изношен только на первых шести или семи ладах и имеет ровный гриф. Если гриф в хорошем состоянии, а остальные лады достаточно высокие, частичный ре-лад — отличный способ сэкономить деньги.Не все гитары подходят для этой операции. Если на грифе есть изгибы или волны, требуется полный повторный лад.

Капо — это четырехбуквенное слово.

Капо — злейший враг лады. Конечно, я люблю капо, потому что люблю лепить! Если бы никто не использовал капо, мой доход от лепнины упал бы как минимум на 60 процентов. Чем больше вы используете каподастр, тем больше вреда он наносит ладам. Когда каподастр сжимает струны, он разбивает струны о лады, и это намного сильнее, чем если бы вы играли аккорд.В результате лады начинают сглаживаться, на них появляются ямки и вмятины. Это отличная новость для гитариста, но не для игрока.

Чтобы избежать ненужного повреждения ладов «каподастром», я предлагаю вам использовать каподастр с регулировкой натяжения. Многие капо просто прижимают струны к грифу, не предлагая возможности отрегулировать натяжение. Если вы используете каподастр с регулировкой натяжения, вы можете зажать устройство с достаточной силой, чтобы предотвратить дребезжание струн, но при этом уменьшить дополнительный износ ладов.

Еще одно большое преимущество использования капо с регулируемым натяжением зажима: это поможет избежать проблем с настройкой по сравнению с нерегулируемым капо. На рынке есть несколько отличных капо, которые уменьшат повреждение ладов и проблемы с настройкой, в том числе капо Planet Waves Dual Action и все различные модели Shubb. Если ваш каподастр не предлагает регулировку натяжения, купите такую, которая есть. Это сэкономит вам кучу денег на резьбе.

[ Обновлено 10.08.21 ]

Из статей вашего сайта

Статьи по теме в Интернете

Что такое лад на гитаре

Поддерживается считыватель Red Diamond Audio.Когда вы совершаете покупку по ссылкам на нашем сайте, Мы можем получать партнерскую комиссию. Прочтите ПАРТНЕРСКОЕ РАСКРЫТИЕ.

Лады — это тонкие металлические полоски, закрепленные на той стороне шеи гитары, где находятся струны. Они используются для обозначения места ноты, сыгранной на гитаре. Однако области между двумя полосами также обычно называют ладами.

Лады расположены по длине шеи гитары и в начале ее корпуса. Последовательные лады поднимают ранее сыгранную ноту на полтона.Поскольку на грифе гитары 12 ладов, гитаристы могут играть всю гамму, начиная с игры на открытой струне и заканчивая нажатием на двенадцатый лад.

Игроки могут играть на одном из ладов, прижимая струну к гитаре в этом месте. Это уменьшает вибрирующую длину струны до длины между мостом и ладом рядом с тем, на который прижимается и между ним и мостом. Математика, лежащая в основе размера лада и его расстояния от моста, гарантирует, что соотношение расстояний двух последовательных ладов всегда будет одинаковым.Так устроены лады для работы на большинстве современных гитар. Это делает интонацию гитары ровной. Другими словами, это означает, что каждый лад производит полутон, когда на него нажимается струна. Однако есть много инструментов с неодинаковым темперированием.

Рекомендуемое ЧТЕНИЕ: Сколько стоит установка гитары

Гитары обычно ладят фанатскими ладами. Эти лады параллельны друг другу и перпендикулярны грифу гитары.Однако используются и другие ладовые установки. У одного из них есть зубчатые лады. Гриф становится зубчатым, когда вся или часть дерева между ладом удалена. Это может помочь игрокам легче сгибать или вибрировать струну, потому что струна не касается шеи гитары. Помимо веерных и зубчатых ладов есть еще и толстые лады. Эти лады намеренно шире, чтобы они могли изменять изгиб и служить дольше.

Есть определенные проблемы, связанные с гитарными ладами.Одна из них заключается в том, что лады начинают изнашиваться, когда игроки используют гитару в течение длительного времени. В большинстве случаев гитара нуждается в накладке ладов, что означает, что лады необходимо отполировать и вернуть в исходное положение в случае смещения. Однако, если они не подлежат ремонту, лады придется заменить на новые.

Изношенные лады могут вызывать жужжание лада или нежелательный жужжащий звук, издаваемый при нажатии струны на лад. Это происходит, когда лады изношены или порваны, и обычно их легко исправить.Однако жужжание может быть специально добавлено во время игры.

Лады

лучше всего работают, когда гитара оседает, гайка и натяжение струн правильно отрегулированы. Игроки решают, как лучше всего расположить и манипулировать этими элементами. Это помогает им добиться желаемого звукового эффекта. Также важно правильно ухаживать за гитарой, чтобы не повредить лад.

Отъезд: лучшие акустические гитары

Еженедельная тренировка

: как использовать гармоники для придания текстуры вашей игре

Из выпуска Acoustic Guitar за март / апрель 2019 г. | ДЖЕФФ ГАНН

---

Если вы когда-нибудь обращали внимание на партии акустической гитары в таких песнях, как «Roundabout» группы Yes или «Black Mountain Side» Led Zeppelin, то вы, несомненно, знакомы с перезвонами. гармоники.Эти звонкие ноты называются естественными гармониками и производятся в определенных узлах или местах на открытой струне, разделяя ее на равные части.

Ряд гармоник — естественная, арфа, перкуссия и щепотка — можно использовать на гитаре в сочетании с нотами с традиционным ладом и открытыми струнами для создания красивых эффектов и текстур. Многие гитаристы включают естественные гармоники в переходные отрывки между вокальными фразами или фрагментами песни, но научившись играть все виды гармоник — и комбинируя их по-разному, — откроют новые возможности выражения на акустической гитаре.

На этом уроке вы узнаете, как создается каждый тип гармоники, как он обычно обозначается и как его можно использовать для добавления текстурного интереса к вашей игре.

WEEK ONE

Естественная гармоника получается при легком расположении пальца для фреттинга прямо над проволокой лада , а не между ладами, как при обычном фреттинге. Естественные гармоники чаще всего воспроизводятся на 12-м, седьмом и пятом ладах, создавая высоту звука на октаву, октаву плюс пятую часть и две октавы, соответственно, над открытыми струнами.(Реже гармоники воспроизводятся на четвертом и девятом ладах.)

Начните с пробования некоторых гармоник на 12-м ладу (, пример 1, ), так как их легче всего воспроизвести. Вы можете использовать любой палец, но я рекомендую использовать рукоять для третьего пальца. Помните, что не следует слишком сильно нажимать — не давите на струну (и), как при трении. Если вы правильно играете на гармониках, у вас должен получиться великолепный перезвон. Пример 2 вводит в игру ударенные гармоники на 12-м и седьмом ладах, создавая аккорды Em7 и Em7 / B.Опять же, используйте безымянный палец вашей раздражающей руки для создания гармоник и играйте, как обычно.

В примере вы найдете другой общий подход к естественным гармоникам. Здесь они перемежаются с резкими нотами и открытыми струнами, чтобы обрисовать прогрессию Dadd9 – Em. Сыграйте безымянным пальцем гармонику 12-го лада в такте 1, а указательным пальцем — гармонику седьмого лада в следующем такте. После того, как вы проработаете примеры на этой неделе, попробуйте поэкспериментировать с гармониками самостоятельно во всех местах грифа.

Совет для новичков № 1

При игре на естественных гармониках помещайте ладовые пальцы непосредственно над грифом, а не между ладами. И попробуйте исследовать естественные гармоники в местах, отличных от ладов 5, 7 и 12.

НЕДЕЛЯ ВТОРАЯ

Гармоники арфы, также известные как искусственные гармоники, отличаются от естественных гармоник тем, что они основаны, скорее, на ладовых нотах. чем открытые струны. Кантри- и джаз-гитаристы Чет Аткинс и Ленни Бро были известны своим мастерским и широким использованием этого гармонического типа.Вы можете создать гармонику арфы, взяв любую ладовую ноту и указательным пальцем вашей руки слегка коснувшись струны на 12 ладов выше, опять же прямо над струной, взяв струну большим или другим доступным пальцем. (Гармоники арфы также могут воспроизводиться на пять или семь ладов выше ладовой ноты, но это менее распространено.) В табулатуре ладовая нота указывается как обычно, в то время как расположение гармоники арфы показано в скобках справа.

Пример 4 иллюстрирует типичную последовательность аккордов в тональности соль мажор — G – Am – C – G —
, созданную полностью с искусственными гармониками.Чтобы сыграть эту фигуру, используйте на ладу основные аккорды барре. Удерживайте каждую форму аккорда на время ее такта, позволяя всем нотам звенеть вместе, пока вы играете гармоники арфы на 12 ладов выше. Играйте так, чтобы каждая нота звучала четко и чисто.

Сохраняйте это расстояние в 12 ладов в Пример 5 , в котором вы будете играть ту же прогрессию, что и Ex. 4, но с другим паттерном игры, а также с интересным сочетанием гармоник арфы и ладовых нот. Теперь попробуйте поэкспериментировать с гармониками арфы над своими любимыми последовательностями аккордов.

Совет для начинающих №2

Яркий способ украсить любой барре-аккорд — это арпеджио, используя комбинацию ладовых нот и гармоник арфы, используя пример 5 в качестве эталона.

ТРЕТЬЯ НЕДЕЛЯ

Хотя это может показаться невозможным, вы можете играть аккорды целиком, используя гармоники арфы. Это основная цель упражнений на этой неделе. Чтобы сыграть Пример 6 , основанный на прогрессии Am11 – Gm11, начните с запрета всех шести струн на пятом ладу указательным пальцем.Сыграйте первые четыре ноты, как вы выучили на прошлой неделе, производя гармоники арфы на 12 ладов выше указательным пальцем руки и выбирая их большим пальцем. Затем — и вот самая сложная часть — одним непрерывным движением вниз, от струны 6 к струне 1, сыграйте гармоники указательным пальцем, одновременно выбирая их большим пальцем.

Для второго такта переместите такт вниз на 3 лад и сыграйте первые четыре ноты так же, как и в предыдущем такте.Но на этот раз сыграйте аккорд на доле 3 в противоположном направлении, от струны 1 к струне 6, выбирая гармоники безымянным пальцем, а не указательным.

Теперь я хотел бы показать вам, как играть некоторые ударные гармоники — важную технику таких новаторских акустических гитаристов, как Майкл Хеджес, Каки Кинг и Энди Макки. В примере 7 я использую эти гармоники, чтобы украсить небольшую прогрессию в тональности ми минор. Это естественные гармоники, воспринимаемые точно так же, как на первой неделе.Перкуссионный аспект исходит от руки медиатора — ударьте большим пальцем по струнам, чтобы сыграть гармоники, создавая приятный звук, похожий на барабанный. (Обратите внимание, что в видео на повторе я играю гармоники на 19-м ладу аккорда Bm11. Гармоники в этом месте звучат на той же высоте, что и на седьмом ладу.)

Тэп-гармоники, также используемые Hedges и др. — интересная вариация гармоник арфы. Как и гармоники арфы, они основаны на ладовых нотах. Но, как следует из названия, они выражаются постукиванием — или молотком — а не ковырянием.Чтобы сыграть тэп-гармонику, начните с ладовой ноты и посмотрите на ноту на 12 (семь или пять) ладов выше на той же струне. Затем средним пальцем выбирающей руки сильно ударьте прямо по ладовой струне верхнего лада и быстро уберите средний палец со струны, звучая гармонично. Пример 8 показывает чередующиеся гармоники в контексте аккордового этюда ре минор. Не забывайте как можно дольше удерживать каждую форму аккорда рукой.

Совет для новичков № 3

После того, как вы научитесь воспроизводить тэп-гармоники на отдельных нотах, как в примере 8, попробуйте их на полных аккордах.Например, сформируйте аккорд G barre в третьей позиции и, указав указательным пальцем руки над всеми шестью струнами, ударьте по струнам на 15-м ладу.

НЕДЕЛЯ ЧЕТВЕРТАЯ

---

Получите подобные истории в своем почтовом ящике

---

В Примере 9 вы найдете отрывок из начала моей композиции «Candle Lanterns» для гитары соло. новообретенная техника гармоники арфы для использования в более расширенном отрывке. (Чтобы бесплатно скачать нотацию для всей пьесы, посетите jeffgunnmusic.com.) Чтобы воспроизвести этот пример, держите указательный палец вашей раздражающей руки на пятом ладу на всем протяжении. Не торопясь, точно воспроизведите каждую гармонику арфы, соблюдая 12-ладовое соотношение между каждой ладовой нотой и ее гармоникой. Кроме того, внимательно слушайте, чтобы убедиться, что гармоники звучат на той же громкости, что и выбранные ладовые ноты, и что все звучит плавно.

Теперь, когда вы провели четыре недели с гармониками всех типов, не забывайте продолжать исследовать их в своей музыке.Из-за этого ты станешь более интересным гитаристом.

Совет для новичков №4

Попробуйте придумать новые аккорды, используя как гармоники, так и ладовые ноты. Например, если вы остановите до восьмого лада на струне 6 указательным пальцем и безымянным пальцем остановите гармоники на струнах 5–1 на 12-м ладу, вы получите красочный аккорд Cmaj13.

ПЕРЕЙДИТЕ НА СЛЕДУЮЩИЙ УРОВЕНЬ

Пинч-гармоники чаще всего ассоциируются с искаженными электрогитарами и такими музыкантами, как Билли Гиббонс из ZZ Top, но их также можно использовать для извлечения неожиданных звуков из акустической гитары.Чтобы сыграть пинч-гармонику, используйте плоскую педаль, добавив немного мякоти большого пальца к атаке медиатора, чтобы получился визжащий звук. В показанном здесь примере рифф пентатоники ля минор (A C D E G) украшен пинч-гармониками.

Джефф Ганн — автор серии « Скрытые звуки: откройте для себя свой собственный метод игры на гитаре », а также гитарист и музыкальный руководитель Эммануэля Джала. Его альбом Sonic Tales выйдет в этом году. jeffgunnmusic.com

---

Здесь можно найти другие отрывки из популярной серии Weekly Workout для акустической гитары Acoustic Guitar .

---

Эта статья впервые появилась в мартовском / апрельском выпуске журнала Acoustic Guitar за март / апрель 2019 года.

Полное руководство по нотам на гитаре

Вам нужна помощь с гитарными нотами? Вы пришли в нужное место. Хотите ли вы научиться импровизировать потрясающие соло, играть блестящие классические этюды или что-то среднее между ними, изучение того, где искать ноты на гитаре, является жизненно важным шагом в вашем музыкальном путешествии.

В этом полном руководстве мы поделимся всем, что вам нужно знать о гитарных нотах, гитарных струнах и интервалах.

Гитарные ноты: полное руководство

Как работают гитарные струны

Чтобы научиться играть на гитаре, необходимо понимание основных механизмов и частей гитары.

Проще говоря, гитара работает, разрывая воздух вокруг струн, создавая вибрацию. Затем эта вибрация усиливается полой камерой гитары и гитарным мостом для создания звуков, которые вы слышите.

Скорость и глубина вибрации струны влияют на высоту звука, исходящего от гитары.

Электрогитары работают аналогичным образом, но вместо звука, вибрирующего через полую камеру, звуки струн, вибрирующих относительно бриджа, усиливаются внешним динамиком. Электрогитары сами по себе очень тихие.

Струны не производят большого шума, если не подключен усилитель, потому что звук струны не имеет полой камеры, в которую можно попасть.

У традиционной гитары шесть струн, каждая из которых отвечает за отдельную ноту. Ширина струны влияет на количество вибрации, производимой струной, что влияет на звучание каждой ноты.

Длина струны также имеет значение. Вы можете заметить, что, например, мандолина имеет более высокий тон, чем традиционная акустическая гитара. Это связано с тем, что струны короче, и поэтому звуку требуется меньше времени для прохождения.

Лады, которые будут подробно рассмотрены ниже, могут помочь вам изменить высоту ноты или изменить ноту струны на совершенно другую.

Ноты на гитаре подвижны и конкретны. Открытая струна на хорошо настроенной гитаре всегда будет одной и той же нотой, но нажатие ладов вниз для изменения расстояния между струной и мостом может полностью изменить результирующий звук.

Гитарные струнные ноты

Ноты на гитаре создаются струнами гитары.

Когда вы держите гитару, самая толстая струна, струна E, находится в верхней части гитары. Нота E — самая глубокая нота.

Остальные струны постепенно становятся тоньше, а высота нот становится выше. Они отвечают за ноты A, D, G, B и E соответственно.

Самая тонкая струна, которая находится внизу гитары, когда вы ее держите, отвечает за ноту E, которая находится на две октавы выше нижней ноты E.

Как вы могли заметить на своей гитаре, на шее гитары также есть отметины. Эти маркеры указывают на разные лады на гитаре. У вашей гитары может быть от 16 до 24 ладов.

Когда вы играете на струне, не нажимая на лад, это называется открытым аккордом. Каждый лад представляет собой полшага музыкальной гаммы.

Чтобы сыграть более высокую ноту, независимо от струны, на которой вы играете, ваши руки должны быть помещены на лад ближе к мосту гитары. Если вы волнуетесь на отметке второго лада на гитаре, низкая E превращается в фа-диез, который часто обозначается как F #.

Сосредоточившись на нижней струне ми, удерживая первый лад, вы получите фа, а удерживая второй лад, вы получите фа #; на третьем ладу будет G, а на четвертом — G #.Седьмой лад на нижней струне E будет воспроизводить ноту B, а восьмой лад — ноту C.

Этот процесс можно повторить для каждой из оставшихся пяти строк.

Как выучить гитарные ноты

Для начинающего гитариста приведенная выше информация может показаться сложной. Помните: рок-звезды, профессиональные сессионные музыканты и даже учителя музыки начинали там же, где и вы.

Хорошая новость, однако, заключается в том, что если вы сможете овладеть гитарными нотами и получить глубокое понимание того, как они работают, вы на правильном пути к истинному пониманию теории музыки и способности играть песни, которые слышите на них. радио на твоей гитаре.Итак, теперь вы, вероятно, задаетесь вопросом о том, как лучше всего научиться играть на гитаре. Вот несколько лучших вариантов.

Частные уроки

Научиться играть на музыкальном инструменте непросто, особенно для тех, кто никогда раньше не брал в руки этот инструмент. Гитара, в частности, может показаться запутанной, но на самом деле это простой инструмент для игры. Когда ученик поймет основы, это, пожалуй, самый приятный инструмент.

Чтобы изучить основы, в том числе анатомию гитары, студентам лучше всего обучаться у частного инструктора.Частный инструктор может предложить инструкции и объяснения, необходимые студентам, чтобы по-настоящему понять структуру гитары.

Это важная основа для понимания того, как работают ноты на гитаре и как они работают вместе для создания аккордов, последовательностей аккордов и, в конечном итоге, песен / blog / basic-guitar-chords-easy-songs-beginners.

Мнемонические устройства

Чтобы начать учить гитарные ноты, вам необходимо их запомнить.

Для этого вы можете вернуться в прошлое, когда вы впервые были в гимназии.В какой-то момент вы, вероятно, использовали мнемонические устройства, чтобы запомнить правила грамматики или планеты в солнечной системе.

Проще говоря, мнемонический прием — это метод, который помогает вам вспомнить что-то, добавляя к нему схему рифм или фразу.

Когда дело доходит до нот на гитаре, струны развиваются как E, A, D, G, B, E. Некоторые профессиональные музыканты используют мнемонический прием: «Эдди съел динамит, прощай, Эдди».

Мнемонические устройства могут помочь вам запомнить названия каждой ноты, но для того, чтобы это было действительно полезно, вам нужно запоминать их, держа перед собой гитару.

Проигрывание каждой ноты при ее чтении вслух, возможно, лучший способ изучить основы. Специалисты предлагают начинать с открытых заметок. Как вы знаете, открытая нота — это просто игра на струне без раздражения.

Интервалы запоминания

Струны гитары настраиваются с интервалом в четверть, начиная с самой нижней струны.

Это означает, что следующая более высокая струна на 5 полутонов выше предыдущей. Это верно для всех наборов строк, за исключением отношения между третьей и второй строкой, которое представляет собой третий интервал (4 полутона) вместо четвертого интервала.

Начните с определения и запоминания всех интервальных аппликатур в пределах октавы, которые подходят для практической игры на гитаре.

Например, глядя на диаграмму слева, найдите все As. Вы можете играть ля на пятом ладу струны ми, на открытой струне ля, на седьмом ладу струны ре, на втором ладу струны соль и т. Д.

Когда вы дойдете до аппликатуры пятого интервала, у вас будет три практических варианта формы:

• Та же струна / 7 ладов вверх
• Следующая более высокая струна / 2 лада вверх
• Пропуск струны / 3 лада вниз

Не забывайте компенсировать настройку третьего интервала между третьей и второй струнами всякий раз, когда вы используете или перекрещиваете вторую струну.

Когда вы почувствуете себя комфортно с визуализацией всех возможных аппликатур в пределах октавы, пора исследовать те же самые интервалы, но в обратном порядке. На этот раз давайте начнем с первой ноты на первой струне и снизим высоту тона, используя те же интервальные аппликатуры, но в обратном порядке. Не забывайте придерживаться практических приемов, которые вы можете использовать в своей игре.

Следующим шагом будет исследование интервальных аппликатур, превышающих октаву. Вы можете использовать следующую ноту более высокой или более низкой октавы в качестве точки привязки, чтобы помочь вам визуализировать, куда вам нужно двигаться.

Это само по себе потребует много терпеливой практики и визуализации. Если вы визуально обучаетесь, может действительно помочь диаграмма гитарного грифа, подобная той, что изображена на картинке. Вы можете использовать эту таблицу для практики, даже если у вас нет гитары.

Практика

Это может показаться клише, но теперь, когда у вас есть базовое понимание нот на гитаре и того, как все они работают вместе, лучший шаг к овладению этими базовыми концепциями — это практика.

Эксперты рекомендуют смотреть на ноты и играть каждую из них, чтобы вы могли лучше понять, как звучит каждая нота. Также специалисты предлагают выполнять нотные упражнения с помощью электрического тюнера, прикрепленного к гитаре. Тюнер — это небольшое устройство, которое подключается к грифу гитары и измеряет тон каждой ноты.

В основном используется для того, чтобы помочь игрокам настроить гитару, это также отличный инструмент для обучения. Это поможет вам понять, как должна звучать каждая нота при правильной настройке гитары, а также поможет понять, как ноты на гитаре связаны со струнами, на которые играют.

Не забывайте получать удовольствие, разучивая гитарные ноты! Когда вы выходите из личного урока, вам не следует просто откладывать гитару до следующей недели. Вместо этого идите домой и получайте удовольствие от того, что вы узнали.

Попробуйте разные гитарные ноты, следите за своими любимыми песнями и попытайтесь выработать ноты, которые чаще всего используются в вашей любимой музыке. Это не только позволит вам глубже оценить искусство игры на гитаре, но и сделает вашу практику увлекательной.

Фото Эли Кристмана, мак

Меган Л. — писательница и музыкант, живущая в Сан-Диего. Она любит поддерживать независимых артистов и каждый день узнавать больше о музыке. Меган работает в TakeLessons с ноября 2011 года. Google+ Меган Л.

Акустическая гитара

Стандартной настройкой для струн гитары будет E2, A2, D3, G3, B3, E4, относящийся к равному темперированному набору нот, основанному на A440Hz. Обычно они нумеруются в порядке убывания (т.е., E4 называется строкой 1). Струны настроены на четверть друг от друга, за исключением большого третьего интервала между струнами 2 и 3. Вот основная процедура настройки гитары: Настройте струну 5 (A2) на 110 Гц с помощью электронного метронома или камертона и т. Д. Настройте струну 6 (E2), нажав ее на ладу 5 (A2) и сопоставив эту высоту с высотой звука открытой струны 6 (A2). Настройте струну 4 (D3), нажав на струну 5 на ладу 5 (D3) и сопоставив эти высоты тона. Настройте струну 3 (G3), нажав на струну 4 на ладу 5 (G3) и сопоставив эти высоты тона. Настройте струну 2 (B3), нажав на струну 3 на ладу 4 (B3) и сопоставив эти высоты тона. Настройте струну 1 (E4), нажав на струну 2 на ладу 5 (E4) и сопоставив эти высоты тона. Если вам повезло, ваша гитара теперь может быть настроена. Если лады гитары настроены на одинаковый темперамент), то 5-й лад равен 5 полутонам или равной темперированной музыкальной четверти.Эта частота должна равняться частоте открытой струны следующей струны вверх по высоте. Их можно сопоставить «нулевым биением», отрегулировав струну так, чтобы не было слышно ни одной биения. После настройки на нулевую долю вы должны быть в состоянии щипать нижнюю струну (удерживаемую на пятом ладу), а верхняя струна должна начать вибрировать под действием вибраций в бридже. Неопределенное окончание на шаге 7 выше вызвано рядом сложностей «реального мира». Одна из сложностей заключается в том, что верхние гармоники нижних струн не обязательно будут звучать в гармонии с верхними струнами, даже если их основы настроены на предписанный интервал.Одна из причин заключается в том, что идеальные гармоники струнных инструментов создают проблемы с интонацией с одинаковым темпераментом. Если вы исследуете интервалы в центах для гармонической последовательности, вы обнаружите, что верхние гармоники расстроены с одинаковым темпераментом, причем 7-я гармоника особенно плохая. Итак, одна проблема возникает, если гармоники идеальны, но другая возникает, если они слишком далеко отклоняются от идеальных гармоник. Из-за жесткости басовых струн их верхние резонансы имеют тенденцию быть резкими по сравнению с точными кратными целыми числами (гармониками).Верхние гармоники нижних струн могут биться с верхними струнами, создавая неприятный звук. Иногда это приводит к процессу, который в настройке фортепиано называется «растяжением на октаву». Верхние ноты инструментов настроены немного резче, чтобы лучше звучать при игре на нижних струнах. Измерения и расчеты, необходимые для оптимизации настройки, нецелесообразны для простого процесса настройки, поэтому на практике вы следуете базовой процедуре, подобной описанной выше, а затем настраиваете настройку на слух, чтобы получить наиболее приятное сочетание. Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт Поиск: Рубрики Бизнес Вложения Готовый Идеи Покупатели Разное Расчеты С нуля Советы Средний Франшиза